塑化劑鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯的免疫分析方法研究.pdf

1、鄰苯二甲酸酯類(PAEs)作為重要的環(huán)境激素之一,主要用作增塑劑添加到聚氯乙烯產(chǎn)品中,可以增強塑料的彈性、韌性、透明度和耐用性。2011年的臺灣塑化劑事件引起了人們對鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)強烈的關(guān)注。DEHP是最常用的鄰苯二甲酸酯類增塑劑,它的毒性強,對生物體的健康(尤其是生殖健康)會產(chǎn)生嚴(yán)重危害。
　　目前對于鄰苯二甲酸酯的檢測分析常用氣相色譜和液相色譜法。這類方法對于鄰苯二甲酸酯的檢測分析已經(jīng)比較純熟,但是色

2、譜技術(shù)需要對樣品進行預(yù)處理,過程復(fù)雜,操作費時,而且分析成本相對昂貴。免疫分析技術(shù)特異性好,靈敏度高,操作簡便,檢測限低,不用對樣品進行復(fù)雜的預(yù)處理。對于DEHP免疫分析報道目前還很少。本文研究的目標(biāo)是建立測定DEHP的簡單、快速、靈敏的免疫分析方法。本論文的工作主要有如下幾個方面:
　　1.DEHP多克隆抗體的制備
　　用重氮化法將BSA載體連接到半抗原4-氨基鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHAP)上得到了免疫全抗原

3、DEHAP-BSA,然后用免疫抗原免疫大白兔,3個月后,采集血樣,得到了DEHP的多克隆抗體,測得抗體終點效價為1:64,000,結(jié)果令人滿意,并用飽和硫酸銨法純化抗血清得到純化抗體濃度為40 mg/mL。
　　2.間接競爭酶聯(lián)免疫法測定DEHP
　　首先優(yōu)化了ELIS A的實驗條件,如包被抗原和DEHP抗體的濃度,反應(yīng)時間,封閉液濃度,稀釋液的pH值和濃度,酶標(biāo)二抗?jié)舛?以及標(biāo)準(zhǔn)液溶劑的選擇。在最優(yōu)實驗條件下,采用制備的抗

4、 DEHP多克隆抗體建立了間接競爭酶聯(lián)免疫分析DEHP的方法。繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性擬合后,得到方程式為A=0.778-0.0523lgC(A為吸光值, C為DEHP的濃度,單位為ng/mL),相關(guān)系數(shù)R2為0.984,線性范圍為0.01-1,000 n g/m L,檢測限為0.01 ng/m L。通過對實際水樣的測定,計算出樣品回收率為86.0％-113.0%。
　　3.直接競爭熒光免疫法檢測DEHP
　　首先將FITC和D