液相色譜和加壓毛細(xì)管電色譜分離蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)深入的研究，使得快速、高效、高靈敏度的蛋白質(zhì)分離分析技術(shù)成為國(guó)際、國(guó)內(nèi)研究的熱點(diǎn)，對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)、生物化學(xué)及整個(gè)生命科學(xué)的發(fā)展具有十分重要的意義。 本論文采用ResourceTMRPC反相凝膠短柱，反相高效液相色譜(HPLC)對(duì)瑞氏木霉疏水蛋白HFBI粗提物進(jìn)行初步分離研究，考察了流速、流動(dòng)相梯度時(shí)間、離子對(duì)試劑、緩沖溶液pH等條件對(duì)分離的影響；經(jīng)色譜條件優(yōu)化，5分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)了瑞氏木霉疏水蛋白HFBI的快速分離。結(jié)果表明，

2、高效液相色譜法是分離純化蛋白質(zhì)非常有效的方法。 采用反相微柱液相色譜(μ-HPLC)，9分鐘內(nèi)成功分離了核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白四種蛋白質(zhì)混合物。探討了色譜固定相、反壓、離子對(duì)試劑濃度和不同離子對(duì)試劑對(duì)μ-HPLC分離蛋白質(zhì)的影響。結(jié)果表明，微柱液相色譜流動(dòng)相、樣品消耗少，可以使用較小顆粒的固定相，靈敏度高，是極具潛力的蛋白質(zhì)微分離分析技術(shù)。 以1.5μmnon-poroussilicaC18柱為固定相

3、，反相梯度加壓毛細(xì)管電色譜(p-CEC)7.5分鐘內(nèi)快速、高效分離了核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白四種蛋白質(zhì)?？疾炝穗x子對(duì)試劑、離子強(qiáng)度和電壓對(duì)梯度p-CEC分離蛋白質(zhì)的影響，并且比較了梯度加壓毛細(xì)管電色譜(p-CEC)和微柱液相色譜(μ-HPLC)分離蛋白質(zhì)的效果。結(jié)果表明，梯度p-CEC可以利用電壓精細(xì)調(diào)節(jié)帶電溶質(zhì)的保留，提高分離選擇性，縮短分離時(shí)間，為高效快速分離蛋白質(zhì)開(kāi)辟了新的途徑，在蛋白質(zhì)分離分析及蛋白質(zhì)組學(xué)的研究