兩種鄰苯二甲酸酯抗體的制備、酶聯(lián)免疫分析方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、鄰苯二甲酸酯類化合物（Phthalate esters,PAEs）是一種增塑劑，被廣泛用于工業(yè)生產(chǎn)和食品包裝材料中。然而，由于PAEs在生產(chǎn)、使用和廢棄處理過(guò)程中，很容易解離并進(jìn)入環(huán)境中，可造成PAEs在環(huán)境中的普遍殘留，從而對(duì)環(huán)境與人類健康產(chǎn)生不利的影響。為了調(diào)查環(huán)境中此類污染物的分布狀況，評(píng)估其潛在的環(huán)境危害，有必要建立一種針對(duì)環(huán)境中痕量PAEs高效可靠的分析方法。而鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate,DBP）及鄰

2、苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate,DEP）是環(huán)境中被普遍檢出的兩種典型PAEs。
　　目前，DBP與DEP的檢測(cè)方法主要集中于氣相色譜質(zhì)譜法（GC-MS）、高效液相色譜質(zhì)譜法（LC-MS）、液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS/MS）等儀器方法，這些方法具有準(zhǔn)確定量的優(yōu)勢(shì)，但是，檢測(cè)成本高、樣品預(yù)處理復(fù)雜和檢測(cè)周期長(zhǎng)等不足限制了其進(jìn)一步推廣。與此相比，基于抗原/抗體的酶聯(lián)免疫分析方法（ELISA）則具有高通量、高特異性和簡(jiǎn)單快速

3、等特點(diǎn)，在環(huán)境分析中已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用。因此本研究合成了兩種針對(duì)DBP與DEP的半抗原，免疫動(dòng)物分別得到了相應(yīng)的抗體。在此基礎(chǔ)上，分別建立了DBP與DEP的ELISA分析方法，并將其成功用于實(shí)際水體及食品介質(zhì)中該類塑化劑的分析檢測(cè)，本研究可為進(jìn)一步的污染調(diào)查和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供技術(shù)支撐。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.本研究成功合成了半抗原—4-氨基鄰苯二甲酸二丁酯（4-DBAP），并以重氮化法制備了免疫原DBAP-BSA，對(duì)新西蘭大白兔免

4、疫后，得到了DBP的多克隆抗體，其效價(jià)為25.6×104，本抗體僅對(duì)鄰苯二甲酸丁芐酯和鄰苯二甲酸二乙酯有交叉反應(yīng)，其交叉反應(yīng)率分別是22.5％和1.08%。通過(guò)一系列條件優(yōu)化，建立了DBP殘留檢測(cè)的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，IC50值為421ng/mL，線性范圍為70～1600ng/mL，相關(guān)系數(shù)R2為0.9918，LOD為66.6ng/mL，加標(biāo)回收回收率在79.7%～105.4%之間，變異系數(shù)在3.25%～10.2%之間。
　　

5、2.本研究成功合成了半抗原—4-氨基鄰苯二甲酸二乙酯（4-DEAP），并以戊二醛法制備了免疫原DEAP-BSA，對(duì)Balb/C小鼠免疫后，成功制備出DEP單克隆抗體細(xì)胞株4G2，其效價(jià)為9×104，本抗體僅對(duì)鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸單乙酯及鄰苯二甲酸丁芐酯有交叉反應(yīng)，其交叉反應(yīng)率分別是4.29%、2.03%、0.035%。通過(guò)一系列條件優(yōu)化，建立了DEP殘留檢測(cè)的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，IC50值為72ng/mL，線性范圍為20～3

6、20ng/mL，相關(guān)系數(shù)R2為0.9916，檢測(cè)限LOD為11.9ng/mL，加標(biāo)回收率在76.3%～103.6%之間，變異系數(shù)在2.67%～11.48%之間。
　　3.利用上述建立的方法對(duì)鎮(zhèn)江地區(qū)部分小型淺水河流中水體、底泥以及牛奶、咖啡、白酒等常見(jiàn)食品中的DBP和DEP含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，在市區(qū)河流中均存在DBP與DEP的污染（除玉帶河因定期清淤，故水質(zhì)較好），且污染較為嚴(yán)重，亟需治理。而食品中DBP與DEP的殘留分別為