hla-cw基因分型在造血干細胞移植中的意義探討

1、白血病 · 淋 巴瘤 2 0 0 5 年 6 月第 l 4 卷 第 3 期 J o u r n a lo f L— e u k e mi a &L y mp h o ma,—J u n e 2 0 0 5 , V o 1 ． 1 4 , No ． 3H L A — C w 基 因分型在造血干細胞移植 中的 意義探討 梁曉嵐 楊 叢林 王荷 花 楊靜 波 孫 樂靜 韓 明哲 邱 錄貴 【 摘要 】目的 探討 H L A

2、 — c w 位點基 因分型在造血干細胞移植 ( h e ma t o p o i c e t i cs t e mc e l lt r a i l s —p l a n t a t i o n ． H S C T) 中的作用 ， 對 HL A — c基 因位 點相 合 與不相合 造 血干 細胞 移植 的效 果進 行 分析 。方 法 采用聚合酶鏈反應． 序列特異性 引物擴增 ( p o l y me r a s ec h a i nr

3、e a c t i o n ． s e q u e n c es p e c i f i cp r i me r s ， P C R·S S P) 方法對 H S C T供、 受體共 4 2 個樣本進行 H L A ． c位點等位基因分析 。結果 H L A — c基 因全相 合 者 9 例 造血 重 建 ， 存活 2 0 0d以上 7 例 ， 1 例存 活 3 0 3d復發(fā) ， 2 ． 例 存活 4 4d ( 死 于感 染

4、) ， 無病 生存 率 ( 6 6 ． 7 ± 3 ． 4 ) ％。1 例 ( 1 1 ． 1 ％) 發(fā) 生急 性移 植物抗 宿主 病 ( a G V H D ) ， 3 例 ( 3 3 ． 3 ％ ) 發(fā) 生慢 性移 植物 抗 宿 主病 ( c G V H D ) 。 H L A — c基 因不相合 者 1 2 例 造 血重 建 ， 存 活 2 0 0d以上 6 例 ， 1 例 存 活 1 0 5d復發(fā) ，6 例 存 活 7

5、 5d死亡 ， 無病 生存 率 ( 4 1 ． 7 ±5 ． 4 ) ％( P 0 ． 0 5 ) 。 結論 H L A ． c基 因不相合 導致 的 a G V H D 及相 關死 亡 率明顯 高于 c基 因相 合 者 ， 顯 示 c基 因不相 合也 是造 成 a G V H D 發(fā) 生率增 高和 影響 移植 效果 的重要 因素 ?！?關鍵詞 】 H L A ． c基因； 造血干細胞移植 ； 急性移植物抗宿主病 中圖分類

6、號 ： R 3 9 2 ． 4文 獻標識 碼 ： A文章 編 號 ： 1 0 0 9 — 9 9 2 1 ( 2 0 0 5) 0 3 - 0 1 4 0 ． 0 3As t u d yo nt h es i g n i f i c a n c eo fHL A- Cwt y p i n gi nh e ma t o l o g i c a ls t e m c e l lt r a n s p l a n t a t i o nL

7、I A NGX i a o - l a n ， Y A N GC b ，· l i n , W A N GH e — h u c ~Y A N G ． 1 i n g — b o ， S U NL e - r i n g , H A NMi n g — z h e ， Q I UL u — g u i ．C h i n e s eA c d a d e m yo fM e d i c a lS c i e n c e s ，

8、I n s t i t u t eo f H e m a t o l o g y ； T i a n j i nc 0B l o o dB a n k ， T k m j i n3 0 0 0 2 0 ,Ch i n a【 A b s t r a c t 】 Ob j e c t i v eT os t u d yo nt h es i g n i f i c a n c eo fH L A · C wr e s o l u

9、t i o nt y p i n gm e t h o di nh e m a —t o l o g i c a ls t e mc e l lt r a n s p l a n t a t i o na n dt oa n a l y z et h ee f e c to fHL A— C wa l l e l e sd o n o m a n dr e c i p i e n t s ． M e t h —o d sP o l y

10、 me r a s ec h a i nr e a c t i o n · - s e q u e n c es p e c i f i cp r i me r sP CR· · S S Pt y p i n gw e r ee mp l o y e dt ot y p e3 6c a s — —e so fr e l a t e dh e ma t o p o l e t i cs t e m c e

11、l lt r a n s p l a n t a t i o nd o n o m a n dr e c i p i e n t s ． Re s u l t s9HLA— Cwa l l e l e se n t i r e l yma t c h i n gwe r ee n g r a f t e ds u c c e s s f u l l y ． 7o ft h e m s u r v i v e do v e r2 0

12、0d a y s ， Th er a t eo fd i s e a s ef r e es u r vi v a li s ( 6 6 ． 7 ~ 3 ． 4 ) ％， 1p a t i e n t ( 11 ． 3％ ) g o ta G V H D ， a n d3p a t i e n t s ( 3 3 ． 3％) g o tc G V H D ． 1 2H L A · C wa l l e l e sm i s m

13、 a t c h i n g ． 6o ft h e ms u r vi v e do v e r2 0 0d a y s ， T h er a t eo fd i s e a s ef r e es u r vi v a li s ( 4 1 ． 7 ~ 5 ． 4 ) ％ ( P0 ． 0 5 ) ． C o n c l u s i o n sT h ea GVHD a n dr e l a t e dd e a t hr a t

14、 eo fHL A — Cwa l l e l e smi s ma t c h i n gs i g n i f ic a n t l yh i g h e rt h a nt h o s ema t c h i n gp a i r s ， wh i c hr e f le c t st h a tt h ed i s p a r it yo fHLA— Cwa l l e l e si sa ni mp o r t a n tr

15、e a s o no fa GVHD a n dwo u l ds i g —n i f ie a n t l ya fe c tHS CTr e s u l t s ．【 K e yw o r d s 】H L A — C wg e n e ； H e m a t o p o i e t i cs t e mc e l lt r a n s p l a n t a t i o n ；A c u t e — g r a f tv e

16、r s u sh o s td i s c a s e0 引言 隨著異 基 因造血 干細胞 移植 ( A l l o — H S C T) 在 治療 惡性血 液病 方 面 的突破 ， H S C T的數(shù) 量在 逐 年 增 多 ， 但它 的作用 往往被 G V H D所削 弱。 而準確 、 可 靠 的供 、受者 H L A配型是 減少 G V H D的有效方 法 之一 。因此 ， 供 、 受者 問移植 配型 中的問題也越來 越 引起人們

17、的重 視 。 目前 國 內(nèi)移 植 配 型 大多數(shù) 采 用 A 、 B 、 D R6 個位點相合或 5 個位點相合做移植 ， 對 于造 血 干細 胞移 植 ，尤 其 是 對于 無 關供 體 間 的移 植 ，除上 述位點外 ， C w 基 因是否相合 也會影 響移 植 作者單位 ： 3 0 0 0 2 0天津 ， 中國醫(yī)學科學 院、 中國協(xié)和醫(yī)科大學 血液 學研 究 所 ， 血 液病 醫(yī)院 ( 梁 曉嵐 、 楊叢 林 、 王 荷 花 、 韓

18、 明哲 、 邱 錄 貴 ) ； 3 0 0 3 8 4天津市臍帶血造血干細胞庫 ( 梁曉嵐 、 楊叢林 、 楊靜 波 、 孫樂靜 、 韓明哲 、 邱錄貴 )論 著 ·的效果 。許多研究也 表明 C w 基 因在免疫排斥 、 移植 治療 和疾病 相關 等方面 有著重 要作用 。因此 ， 了 解 C w 基 因在 H S C T中 的作 用是 有必 要 的。我們 采 用 P C R — S S P方法對 H S C T供 、 受

19、者 體行 H L A — C w 位 點 等位 基 因分 型 ，對 C w 基 因相合 與不 相合 H S C T的效 果 、 G V H D的發(fā) 生 隋況 進行 分析 ， 探討 C w 基 因 在 H S C T中的意義 。1 資料與方法 1 ． 1 病 例 受 者 ：本 院 2 0 0 1 年 1 1月 至 2 0 0 4年 4月 共 2 1例 H S C T白血病 患者 。其 中慢 性 粒細 胞 白血 病 ( C M L) 1 1

20、 例 ， 急性 淋 巴細胞 白血病 ( A L L) 7例 ， 重 型再生 障礙性 貧血 ( S A A) 2例 ， 漿 細胞 白血病 1 例 。維普資訊 http://www.cqvip.com 白血病· 淋巴瘤 2 0 0 5年 6 月第 1 4 卷第 3 期 J o u r n a lo f L e u k e m i a &L y m p h o m a , J u n e2 0 0 5 , V o 1 ． 1

21、 4 , N o ． 3上 ， 2例存 活 1 2 0d后 感 染死 亡 ， 1 例 成 活 1 0 5d復 發(fā) 。2 ． 3HL A ． c基 因相容性與 HS C T后存活情況 c w 基 因全相 合 H S C T9例 中有 7例存 活 2 0 0d以上 ， 2 例存 活 4 4d ( 死于感染 ) ， 1 例存 活 3 0 3d復 發(fā) ， 現(xiàn)無病存活 6例 ， 存 活率為 6 6 ． 7％。c w 基因不相合 H S C T1

22、2 例 中有 6例存活 2 0 0d以上 ， 1 例存 活 1 0 5d復發(fā) ， 6例 存 活 7 5d死 亡 ， 現(xiàn) 無病存 活 5 例 ， 存活率為 4 1 ． 7 ％。3 討 論 H L A ． c w 基因位于人類第六號染 色體短臂 的H L A． A、 B座位 之 間 ，由于 其抗原 在細胞 表面表 達 較 弱嘲 ， 缺 乏合 適 的抗 血 清 ， 導 致 c w 基 因座位 空 白頻率 達 3 0％以上 ， 使 c w基 因

23、 的研 究 難 以深 入 。極大地 限制 了人們 對 c w 基 因在 免疫排 斥 、移 植治 療和疾 病關聯(lián) 中所起 的作 用。 隨著 D N A分 型技術 的不斷提 高 ， 1 9 8 9 年 T a k i g u c h i 等[ 9 1 首 次報道 了非血 清學鑒定 的 H L A． C w 等位 基 因 ，現(xiàn) 已發(fā)現(xiàn) c w 等位 基 因近 1 1 0 個 ，并 發(fā)現(xiàn) C w 基 因的不相合 可 引起移 植 超急排異反應【

24、1 ] 。美 國骨髓登記處 ( N M D P) 分析報道 在 18 7 4 例 移植病例 中 ， c w 位 點基 因不相合 與相合情 況下急性 重 度 G V H D 的發(fā) 生 率 分 別 為 2 0 ． 6％和 1 1 ． 8％ ，( P< 0 ． 0 0 5 ) 嘲 。S a s a z u k等嘲 對 4 3 6例 H S C T患者進 行分析 ， C w 基 因相合 的受者約有 l 3％發(fā)生 Ⅲ一 Ⅳ期 a G V H

25、 D， 而 不 相 合 的 約 有 3 2％ 發(fā) 生 Ⅲ 一Ⅳ 期 a G V H D( P< 0 ． 0 0 1 ) 。并發(fā) 現(xiàn)如果 在有 一個 A、 B或 D R位 點不相合 的情況下 ， 還 有一個 c w 位點 不相合 會增 加 a G V H D的發(fā)生率及嚴重 程度 。 表 明 c w 基 因 的不相合是造成 a G V H D發(fā)生率增高的重要 因素 ，而 C w 基 因不相合 的移植 物不 能存 活 的可能 性也是 各

26、位點 中最 高的。我們對 2 l 例 H S C T患者進 行分析 。資料 顯示 ，c w基 因不 相合 的受 者 a G V H D發(fā) 生率 明顯 增 加 為 5 0％； 且發(fā)生早 而重 ， 移植排 斥發(fā)生 率也 明顯增高 ，造血重 建慢 ， 移植相關死亡 率為 5 8 ． 3 ％。c w 基 因相 合患者 中 ， a G V H D發(fā) 生率 為 1 1 ． 1 ％， 移植 相關 死亡 率為 2 2 ． 2 ％。尤其是無關供者間 H

27、S C T移植 的患者 ， 全部獲造血重建 ， 無 a G V H D發(fā)生 ， 無病存活時 間長 。 顯 示 c w 基 因相合植 入失敗發(fā)生率 、 G V H D及 排斥 反應都低 于 c w 基因不相合 者 。觀察 分 析 C w基 因與 相鄰 H L A． A、 B 、 D R基 因 的連鎖關 系。 分析顯 示 A 、 B或 D R有一個基 因不相 合 ， 但 c w 基 因相合 ， a G V H D的發(fā)生率 為 3 3 ． 3

28、 ％。而 A 、 B 或 D R有一個基因不相合的同時， c w 基因也有 一 個不 相合 ，急性 重度 G V H D的發(fā)生 率 由單純 c w基 因不相 合時的 4 1 ． 7％上升 至 6 6 ． 7％。 兩個 或更多 基 因不 相合 時 ， C w 基 因也不 相合， 發(fā)生 a G V H D的可 能性約為 7 5 ％。而全部 相合 時 ， 可能性 為 l 1 ． 1 ％( P<0 ． 0 0 1 ) 。4例接 受來 自無

29、關 供體 H S C T( A、 B 、 D R吻合 ) ， c w 基 因也 相合 的受 者無 a G V H D發(fā)生 ， 無 病 存活率 高 ， 存 活時間長 。 對 于單獨 c w 基 因的作用 由于受 病例數(shù) 的限制 ， 沒 有做 更詳 細 的分 析 。我們 認 為 ， H L A ． c w 基 因相合 與 不相 合 的供 者 對血 液病 患 者 H S C T效果 的影 響是不 同的 ，表 明 c w 基 因不合 和其 他

30、H L A基 因不合 有 明顯 的協(xié) 同作 用 。因此 ，移植前 對供 、 受 者特別是無 關供 者的 H S C T進行 C w位 點基 因分 型是 很 有必 要 的 ， 它在 人類 學 、 移植 醫(yī) 學 中的應用價值應 當引起人們 的高度重視 。參 考 文 獻 1Sh i mi z uY， e ta 1 ． P r o du c t i o no fh u ma nc e l l se x p r e s s i n gi nd

31、i v i d u a l t r a ns f e r r e dHLA—A， 一B， 一Cg e ne su s i n ga nHLA — A， 一B， 一Cn u l lhu -m a nc e l ll i n e [ J ] ． JI m m u n o l o g y ， 1 9 8 9 ， 1 4 2 ： 3 3 2 0 — 3 3 2 8 ．2Fl o me n be n gN，Ba x t e rL o weLA，C

32、o n f e rD，e ta 1．I mp a c to fHLA —C l a s sIa n dI Ih i g hr e s o l u t i o nma t c hi n go no u t c o meo fu n r e l a t e dd o n o rB M 1 T J ] ． B l o o d ， 2 0 0 1 ， 9 8 ： 8 1 3 a ．3Sa sa z ukM ． e ta 1．Efe c to f

33、ma t c h i n go fc l a s sIHLA a ll e l e so nc l i n i c a lo u t c o mea f t e rt r a n s p l a n t a t i o no fh e ma t o p o i e t i cs t e m c e l i sf r o m a n un -r e l a t e dd o n o r [ J ] ． T h eN e wE n

34、g l a n dJ o u r na lo fM o di e i n e ，1 9 9 8 ，2 2 ：l1 7 7．1 1 8 5 ．4Mo r i s h i maY， S a sa z u k iT ， I n o k oH， e ta 1． T h ec l i n i c a l s i g n i f i c a n c eo fh u m a n l e u k o c y t ea n t i g e n ( H

35、L A ) a l l e l ec o m p a t i b i l i t yi np a t i e n t sr e —c e i v i n gama r r o wt r a n s p l a n tf r o m s e r o l o g i c a ll yHL A— A ， HL A— B ， a n dH L A — D Rm a t c h e du n r e l a t e dd o n o r s [

36、 J ] ． B l o o d ， 2 0 0 2 ， 9 9 ： 4 2 0 0 — 4 2 0 6 ．5C h e nY uh o n g ， H u a ngX i a oj u n ， G u oN a il a n， e ta 1． E x p l o r a t i o no fa —c u t eg r a f tv e nu sho s td i s e a s ea n di t sr i s kf a c t o

37、m a f t e ra ll o —h e ma t o p o i — —e r i cs t e m c e l lt r a n s p l a n t a t i o nC h i nJHe ma t o l ， 2 0 0 3 ， 2 4 ( 2 ) ： 6 1 — 6 3 ．6Bu n c eM． e ta 1． Ra pi dDNA t y p i n gf o rHLA— C u s i n gs e q u

38、e n c es p e ci f -i cp r i m e rf P C R— S S P 1 ： I d e n t i f i t i o no fs e r o l o g l c a l l ya ndn o ns e r ol o g l c a l —l yd e f i n e da l l e l e si n c l u d i n gs e v e r a ln e wa l l e l e s[ J 1 ． T

39、 i s s u eA n t i g e n ，1 9 9 4 ， 43 ： 7—1 7 ．7Ai z a waM ． An t i g e n sa n dg e n ef r e qu e n c i e so fe t h n i cg ro u p s ， I n ： Ai z a waM， N a t o r iT ， Wa k i s a k eA ， K o n o e d aYe d s HL Ai nA s i ae

40、 ce a na [ J ] ． S a p —p o r o： Ho k k a i d oU n i v e r s i t yP r e s s ， 1 9 8 6 ： 1 0 7 9 — 1 0 9 1 ．8B a u rMP ， e ta 1． R e f e r e n c et a b l e so ft w ov o c u sh a p l o t y pef r e q u e n c i e sf 0 ra l l

41、MHC ma r k e rL o c i ．I n： Al b e r tE D．Ba urM P． M a y r wr e d s ． Hi s —t o c o m p a t i b i l i t y T e s t i n g 【 J 】 ． B e r l i n ： S p r i n g V e r e r l a g ， 1 9 8 4 ： 6 7 7 — 7 5 5 ．9T a k i g n c h iM

42、， e ta 1． T h es t r u c t u r ea n de x p r e s s i o no fg e n e se n c o d i n gs e r o l o g l c a l l yu n d e t e c t e dH L A— c l e cu sa nt i g e n s [ J 1 ． J o u r na lo fI m —m u n o l o g y ，1 9 8 9，1 4 3： 1