獨一味石油醚提取物對人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞株增殖的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　1.探討獨一味石油醚提取物（petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR）對Tca8113細胞株細胞活性及增殖能力的影響。
　　2.探討獨一味石油醚提取物對Tca8113細胞株細胞克隆形成能力的影響。
　　3.探討獨一味石油醚提取物對Tca8113細胞株細胞凋亡的影響。
　　4.探討獨一味石油醚提取物對小鼠成纖維小包 L929細胞株細胞毒性的

2、影響。
　　5.探討獨一味石油醚提取物對Tca8113細胞株細胞周期的影響。
　　6.探討獨一味石油醚提取物對Tca8113細胞株細胞中BAX，Bcl-2與Casepase3的蛋白表達量的影響。
　　方法：通過磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B，SRB）比色法、生長能力觀察、細胞克隆形成實驗、Annexin V/PI雙染檢測細胞凋亡和流式細胞術來檢測Tca8113細胞株的細胞生長能力、增殖活力及凋亡比例，設

3、置獨一味石油醚提取物（petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR）實驗組、空白對照組,以博來霉素（bleomycin,BLM，10μg/mL)作為藥物對照組，以小鼠成纖維細胞L929細胞株作為細胞對照組檢測PEELR毒性。經Hoechst/PI雙染法觀察Tca8113細胞株細胞形態(tài)、細胞總數(shù)及凋亡、壞死細胞比例。經細胞周期檢測分析細胞周期阻滯情況。蛋白免疫印跡法（Wester

4、n blot）對Tca8113細胞中P53，BAX，Bcl-2與Casepase3蛋白表達量進行檢測。
　　結果：
　　1.24h SRB比色法和Tca8113細胞株生長曲線結果顯示：24h的IC50=66.388μg/mL，PEELR藥物濃度與對Tca8113細胞的增殖抑制率呈正相關；低濃度PEELR（25μg/mL和50μg/mL）對Tca8113細胞的生長能力與空白對照組相比無明顯差異（P＞0.05）；中濃度 PEEL

5、R（100μg/mL）和高濃度PEELR藥物（200μg/mL和400μg/mL）對Tca8113細胞株的長期增殖抑制作用與對照藥物組BLM(10μg/mL)相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）
　　2.細胞克隆形成實驗表明：隨著PEELR濃度的增大，Tca8113細胞株細胞的克隆形成率（即增殖能力）逐漸減??；不同濃度PEELR藥物對Tca8113細胞株細胞均有顯著的增殖抑制效果（P＜0.01）；中濃度PEELR（100μg/mL

6、）和高濃度PEELR藥物（200μg/mL）對Tca8113細胞株的克隆形成能力與對照藥物組BLM(10μg/mL)相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3.Annexin V/PI雙染細胞凋亡比例檢測顯示：PEELR可以誘導Tca8113細胞株細胞發(fā)生凋亡；PEELR濃度與誘導凋亡能力呈正相關；與BLM（10μg/mL）組相比，PEELR組（50μg/mL和100μg/mL）無顯著差異（P＞0.05）；與空白對照組相比，P

7、EELR組的Tca8113細胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有極其顯著差異（P＜0.01）；與BLM（10μg/mL）組相比 PEELR組的Tca8113細胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有顯著差異（P＜0.05）。而不同濃度PEELR組相比均無顯著差異（P＞0.05）。
　　4.細胞毒性試驗顯示：24h的IC50=294.119μg/mL；低、中濃度PEELR對 L929細胞系的影響與空白對照組，藥物對照組相比無明顯差異（P＞0.05）；高

8、濃度PEELR對L929細胞系有抑制作用，呈正相關。
　　5.隨著PEELR藥物濃度的增加，同一視野范圍內細胞總數(shù)呈負相關，而凋亡、壞死細胞比例呈正相關。PEELR組正常細胞無明顯形態(tài)的變化，凋亡細胞可見細胞核皺縮。PEELR組凋亡細胞比率顯著大于壞死細胞比率（P＜0.01）。
　　6.隨著PEELR藥物濃度的增大，其作用24h的Tca8113細胞系細胞周期的SPF指數(shù)和PI增殖指數(shù)均減小。
　　7.Western b

9、lt實驗結果顯示：BAX和Casepase-3的蛋白表達量隨PEELR藥物濃度增大而增大，Bcl-2的蛋白表達量隨 PEELR藥物濃度增大而減小。PEELR各個藥物組均可以降低 Bcl-2/BAX表達比率，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；Bcl-2/BAX表達比率的大小與PEELR藥物濃度呈負相關；高濃度PEELR（150μg/mL、200μg/mL）組的Bcl-2/BAX表達比率小于1。
　　結論：PEELR對體外培養(yǎng)的人舌