基于銪離子熒光微球的降鈣素原快速定量檢測(cè)方法的建立.pdf

1、背景：降鈣素原（Procalcitonin，PCT）是診斷和監(jiān)測(cè)細(xì)菌性炎癥感染的一個(gè)重要臨床診斷標(biāo)志物，在全身炎癥綜合反應(yīng)征和膿毒癥患者的治療和監(jiān)測(cè)中具有極大的應(yīng)用價(jià)值。目前臨床上PCT有多種檢測(cè)方法：膠體金層析檢測(cè)靈敏度低、特異性不強(qiáng)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)耗時(shí)耗力，操作繁瑣；均相熒光檢測(cè)也存在著操作時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)成本高的缺點(diǎn)。
　　目的：本研究用銪離子熒光微球作為抗體標(biāo)記物，旨在建立一種快速、高靈敏度的降鈣素原免疫層析方法，文中對(duì)建立的層

2、析方法進(jìn)行優(yōu)化并對(duì)其性能進(jìn)行評(píng)價(jià)；同時(shí)本研究初步探討了銪離子熒光微球在磁分離均相免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。
　　方法：將PCT單克隆抗體（檢測(cè)抗體）和雞IgY標(biāo)記上銪離子熒光微球（Europium(III) chelated microparticle，簡(jiǎn)稱Eu-CM），然后處理在熒光結(jié)合墊上；另一株P(guān)CT單克隆抗體（包被抗體）包被于硝酸纖維素膜的檢測(cè)線T位置；山羊抗雞IgY抗體包被于硝酸纖維素膜質(zhì)控線 C位置，熒光墊和硝酸纖維素膜組裝組

3、成免疫層析試劑條。血清中的降鈣素原與Eu-CM標(biāo)記的檢測(cè)抗體特異性結(jié)合形成抗原抗體反應(yīng)復(fù)合物，反應(yīng)復(fù)合物沿著硝酸纖維素膜前移，在硝酸纖維素膜 T位置形成包被抗體-PCT-檢測(cè)抗體-Eu-CM復(fù)合物，在C線位置形成山羊抗雞IgY-雞IgY-Eu-CM復(fù)合物，通過(guò)免疫熒光檢測(cè)儀檢測(cè)T、C位置的熒光信號(hào)。用本研究研制的免疫層析試劑條檢測(cè)PCT重組抗原，用SigmaPlot12.5分析該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線，空白檢測(cè)限，最低檢測(cè)限和功能性靈敏度；檢測(cè)

4、60份臨床樣本，Deming’s線性回歸法分析該方法與法國(guó)梅里埃全自動(dòng)酶聯(lián)免疫熒光分析系統(tǒng)的相關(guān)性。在磁分離均相系統(tǒng)中，以PCT單克隆抗體標(biāo)記Eu-CM作為檢測(cè)抗體，另一株P(guān)CT單克隆抗體標(biāo)記生物素作為固相抗體，偶聯(lián)親和素的磁微球用來(lái)分離 Eu-CM-檢測(cè)抗體-PCT-固相抗體-生物素復(fù)合物，初步探索Eu-CM在磁分離均相免疫檢測(cè)中檢測(cè)PCT重組抗原的最低檢測(cè)限。
　　結(jié)果：本研究建立了一種基于Eu-CM的降鈣素原免疫層析檢測(cè)方法

5、，方法的最佳檢測(cè)時(shí)間為15 min，免疫層析方法中PCT標(biāo)準(zhǔn)品空白檢測(cè)限為0.01 ng/ml，最低檢測(cè)限為0.02 ng/ml，檢測(cè)范圍0.02-25 ng/ml，功能性檢測(cè)靈敏度為0.05 ng/ml（CV<10%）。同法國(guó)梅里埃全自動(dòng)酶聯(lián)免疫熒光分析系統(tǒng)相比，兩種檢測(cè)方法間的線性相關(guān)系數(shù)為0.9864（n=60），兩種方法學(xué)具有高度的相關(guān)性。Eu-CM應(yīng)用于磁分離均相免疫檢測(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)曲線匹配二次函數(shù)，函數(shù)方程為y=19170.12