砂生槐乙醇提取物對Tca8113細胞凋亡的影響機制.pdf

1、目的：1.探討砂生槐種子乙醇提取物（Ethanolic Extracts from Sophora Moorcroftiana Seeds,EESMS）對人舌鱗癌Tca8113細胞增殖抑制率的影響。2.探討EESMS對Tca8113細胞株細胞周期的影響。3.探討EESMS對Tca8113細胞凋亡的影響。4.應用蛋白質組學方法探討EESMS誘導Tca8113細胞凋亡的機制。
　　方法：觀察EESMS對Tca8113細胞增殖率的抑制作

2、用并篩選藥物濃度。采用AO/EB雙重染色法在熒光顯微鏡下進行形態(tài)學觀察，區(qū)分活細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞及壞死細胞。Annexin V/PI雙染、流式細胞術檢測EESMS處理后Tca8113細胞的凋亡率。利用流式細胞術檢測細胞周期分析EESMS處理后的細胞周期變化情況。利用雙向電泳和Maldi-TOF-TOF質譜鑒定技術分析加藥組與對照組差異蛋白，探究砂生槐的作用機制。
　　結果：1.36h MTT比色法顯示：加藥組細胞增殖

3、較對照組明顯受到抑制，且呈現(xiàn)濃度依賴性，其中0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0μg/μl組細胞生長抑制率（％）分別為：4.12±0.94，6.57±2.49，27.69±1.32，46.77±2.74，57.07±0.69，69.74±1.94，82.29±3.37和98.71±0.46，上述差異均具有統(tǒng)計學意義。藥物的半數(shù)抑制率IC50為2.085μg/μl。2.AO/EB雙染結果顯示：對照組無明顯凋亡細胞

4、，1.0μg/μl濃度組可見早期凋亡細胞，隨藥物濃度增高，早期凋亡細胞及晚期凋亡細胞增多。3.流式細胞術細胞周期檢測顯示：隨藥物濃度增高加藥組細胞G0/G1期細胞比例逐漸增大，S期、G2/M期細胞比例逐漸減小，加藥組細胞周期阻滯于G0/G1期。4.Annexin V/PI雙染細胞凋亡檢測顯示：統(tǒng)計學分析顯示加藥組細胞凋亡率明顯高于陰性對照組（P＜0.05），隨藥物濃度增高，凋亡細胞比例增加，呈濃度依賴性。5.雙向電泳技術共發(fā)現(xiàn)218個差

5、異蛋白。經(jīng)Maldi-TOF-TOF質譜技術成功鑒定差異蛋白8個，包括：肽脯酰胺順反異構酶A、活化蛋白激酶1受體、乳酸脫氫酶B鏈異構體、磷酸甘油酸變位酶1、Dj-1蛋白晶體結構A鏈、過氧化還原酶2、絲氨酸蛋白酶抑制劑B5及核內不均一核糖核蛋白H。經(jīng)過生物信息學分析，上述蛋白涉及細胞氧化應激反應、基因表達負向調控、細胞粘附、凋亡誘導負向調控、氧化還原進程、蛋白分泌正向調控等多種生物功能。
　　結論：EESMS能顯著抑制Tca8113