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1、為了探討通過RNA干擾(RNA interference,RNAi)抑制端粒酶活性途徑治療口腔腫瘤的可行性, 本課題選用人舌癌Tca 8113細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。觀察靶向人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA ,shRNA)轉(zhuǎn)染人舌癌Tca 8113細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響,RNA干擾前后細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞形態(tài)的變化。
2、 在方法學(xué)上根據(jù)RNA干擾原理,利用構(gòu)建的表達(dá)shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表達(dá)質(zhì)粒(shRNA1),非特異性的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒(shRNA2),轉(zhuǎn)染試劑(德國 metafectene)和正常培養(yǎng)液處理細(xì)胞。24h后在共聚焦顯微鏡下檢測(cè)熒光表達(dá)情況; 24h、48h、72h用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性; 48h后行HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)、TRAP PCR-ELISA檢測(cè)細(xì)胞端粒酶活性。 果顯示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)
3、胞24h后,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組可見大量表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞, shRNA1組出現(xiàn)大量懸浮的表達(dá)綠色熒光的圓形死亡細(xì)胞,貼壁細(xì)胞顯著減少;ELISA法顯示shRNA1組人舌癌Tca 8113細(xì)胞端粒酶活性顯著下降(P ﹤0.05);HE染色發(fā)現(xiàn)shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細(xì)胞胞體縮小、核固縮,同等培養(yǎng)條件下與其它組比較,細(xì)胞生長(zhǎng)密度變稀,見許多圓形死亡細(xì)胞;而且shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖受到明顯抑制(P ﹤0.0
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