基于適配體的酶分子檢測(cè)新方法.pdf

1、第一章:簡(jiǎn)要介紹了適配體,其中包括核酸適配體和多肽適配體的概念和優(yōu)點(diǎn),論述了基于適配體檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法應(yīng)用,闡述了本文的立題背景、研究?jī)?nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)。
　　第二章:利用核酸適配體的高親和力和酶反應(yīng)的信號(hào)放大功能,發(fā)展了一種熒光分析法檢測(cè)活化蛋白 C?；罨鞍?C被修飾在磁球上的核酸適配體捕獲,之后特異性地催化熒光底物(D-Val-Pro-Arg-ANSNH-C4H9),生成熒光產(chǎn)物,通過(guò)測(cè)定產(chǎn)生的熒光產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)對(duì)活化蛋白 C

2、的檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)便,靈敏度高,特異性強(qiáng)。當(dāng)活化蛋白C的樣品體積為250μL,催化反應(yīng)時(shí)間為2小時(shí),檢出限為0.4 pM,對(duì)應(yīng)0.1 fmole的活化蛋白 C。凝血酶,胰蛋白酶,蛋白酶 K,胰凝乳蛋白酶,豬胰彈性蛋白酶對(duì)活化蛋白 C的檢測(cè)沒(méi)有影響。
　　第三章:我們利用親和性多肽適配體對(duì)凝血酶的特異性捕獲和凝血酶參與的酶催化反應(yīng),發(fā)展了一種靈敏度高,特異性強(qiáng)的凝血酶檢測(cè)法。凝血酶被多肽適配體修飾的磁球捕獲后,將熒光底物(N-p-to

3、syl-Gly-Pro-Arg-7-amido-4-methylcoumarin)催化水解生成熒光產(chǎn)物,通過(guò)測(cè)定產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度來(lái)定量檢測(cè)凝血酶。100μL凝血酶樣品的檢出限為50 fM。該方法靈敏度高,選擇性好,并且可以用于人血漿樣品中凝血酶的檢測(cè)。
　　第四章:本章采用與第三章類似的檢測(cè)原理,使用凝血酶的一種生色底物(序列為 N-P-tosyl-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilide)來(lái)檢測(cè)凝血酶。我們以多肽適配體