柿子單寧對大腸桿菌及蘋果銹果病毒抑制效果研究.pdf

1、近年來，由病毒直接或間接引起的食品安全問題持續(xù)發(fā)生，嚴(yán)重影響了人類的健康生活。由于病毒本身的特征和抗病毒藥物研究方法的局限性，使抗病毒藥物的開發(fā)更困難。柿單寧來源廣泛，具有經(jīng)濟(jì)價值高、綠色無污染的特點(diǎn)。已有研究證實(shí)，柿單寧對12種不同病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，在食品安全領(lǐng)域具有較好的研究價值和廣闊的應(yīng)用前景。
　　本研究以柿子單寧提取物為原料，研究其對大腸桿菌及蘋果銹果病毒（RNA病毒）的抑制效果。研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
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2、柿子單寧對大腸桿菌的抑制效果研究
　　(1)采用試劑盒的方法從帶有氨芐青霉素抗性基因的大腸桿菌中提取質(zhì)粒DNA，并做瓊脂糖凝膠電泳對質(zhì)粒DNA進(jìn)行鑒定，提取到了大腸桿菌質(zhì)粒DNA。
　　(2)將柿子單寧與大腸桿菌混合培養(yǎng)，進(jìn)行大腸桿菌質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)及柿子單寧與轉(zhuǎn)化前的大腸桿菌質(zhì)粒DNA充分接觸后再轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，通過觀察大腸桿菌菌落的生長狀況分析得到:柿子單寧對大腸桿菌細(xì)胞無明顯抑制效果，而對大腸桿菌質(zhì)粒DNA有明顯地抑制作

3、用。并且，僅當(dāng)大腸桿菌質(zhì)粒DNA存在于大腸桿菌細(xì)胞外并與柿單寧充分接觸時，柿子單寧對大腸桿菌質(zhì)粒DNA有抑制作用。
　　(3)分別進(jìn)行原液、2x、4x、8x、16x、32x、64x、128x、256x、512x、1024x的柿單寧濃度和1min、1.5min、2min的柿單寧作用時間對大腸桿菌質(zhì)粒DNA的影響研究試驗(yàn)，結(jié)果表明:當(dāng)離體的大腸桿菌質(zhì)粒DNA與柿單寧接觸時，不同濃度的柿單寧對大腸桿菌質(zhì)粒DNA的抑制程度不同。當(dāng)柿單寧濃

4、度≥0.0005％時，柿單寧濃度越大，其對大腸桿菌質(zhì)粒DNA的抑制強(qiáng)度越大;當(dāng)柿單寧濃度≥0.02％時，大腸桿菌質(zhì)粒DNA完全破壞;當(dāng)柿單寧濃度＜0.0005％時，對大腸桿菌質(zhì)粒DNA無抑制作用;柿單寧在不同作用時間下對大腸桿菌質(zhì)粒DNA的抑制作用無差異顯著性。
　　2柿子單寧對蘋果銹果病毒（RNA病毒）的抑制效果研究
　　(1)從蘋果幼嫩枝條的韌皮部位提取總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR，即RNA-cDNA-

5、PCR擴(kuò)增-瓊脂糖凝膠電泳)方法檢測并驗(yàn)證，提取到了蘋果銹果病毒。
　　(2)采用柿子單寧與蘋果銹果病毒的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增及RT-PCR方法進(jìn)行柿單寧對蘋果銹果病毒（RNA病毒）的影響研究試驗(yàn)，結(jié)果表明:對照蒸餾水對整個試驗(yàn)不存在影響;柿單寧對cDNA和蘋果銹果病毒均有抑制作用;柿單寧對cDNA的抑制強(qiáng)度隨柿單寧濃度的增大而增強(qiáng);當(dāng)柿單寧濃度≥0.19％時，cDNA完全破壞;當(dāng)柿單寧濃度≤0.15％時，此抑制作用隨著柿單寧濃

6、度的降低而減弱。
　　(3)研究在0.50％、0.25％、0.17％、0.13％的柿單寧濃度和30s、1min、2min、4min、6min的作用時間條件下，柿單寧對蘋果銹果病毒的抑制作用，結(jié)果表明:柿單寧作用時間對蘋果銹果病毒基本上沒有影響，柿單寧濃度對蘋果銹果病毒有影響;當(dāng)柿單寧濃度≤0.17％時，柿單寧對蘋果銹果病毒的抑制作用隨柿單寧濃度的增大而增強(qiáng);當(dāng)柿單寧濃度在≥0.25％時，蘋果銹果病毒完全破壞。
　　(4)采用

7、柿子單寧原液（柿單寧含量為1.5％）進(jìn)行柿子單寧對蘋果銹果病毒的影響研究試驗(yàn)，在PCR擴(kuò)增時的柿單寧濃度為0.036％。根據(jù)柿單寧濃度對cDNA的影響研究結(jié)果，0.036％的柿單寧濃度對cDNA沒有抑制作用，因此，可以忽略在試驗(yàn)柿單寧對蘋果銹果病毒的影響研究過程中柿單寧對cDNA的抑制作用。
　　柿子單寧對大腸桿菌質(zhì)粒DNA及蘋果銹果病毒（RNA病毒）均有抑制作用，當(dāng)柿單寧濃度≥0.25％時，大腸桿菌質(zhì)粒DNA及蘋果銹果病毒完全破