負(fù)載生物多酚的多重自乳化給藥體系的構(gòu)建及評(píng)價(jià).pdf

1、天然多酚類是主要存在于植物體的皮、根、葉、殼和果肉中的次級(jí)代謝物。天然多酚不僅具有抗氧化作用，還具有抑制水腫、血管生成、骨質(zhì)疏松、炎癥，抗腫瘤，促進(jìn)凋亡和抑制，增加毛細(xì)血管抗性，保護(hù)心血管、視網(wǎng)膜及控制體重等作用。然而部分天然多酚，尤其是表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)和白藜蘆醇，由于存在穩(wěn)定性差，溶解度低，生物利用度低等缺陷而限制其廣泛應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)物理包裹技術(shù)是克服這類天然多酚應(yīng)用瓶頸的具有應(yīng)用前景的解決方案之一。其中基于多重乳

2、液和自微乳的獨(dú)特結(jié)構(gòu)和物理化學(xué)特性，兼有二者優(yōu)點(diǎn)的多重自乳化給藥系統(tǒng)(SDEDDS)逐漸引起了研究者的廣泛關(guān)注。隨著的研究逐漸深入，發(fā)現(xiàn)SDEDDS雖然可有效提高BCSⅢ類活性物的生物利用度，但是傳統(tǒng)的SDEDDS均用于口服且為液態(tài)，且劑型單一，通常是封裝在膠囊中或?yàn)榭诜?，存在制劑成分與包材存在相容性問(wèn)題，以及長(zhǎng)期貯存后可能發(fā)生泄漏或分層的風(fēng)險(xiǎn)，所以研發(fā)更為豐富體系滿足實(shí)際需要成為了一個(gè)重要的研究課題。
　　本文研究制備不同應(yīng)用

3、途徑的負(fù)載生物多酚（EGCG和白藜蘆醇）的多重自乳化給藥體系，包括口服和皮膚用的體系，同時(shí)選擇兩種不同的固化策略彌補(bǔ)傳統(tǒng)液態(tài)體系的不足。具體內(nèi)容如下:
　　(1)我們首先考察乳液穩(wěn)定指數(shù)、自乳化水平和包封率等因素，優(yōu)化得到負(fù)載EGCG和硫辛酸(ALA)的固態(tài)SDEDDS的處方。共聚焦掃描電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡觀察顯示固態(tài)SDEDDS在水溶液中通過(guò)緩慢的攪拌即可形成水包油包水(W/O/W)乳液的多重包裹結(jié)構(gòu)。光穩(wěn)定性研究顯示固態(tài)SD

4、EDDS可有效保護(hù)EGCG，當(dāng)固態(tài)SDEDDS同時(shí)負(fù)載EGCG和ALA時(shí)，EGCG的光穩(wěn)定性會(huì)進(jìn)一步增加，EGCG的保留率高到80％以上。長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示固態(tài)SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個(gè)月以上。H2O2誘導(dǎo)3T3細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型顯示固態(tài)SDEDDS水分散液可明顯減輕氧化應(yīng)激引起的損傷，而且負(fù)載活性物的SDEDDS沒(méi)有出現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒性。細(xì)胞抗氧化活性實(shí)驗(yàn)(Cellular Antioxidant Activity，CAA)

5、顯示EGCG和ALA通過(guò)固態(tài)SDEDDS包裹后依然可以較好的保留抗氧化活性。體外釋放研究顯示固態(tài)SDEDDS的緩釋與十六十八醇比例呈高度相關(guān)。體外經(jīng)皮行為研究顯示固態(tài)SDEDDS分散液可明顯增加活性物在皮膚的內(nèi)的滯留量，而不透過(guò)皮膚進(jìn)入接受池內(nèi)，而且固態(tài)SDEDDS分散液可持續(xù)的釋放活性物透過(guò)角質(zhì)層進(jìn)入表皮內(nèi)。
　　(2)這部分重點(diǎn)研究并制備了口服用固態(tài)EGCG-SDEDDS，利用偽三元相圖和模擬體外釋放優(yōu)化處方。共聚焦掃描電子顯

6、微鏡和光學(xué)顯微鏡觀察顯示固態(tài)EGCG-SDEDDS在水溶液中通過(guò)緩慢的攪拌即可形成W/O/W乳液的多重包裹結(jié)構(gòu)。長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示固態(tài)EGCG-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個(gè)月以上。熱重分析結(jié)果表明分析固態(tài)SDEDDS的溫度不宜超過(guò)95℃，X射線衍射和差示掃描量熱結(jié)果均表明固態(tài)脂質(zhì)-單硬脂酸甘油酯為高度穩(wěn)定的β型，固態(tài)SDEDDS的脂質(zhì)基質(zhì)在室溫下呈固態(tài)。固態(tài)EGCG在SDEDDS中以單個(gè)分子的形式溶解在內(nèi)水相或非結(jié)晶形式存在于脂

7、質(zhì)中。體外細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型結(jié)果表明固態(tài)EGCG-SDEDDS主要以依賴小窩介導(dǎo)的內(nèi)吞穿過(guò)Caco-2細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)的。SD大鼠藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)表明EGCG經(jīng)SDEDDS包裹后可明顯提高血藥峰濃度(Cmax)和口服生物利用度。
　　(3)為了進(jìn)一步增加活性物的包裹性和含量，以極性有機(jī)溶劑（如甘油，乙氧基二甘醇，丙二醇等）取代內(nèi)水相，通過(guò)傳統(tǒng)的兩步法制備制備負(fù)載白藜蘆醇的皮膚用非水SDEDDS（trans-res-SDEDDS）。通過(guò)熒光顯微

8、鏡可以觀察到trans-res-SDEDDS在水溶液中通過(guò)緩慢的攪拌即可形成水包油包油（O/O/W）乳液的多重包裹結(jié)構(gòu)。傅里葉紅外光譜結(jié)果表明白藜蘆醇被完全包裹進(jìn)入非水SDEDDS中，并沒(méi)有發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng)。體外釋放研究trans-res-SDEDDS可緩慢持續(xù)釋放12小時(shí)，累積釋放可達(dá)到80％以上。穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示EGCG-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存三個(gè)月以上。體外經(jīng)皮行為研究顯示trans-res-SDEDDS可明顯增加活性物在

9、皮膚的內(nèi)的滯留量，而不透過(guò)皮膚進(jìn)入接受池內(nèi)，并可持續(xù)的釋放活性物透過(guò)角質(zhì)層進(jìn)入表皮內(nèi)。
　　(4)以trans-res-SDEDDS為基礎(chǔ)，制備同時(shí)負(fù)載EGCG和白藜蘆醇的口服用液態(tài)非水SDEDDS(L-SDEDDS)。進(jìn)一步通過(guò)考察固體粒子的吸附能力和吸附后的溶出度，篩選得到固態(tài)非水SDEDDS(S-SDEDDS)。掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)S-SDEDDS顆粒多孔結(jié)構(gòu)消失。光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)S-SDEDDS在水溶液中通過(guò)緩慢的攪拌

10、即可形成多重包裹結(jié)構(gòu)。傅里葉紅外光譜結(jié)果表明EGCG與白藜蘆醇被完全包裹進(jìn)入體系中，且沒(méi)有出現(xiàn)任何化學(xué)反應(yīng)。X射線衍射結(jié)果顯示活性物在體系中是以非晶體形式包括無(wú)定型或單個(gè)分子的形式分散在體系中。穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示S-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個(gè)月以上。SD大鼠藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)表明EGCG和白藜蘆醇經(jīng)SDEDDS包裹后可明顯提高Cmax和口服生物利用度。安全性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示SDEDDS在促進(jìn)活性物吸收的同時(shí)沒(méi)有對(duì)小腸粘膜和Caco-2細(xì)胞