nm23-h1基因?qū)θ朔伟┘?xì)胞中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶活性的影響_第1頁
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文檔簡介

1、· 8 ·巾國 肺 癌 雜 志 2 0 O 4年 2月第 7卷第 1期 C h i nJL u n gC a n c e r ,F(xiàn) e b r u a r y2 0 0 4 ,Vo 1 . 7 ,N o . 1· 基 礎(chǔ) 研 究 ·n m23 一 H1 基 因?qū)θ朔伟┘?xì)胞 中細(xì)胞外 信號(hào)調(diào)節(jié)激酶活性的影 響 李 印周清 華 孫 芝琳 覃揚(yáng) 朱文 王艷 萍 劉倫 旭 陳小禾 孫澤 芳 【 摘 要】目

2、的 探 討腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基 因 n m2 3H對(duì)人 高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株 L 9 9 8 l 中細(xì)胞外信號(hào)調(diào) 節(jié)激酶 E R K1 / ' 2 活性的影響。方 法 應(yīng)用特異性識(shí)別總 E R K1 / 2 ( p 4 4 / , i 2MAPk i n a s e ) 和 雙磷 酸化 E R K1 / 2( p h o s p h op 4U4 2MAPk i n a s e ) 的抗體及蛋 白印跡法( We s t e r nb

3、 l o t ) , 檢測(cè) L 9 9 8 1 ( 缺失 n m2 3H1基因的原代 肺癌細(xì)胞株) 、 L 9 9 8 1n m2 3H( 轉(zhuǎn)染 ‘ rn m 2 3 一 H1基 因 的 L 9 9 8 1細(xì) 胞 株 ) 、 L 9 9 8 1P IX S N( 轉(zhuǎn) 染 了卒 載體 的 L 9 9 8 1細(xì)胞 株) 中總 E R K1 / 2和磷 酸化 E R K1 / 2的水 平 。磷 酸化 E R K1 / / 2活性 應(yīng)用 非 放

4、射 性 免疫 沉淀 和 We s t e r nb l o t 法以及 p 4 , 1 / 4 2MAPk i n a s e分析 試劑 盒子 以檢測(cè) 。結(jié)果 L 9 9 8 1n m2 3H細(xì) 胞 株 巾磷酸 化 E R K1 / / 2的水平 , 以及 E R K1 / 2活性均顯著低于 L 9 9 8 1細(xì)胞 株和 I9 9 8 1P IX S N細(xì)胞株 ( , J 0 . 0 5 ) 。三 個(gè)細(xì)胞株 間總 E R K1 / 2水

5、平比較均無顯著性差異( P >0 . 0 5 ) 。結(jié)論 n m2 3 一 H基 因可明 顯靶 向地抑制 人高轉(zhuǎn)移肺 癌 細(xì)胞株 L 9 9 8 1中 E R K1 / 2 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)和 E R K1 , / 2的 活性 。推測(cè) n m2 3 一 H基因 的作 用機(jī)制 可能 與其抑制 了MAP KE R K信 號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)。【 關(guān)鍵詞】人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株 I9 9 8 1n m2 3H信號(hào)傳導(dǎo) 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 【

6、中圖 分 類 號(hào)】 R 7 3 4 . 2 ; Q7 8 6Tr a n s f e c t i o no ft h et u m o rm e t a s t a s i ss u p p r e s s o rg e n en m 2 3 。 H Ic a nt a r g e t l ys u p p r e s st h ea c t i v i t yo fe x t r a c e l l u l a rs i g n a

7、l - r e g u l a t e dp r o t e i nk i n a s e( E RK )i nh u ma nh i g h 。 me t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eL 9 9 81LIYi n,ZHOU Qi n g h u a,SUN Z h i l i n,QI N Y a n g, ZH U We n,W AN

8、G Y a n p i n g,LI U Lu nr “,CH EN Xi a o h e ,S UNZ e f a n g .Ke yL a b o r a t o r yf J , 、 L u n g( 7 a n ( e rMo l e ~ ’ u l a rB i o l o g y0 _ 廠S i ( h “ “ ”P r o v i me , We s tC h i n aHo s p it a l 。S i c h

9、u a nUn i v e r s i t y,( ? h e n g du ,S i c h u a n6 1 0 0 4 1 ,P. R. Ch i n a[ A b s t r a c t ] Ob t } e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ei n f l u e n c eo ft h et u mo rm e t a s t a s i ss u p p r e s s o rg

10、e n en m2 3 一 Hlo nt h ea c t i v i t yo fe x t r a c e l l u l a rs i g n a lr e g u l a t e dp r o t e i nk i n a s e ( ERK ) i nh u ma nh i g hme t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e re e l l 1 i n eI9 9 8

11、j .Me t h o d sT h el e v e l so ft o t a 1E R K1 / 2a n dp h o s p h op E R Kl / / 2we r ed e t e r mi n e dw i t hp 4 4 / 4 2MAPk i n a s ea n t i b o d ya n dd u a l l yp h o s p h o s p e c i f i cp h o s p h o 一 4 ,

12、 t / 4 2MAPk i n a s ea n t i b o d yi nh u ma nh i g h —me t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l l 1 i n e sI9 9 8 l( c e l l 1 i n ewi t hn m2 3H lg e n ed e l e t i o n ) ,I9 9 8 l — n m2 3 一 H1( e e

13、l ll i n ewi t hn m2 3 一 H 1t r a n s f e c t e d )a n dI9 9 8 1 - P IXS N ( e e l l1 i n ewi t hv e c t o rt r a n s f e c t e d )b yW e s t e r nh l o tme t ho d,r e s p e c t i v e l y . Th ea c t i v i t yo fp h o s

14、p h o — E RK1 , / 2wa sd e t e r mi n e dwi t ha nERK 1 , / 2a s s a yk i tb yi mmu n o p r ec i p t a t i o na n dWe s t e r nb l o ta n a l y s i s .R e s u l t sT h ee x p r e s s i o nl e v e l so fp h o s p h oE RK

15、 1 / 2k i n a s ea n dt h ea c t i v i t yo fp h o s p h o — - ERK1 , / 2i nt h el u n gc a n c e rc e l ll i n eL9 9 8 1 — - n m2 3 —H 1we r er e ma r k a h l yh i g h e rt h a nt h o s eo ft h eI9 9 8 1e e l ll i n ea

16、n dI9 9 8 1P IXS Ne e l ll i n e ( P 0 . 0 5) . Th e r ewa sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h et o t a 1ER K1 / 2l e v e 1a n l o n gt h et h r e ee e l l 1 i n e s 。C o n -c l u s i o nn m2 3 — — H1g e n

17、 ec a no b v i o u s l yt a r g e t l ys u p p r e s st h ea c t i v i t yo fE R K 1 / 2i nh u ma nh i g h — — me t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eL9 9 8 1 .Th i ss u g g e s tt h a tt h eme

18、 c h a n i s mso fn m 2 3H1g o n ea sat u mo rme t a s t a s i ss t l pp r e s s e rg e n ema yb er e l a t e dt oi t ss u p p r e s s i o nt ot h eMA P K / E RKs i g n a lt r a n s d u c t k m p a t h w a y .[ K e yw o

19、 r d s ] Hu ma nh i g h — me t a s t a s i sl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eI . 9 9 81n m2 3HlS i g n a lt r a n s d u c t i o nE x t r a c e l l u l a rs i g n a lr e g u l a t e dp r o t e i nk i n a s

20、e( ERK)Th i swo r kwa ss u p p o r t e db yg r a n t sf r o m Na t i o n a lNa t u r a lS c i e n c e sF o u n d a t i o no fC h i n a( t oZH( ) U Qi n g —h u aa n dII U Iu n x u )( No . 3 0 0 7 0 3 3a n dNo . 3 0l 0

21、0 0 7 5 ) .本研 究 受 國家 自然科 學(xué)基 金 ( No . 3 0 0 7 0 3 3和 No . 3 0 10 0 0 7 5 ) 資 助 作者單位 : 6 1 0 0 , 1 1 成都 , 四J I I 省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室四川 I 大學(xué)華 西醫(yī)院肺癌分 子實(shí)驗(yàn)室、 四J i I 大學(xué)華兩醫(yī)院胸心外科( 通訊作者 : 周清華 )維普資訊 http://www.cqvip.com · 1 0·H肺 癌 雜 志

22、 2 0 0 1 年 2門 第 7卷第 1 期 h i n1l mn g【 、 ?1 【 ’ c r , F e b r u a r y2 0 0 1 .V u 1 . 7 .No . 10 . 0 5 ) 。2 . 3 不 同肺癌 細(xì) 胞株 中 E R K1 / 2活性 比較 人高轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞 肺 癌 細(xì) 胞 株 L 9 9 8 1 、 1 . 9 9 8 1 ~ P IX S N 和 L 9 9 8 l — n m2 3 ~

23、 H中 E RK1 / 2活性 比較 有 顯 著 性 差 異 ( P 0 . 0 5 ) ( 圖 3、 4)[1 . 00 . 80 . 60 . 40. 20. 0L 9 9 81L9 9 8I . P L XS N L 9 98I . n I 【 1 2 3 . HDi f f e r e n to e 『 II i n e s080. 6( ) . 4020. 0L 9 9 8 1L 9 9 81. P L XSNL 9 9 8

24、1 一 n m2 3 . H Di f l e t e l l [te l II i n e s圖 3 人 高 轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞 肺 癌 細(xì) 胞 株 1 . 91 1 8 1 、 1) 0 8 1P lX S N 和 19 9 8 1n m2 3HII f iE R K12活性 比較 F i g3 ( %mp a r i s o no fp h o s p h oERK12a c t i v i t Ya mo n g } l u n

25、 t a i lh i g hI 1 1 Ct a s t a t i cl a r g ec e l l】 u n gc a n c e rc e l ll i n e sI | 91 1 8 1 . 1 . ! / ! / 8 1PlXS N n 【 1I , 9 9 8l _ n m2: {} l1P h o s p h o -El k . 19 9 8ll9 98 1 .1 . 9 98 1 .圖 4人 I 嚼轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞

26、 帥 癌 細(xì) 胞 株 1 . 9c ) 8 i 、 I . 1 1 9 8 iP IX S N 和 1 . 91 1 8 卜n r n 2 : lH,} i 磷 酸化 E l k1 電 泳 F i g4W c 。 s t e r nb l o tr e s t l _ 1( 1 fp h ( ) s p h o r ) l a t e dEl k1i l lh u ma nh i ghn i tt1Ia t i cl1r glc e ]

27、 】hi n gc f tr l t t 、 rcL 1 1 1I I I I C 51 . 9 9 81 . 】 , 9 9 81PIXSNa n dI | 9 9 81H [ n 2;¨I圖 1 人 高 轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞 肺 癌 細(xì) 胞 株 1 . ! t ! t 8 1 、 1 . 9 9 8 1I1 , X S N 和 I | 1 11 1 8 1r n 2 3H巾 磷酸化E IK 】 , 2 水平比 較3討 { 侖

28、Fi g1Co mp a r i s o no fth ee x p r e s s i o nl c v e lo fp h o s p h oERK12a n n ) r i gh u ma nh i g hme t a s t a t i cl a r ge( ' e l lh mgc a n c e rc e l ll i n e s19 9 8I .I9 9 8l — PiXS N a n dl9 9 8ln m2

29、8H lI9 9 81 .P IXS NL 9 9 81 .N e g a t i ln m2 3. Hlc n n t r o l。 .閹 圖 2F i g2人 高 轉(zhuǎn) 移 大 細(xì) 胞 肺 癌 細(xì) 胞 株 19 9 8 1 、 1 . 9 9 8 1P IXS N 和 1 2 1 9 8 1n m 2 3Hl 中磷 酸化和總 E R Kl2 電泳陶W e s t e r nhi ntr c s u I l s( ) fp h o s

30、 p h or yl a ta n dl O t f l IERK11i nhLma nh i ghI I I C t t t S I f l t l Cl a r g ec e [ Il u n gc a n c e r【 lI i n ~ ' s1 , 9 9 81L9 9 8 l — PIXSN a n d 』 . 9 9 8卜n m2 0Hl細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路控制著細(xì)胞的所有活動(dòng), 許多癌基岡和抑癌基因f于信號(hào)傳導(dǎo)通路

31、的同部位 , 參與審 曼的細(xì) 胞 活 動(dòng)過 程 。 目前 關(guān) _ f 二 n m2 3 一 H基 因 影響H 中 瘤 襲轉(zhuǎn) 移信 傳導(dǎo) 倜節(jié)機(jī) 制 的研 究 尚無 明顯 進(jìn) 展 。絲裂原活化籃 門激酶 ( MA P K) 級(jí)聯(lián)足 真核細(xì)胞 介導(dǎo)細(xì)胞 外 信 號(hào)到細(xì) 胞 內(nèi) 反應(yīng) 的 審要 的 信 號(hào)傳 導(dǎo) 系統(tǒng) , 可調(diào)節(jié) 機(jī)體細(xì) 胞 的生 長 、 分化 、 分 裂 、 死 亡及細(xì) 胞間 功 能 同 步 化 等 多 種 過 稗 。 在

32、人 類 已 鑒 定 了 I 條 MA P K 通 路 , 即 E R K 通 路 、 cJk i l l ( cJ u nNt e r mi n a lk i n a s e , J NK)應(yīng) 激 激 活 蚩 白 激 酶 ( s t r e s sa c t i v a t e dp r o l e i nk i n a s e , S AI ’ K) 通 路 、 大 絲 裂 原 活 化 蛋 白激 酶 ( b i gMAPk i n a

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