具有細(xì)胞色素P450 3A藥酶抑制作用的口服自微乳化給藥系統(tǒng)的構(gòu)建及機(jī)制研究.pdf

1、藥物的口服吸收是一個(gè)復(fù)雜的過程，其包括生理因素和制劑因素（如溶解度、組織滲透性、劑型等）。然而，對(duì)于那些在體內(nèi)易被細(xì)胞色素P4503A （CYP 3A）所氧化代謝的藥物，抑制CYP 3A的生物轉(zhuǎn)化活性，是提高這類藥物口服生物利用度的有效途徑。CYP 3A在肝臟及腸道中含量豐富，在成人肝臟和小腸中分別占CYP總量的30％和70％以上，它參與50％以上藥物的Ｉ 相代謝，明顯降低了CYP 3A 底物藥物口服生物利用度。
　　 有文獻(xiàn)報(bào)

2、道，易被CYP 3A 酶代謝的藥物與CYP 3A 抑制劑共同服用，這些藥物的口服生物利用度會(huì)大大增加。然而，絕大多數(shù)CYP 3A 抑制劑具有一定的藥理活性和臨床適應(yīng)癥，這些物質(zhì)在體內(nèi)需要達(dá)到一定的濃度才能發(fā)揮抑制CYP 3A 酶活性的作用，這樣就會(huì)產(chǎn)生毒副作用，限制了其在臨床上的進(jìn)一步應(yīng)用。但聯(lián)用CYP 3A 抑制劑可提高CYP 3A 底物藥物的口服吸收及生物利用度，因此尋找一些無藥理活性、低毒且具有較強(qiáng)CYP 3A 抑制作用的抑制劑是

3、國內(nèi)外生物藥劑學(xué)學(xué)者重點(diǎn)研究的領(lǐng)域之一。 藥物輔料一直被認(rèn)為是生理惰性的物質(zhì)而應(yīng)用于各種制劑中，近幾年國內(nèi)外研究者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)某些制劑輔料（特別是非離子表面活性劑）具有抑制CYP 3A的活性，從而改變藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程。利用對(duì)CYP 3A 有抑制作用的輔料構(gòu)建載體給藥系統(tǒng)，可降低CYP 3A 底物藥物在胃腸道吸收過程中被CYP 3A 所氧化代謝的程度，提高CYP 3A 底物藥物的口服生物利用度；同時(shí)也不會(huì)產(chǎn)生新的毒副作用

4、。因此從給藥系統(tǒng)的角度來提高CYP 3A 底物藥物的口服生物利用度，較其它的策略更為可靠、易行，具有廣泛的應(yīng)用開發(fā)前景。
　　 為了考察包含有對(duì)CYP 3A 有抑制作用的輔料構(gòu)建的載體給藥系統(tǒng)對(duì)CYP 3A 酶的影響，以咪達(dá)唑侖（MDZ）為模型藥物、選用對(duì)大鼠肝微粒體CYP 3A 有明顯抑制作用的表面活性劑（Cremophor EL35、Cremophor RH40、Tween-80）為主要的載體材料，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)－效應(yīng)面法優(yōu)化

5、處方，制備咪達(dá)唑侖自微乳化給藥系統(tǒng)（MDZ －SMEDDS），基本處方為：MCT：Cremophor EL35：PG=25：50：25 （W：W：W）、MCT：Cremophor RH40：PG=25：45：30（W：W：W）或EO：Tween-80：PG=30：45：25 （W：W：W）。優(yōu)化后的處方水化所形成微乳的自微乳化時(shí)間和平均粒徑均符合SMEDDS 制劑的要求。
　　 通過目測(cè)法和儀器分析，以外觀、粒徑為主要指標(biāo)，考察

6、了介質(zhì)、稀釋倍數(shù)、離子強(qiáng)度和食物效應(yīng)等對(duì)各處方自乳化速率的影響，發(fā)現(xiàn)各因素對(duì)MDZ －SMEDDS的自微乳化效率并無明顯影響；通過對(duì)各處方所形成微乳的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)含有Cremophor EL35的微乳在人工腸液中的穩(wěn)定性較差，因此，我們不再對(duì)包含Cremophor EL35的SMEDDS 進(jìn)行評(píng)價(jià)；比較不同MDZ 制劑在人工腸液釋放情況，結(jié)果顯示，將MDZ 制成自微乳化給藥系統(tǒng)可以極大提高其釋放的速度和程度；穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，在所

7、考察的高溫、強(qiáng)光條件下，MDZ －SMEDDS的外觀、藥物含量、粒徑大小、自微乳化時(shí)間均無明顯變化，MDZ及其微乳的穩(wěn)定性良好。
　　 考察包含Cremophor RH40和Tween 80的SMEDDS （Cremophor RH40-basedSMEDDS和Tween 80-based SMEDDS）對(duì)大鼠肝細(xì)胞CYP 3A作用，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于對(duì)照組（MDZ溶液），Cremophor RH40-based SMEDDS和Twee

8、n 80-based SMEDDS在1:50到1：250的稀釋范圍內(nèi)可明顯抑制1′-OHMDZ的生成，且未產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒作用；通過Western blot技術(shù)檢測(cè)Cremophor RH40-based SMEDDS和Tween 80-based SMEDDS對(duì)大鼠肝細(xì)胞CYP3A 酶蛋白表達(dá)的影響，研究證實(shí)，在1:50到1:100的稀釋范圍內(nèi)包含Cremophor RH40和Tween 80的SMEDDS能顯著降低大鼠肝細(xì)胞中CYP

9、 3A的蛋白表達(dá)水平，相對(duì)于對(duì)照組（生理鹽水），其CYP 3A的蛋白表達(dá)量分別為40.5±9.9％和28.8±7.2％ (RH40-based SMEDDS)，65.3±10.8％和35.8±8.3％(Tween 80-basedSMEDDS)。這些結(jié)果進(jìn)一步表明，SMEDDS能抑制MDZ在大鼠肝細(xì)胞的代謝部分是由于下調(diào)了CYP3A的蛋白表達(dá)，從而減少CYP 3A 酶的生物轉(zhuǎn)化活性。分別單次或多次灌胃給予大鼠生理鹽水、MDZ 市售片劑（

10、Dormicum）、CremophorRH40-based SMEDDS與酮康唑溶液，從大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞提取分離腸RNA和蛋白，采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)腸道核酸轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，相對(duì)于生理鹽水對(duì)照組，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳顯著降低了大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞中CYP 3A的mRNA表達(dá)水平(見圖6-1)，mRNA表達(dá)量分別為生理鹽水對(duì)照組57.3

11、±5.6％（單劑量）和 57.6±7.7％（多劑量），而Dormicum ?片劑混懸液對(duì)大鼠腸道CYP 3A的mRNA表達(dá)水平并無明顯的影響，mRNA表達(dá)量分別為對(duì)照組98.3±7.3％（單劑量）和90.6±7.8％（多劑量）。Western blot 檢測(cè)結(jié)果與RT-PCR一致，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳顯著降低了大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞中CYP3A的蛋白表達(dá)水平(P<0.05)，蛋白表達(dá)

12、量分別為生理鹽水對(duì)照組53.7±6.9％(單劑量)和 40.2±8.5％ (多劑量)；單劑量給予Dormicum ?片劑混懸液對(duì)大鼠腸道CYP3A的蛋白表達(dá)水平并無明顯的影響，而多劑量給予Dormicum ?片劑混懸液卻輕微降低了大鼠腸道CYP3A的蛋白表達(dá)水平，蛋白表達(dá)量分別為對(duì)照組89.5±10.8％（單劑量）和76.8±16.1％ (多劑量)。上述結(jié)果說明單劑量或多劑量給予CremophorRH40-based SMEDDS，都會(huì)

13、降低大鼠腸道CYP 3A 酶的基因表達(dá)水平，從而提高CYP3A 底物藥物MDZ的口服生物利用度。
　　 分別單次或多次灌胃給予大鼠MDZ 市售片劑（Dormicum）、CremophorRH40-based SMEDDS與Tween 80-based SMEDDS。結(jié)果顯示，相對(duì)于市售片劑，單劑量和多劑量給予Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳與Tween 80-based SMEDDS 微乳后，MDZ

14、口服生物利用度有明顯提高，且顯著降低了1′-OHMDZ與MDZ的AUC0-∞比值。與市售Dormicum ?片劑組的AUC0-∞比較，單劑量和多劑量給予Tween 80-basedSMEDDS的相對(duì)生物利用度分別為（226.51±43.38）％和（246.11±44.71）％；CremophorRH40-based SMEDDS的相對(duì)生物利用度分別為（314.38±107.56）％和（332.74±82.97）％（P<0.05），AUC

15、0-∞1′-OHMDZ/ AUC0-∞MDZ的比值分別從0.25降至0.14 （Tween 80-basedSMEDDS）和0.11（Cremophor RH40-based SMEDDS）（單劑量），以及從0.27降至0.12 （Tween 80-based SMEDDS）和0.09 （Cremophor RH40-based SMEDDS）（多劑量）；同時(shí)Cremophor RH40-based SMEDDS 微乳與Tween 80

16、-based SMEDDS 微乳也顯著降低了MDZ的清除率（CL）并延長(zhǎng)了MDZ在體內(nèi)的平均滯留時(shí)間（MRT）及消除半衰期（t1/2）。
　　 綜上所述，包含有對(duì)CYP3A 有抑制作用的輔料構(gòu)建載體系統(tǒng)可有效的保護(hù)CYP3A 底物藥物的代謝，從而提高其口服生物利用。通過研究包含有對(duì)CYP 3A 有抑制作用的輔料構(gòu)建載體系統(tǒng)對(duì)CYP 3A 酶的影響，從而為提高某些藥物口服吸收而設(shè)計(jì)高口服生物利用度新劑型提供理論依據(jù)；為臨床低生物利