親和吸附劑配體篩選新方法的研究.pdf

1、親和吸附劑由于具有選擇性高、適用性廣等優(yōu)點，在生物活性物質分離、天然產(chǎn)物的提取及血液凈化、污水處理等方面得到廣泛的應用。親和吸附劑的配體是決定親和吸附劑選擇性及分離效率的關鍵因素之一。因此，開發(fā)簡便、高效、靈敏的親和配體篩選方法是親和吸附劑研究的重要內容。
　　 本論文利用納米金溶膠特殊的光學性質，首次提出可視的親和配體篩選方法，并對此方法的有效性進行研究。本文嘗試了兩種配體篩選方法：一種方法是將待選配體修飾在金顆粒上，另一種方

2、法是將吸附目標物修飾在金顆粒上，分別向修飾后的金溶膠中加入吸附目標物或含有配體的聚合物，通過觀察金溶膠的變色程度判斷配體與吸附目標物的親和性。
　　 我們分別考察了這兩種配體篩選方法的有效性、靈敏度以及操作便捷性。根據(jù)篩選方法的需求，第一種方法選擇寡肽YpSPTpSPS為吸附目標物，根據(jù)其結構，設計SH-Dpa-Zn2+、SH-DMA、SH-Guanidine、SH-Pyridine四種配體，期望其通過配位、靜電或氫鍵作用與目標

3、肽結合；第二種方法選擇CGGFGGpSG為吸附目標物，設計Dpa-Zn2+、DMAPAA、AAn三種配體，通過配位、靜電或疏水作用與目標肽結合。分別通過兩種篩選方法評估配體與目標肽的親和性，考察篩選方法的靈敏度；同時，制備含有相應配體的吸附劑，通過靜態(tài)吸附實驗驗證兩種方法篩選配體的準確性。
　　 研究結果表明，兩種篩選方法均是有效的，可以初步判斷配體與目標物間的親和性。篩選出的親和性最強的配體制備的吸附劑對吸附目標物均具有很強的

4、吸附能力。兩種篩選方法的操作便捷性相當，第一種方法中金溶膠制備過程較繁瑣，第二種方法需合成含有各種配體的線性聚合物。兩種方法的差別在于：第一種配體篩選方法的靈敏度較低，金溶膠只對配體與目標物間較強的相互作用產(chǎn)生顏色響應，并且只有同時含有多個官能團的吸附目標物才能引起金溶膠聚集變色，因此其適用范圍較小；而在第二種篩選方法中，配體與目標物間較弱的相互作用即可使金溶膠產(chǎn)生顏色變化，靈敏度大幅提高，且此方法是依靠聚合物中配體與金表面目標物之間的

5、相互作用使金溶膠聚集變色的，對目標物的官能團數(shù)量沒有特殊要求。此方法消耗樣品量微少，操作較簡便，是一種可視、靈敏的新型配體篩選方法。
　　 由于金顆粒表面的檸檬酸根呈負電性，可能影響篩選過程中配體與目標物間的靜電作用。因此，我們選用聚乙二醇(PEG)作為金溶膠穩(wěn)定劑，考察不同分子量PEG對金溶膠穩(wěn)定性的影響；通過動態(tài)光散射的方法研究不同分子量PEG修飾金溶膠的Zeta電勢以及飽和修飾量，以此為基礎選擇PEG5k為金溶膠的穩(wěn)定劑，

6、以消除金溶膠的負電荷對配體與目標物間靜電作用的影響。
　　 近年來，隨著分子模擬計算模塊的逐步完善，其在新藥設計及配體篩選中得到了廣泛的應用。本文通過分子對接方法，為中藥有效成分吸附劑篩選高親和性配體。針對黃酮結構特點設計了多種氫鍵類配體，通過Autodock計算成功篩選出對黃酮具有高親和性的二乙胺基配體。由此配體制備的吸附劑可以僅通過一次吸附洗脫即可從銀杏葉提取物中得到純度為99.4％的黃酮產(chǎn)品。
　　 此外，本文亦通