砂生槐乙醇提取物對(duì)Tca8113細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制.pdf

1、目的：1.探討砂生槐種子乙醇提取物（Ethanolic Extracts from Sophora Moorcroftiana Seeds,EESMS）對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖抑制率的影響。2.探討EESMS對(duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響。3.探討EESMS對(duì)Tca8113細(xì)胞凋亡的影響。4.應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法探討EESMS誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　方法：觀察EESMS對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖率的抑制作

2、用并篩選藥物濃度。采用AO/EB雙重染色法在熒光顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。Annexin V/PI雙染、流式細(xì)胞術(shù)檢測EESMS處理后Tca8113細(xì)胞的凋亡率。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分析EESMS處理后的細(xì)胞周期變化情況。利用雙向電泳和Maldi-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定技術(shù)分析加藥組與對(duì)照組差異蛋白，探究砂生槐的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：1.36h MTT比色法顯示：加藥組細(xì)胞增殖

3、較對(duì)照組明顯受到抑制，且呈現(xiàn)濃度依賴性，其中0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0μg/μl組細(xì)胞生長抑制率（％）分別為：4.12±0.94，6.57±2.49，27.69±1.32，46.77±2.74，57.07±0.69，69.74±1.94，82.29±3.37和98.71±0.46，上述差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥物的半數(shù)抑制率IC50為2.085μg/μl。2.AO/EB雙染結(jié)果顯示：對(duì)照組無明顯凋亡細(xì)胞

4、，1.0μg/μl濃度組可見早期凋亡細(xì)胞，隨藥物濃度增高，早期凋亡細(xì)胞及晚期凋亡細(xì)胞增多。3.流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期檢測顯示：隨藥物濃度增高加藥組細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例逐漸增大，S期、G2/M期細(xì)胞比例逐漸減小，加藥組細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。4.Annexin V/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測顯示：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示加藥組細(xì)胞凋亡率明顯高于陰性對(duì)照組（P＜0.05），隨藥物濃度增高，凋亡細(xì)胞比例增加，呈濃度依賴性。5.雙向電泳技術(shù)共發(fā)現(xiàn)218個(gè)差

5、異蛋白。經(jīng)Maldi-TOF-TOF質(zhì)譜技術(shù)成功鑒定差異蛋白8個(gè)，包括：肽脯酰胺順反異構(gòu)酶A、活化蛋白激酶1受體、乳酸脫氫酶B鏈異構(gòu)體、磷酸甘油酸變位酶1、Dj-1蛋白晶體結(jié)構(gòu)A鏈、過氧化還原酶2、絲氨酸蛋白酶抑制劑B5及核內(nèi)不均一核糖核蛋白H。經(jīng)過生物信息學(xué)分析，上述蛋白涉及細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)、基因表達(dá)負(fù)向調(diào)控、細(xì)胞粘附、凋亡誘導(dǎo)負(fù)向調(diào)控、氧化還原進(jìn)程、蛋白分泌正向調(diào)控等多種生物功能。
　　結(jié)論：EESMS能顯著抑制Tca8113