必需氨基酸濃度對奶牛乳腺酪蛋白α-,S1-基因表達的影響.pdf

1、本文研究了冷凍保護液組成和冷凍程序對凍存奶牛乳腺組織活力的影響，并通過乳腺組織體外培養(yǎng)模型，研究了培養(yǎng)體系中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸濃度對奶牛乳腺酪蛋白α<,s1>基因表達的影響。 試驗一、冷凍保護液組成試驗：試驗按照3×3兩因素試驗設計進行，因素一為冷凍保護液中二甲基亞砜濃度，設計為1.0、1.5和2.0mol/L三個水平，每個水平3個重復；因素二為冷凍保護液中蔗糖濃度，設計為0.1、0.2和0.3 mol/L三個水平

2、，每個水平3個重復。結果顯示，用含二甲基亞砜2.0 mol/L、蔗糖0.1mol/L的冷凍保護液保存的乳腺組織其琥珀酸脫氫酶活力顯著高于其他冷凍保護液(P<0.05)，基因組DNA的降解程度顯著低于其他冷凍保護液(P<0.05)。因此，冷凍保護液中含2.0 mol/L，二甲基亞砜、0.1 mol/L蔗糖時，保存乳腺組織可以獲得最佳的活性。冷凍程序試驗：試驗按照2×3兩因素試驗設計進行，因素一為降溫速率，設計為V1(將冷凍管置于4℃平衡3

3、0min，直接放入-20℃)和V2(將冷凍管于4℃平衡30min，用一層棉花包裹冷凍管放入泡沫盒中，放入-20℃)，每個處理3個重復。因素二為-20℃保存時間，設計為2、3、4h，每個處理3個重復。結果顯示，采用降溫速率V2和-20℃保存4h的冷凍程序保存的乳腺組織，其琥珀酸脫氫酶活力顯著高于其他冷凍程序(P<0.05)，基因組DNA的降解程度顯著低于其他冷凍程序(P<0.05)。因此，乳腺組織經(jīng)降溫速率V2并在-20℃放置4h這一冷凍

4、程序保存后，能夠保持最佳的活性。 試驗二、試驗按照單因素有重復試驗設計進行，因素分別為乳腺組織培養(yǎng)體系中賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、蘇氨酸(Thr)和苯丙氨酸(Phe)濃度，每個氨基酸為一個因素，共有四個試驗。乳腺組織培養(yǎng)液中Lys、Met、Thr和Phe濃度分別為170、60、103和105μg/ml。依次分別調整乳腺組織培養(yǎng)液中Lys、Met、Thr和Phe濃度，設計試驗組必需氨基酸濃度，Lys濃度設為120、145

5、、170、195、220、245、270μg/ml；Met濃度設為50、60、70、80、90、100、110；Thr濃度設為73、88、103、118、133、148、163μg/ml；Phe濃度設為75、90、105、120、135、150、165μg/ml，每個處理設3個重復。結果顯示，乳腺組織培養(yǎng)體系中Lys濃度為195μg/ml、220μg/ml時，乳腺酪蛋白α<,S1> mRNA表達豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其

6、中Lys濃度為195μg/ml時，mRNA表達豐度最高。通過擬合曲線估算Lys濃度為197μg/ml時，酪蛋白α<,s1> mRNA表達豐度最高。乳腺組織培養(yǎng)體系中Met濃度為110μg/ml時，乳腺酪蛋白α<,s1> mRNA表達豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。通過擬合曲線估算Met濃度為107μg/ml時，酪蛋白α<,s1>mRNA表達水平最高。培養(yǎng)體系中Thr濃度為118μg/ml、133μg/ml時，乳腺酪蛋白α<,s1

7、> mRNA表達豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其中Thr濃度為133μg/ml時，酪蛋白α<,s1>mRNA表達豐度最高。通過擬合曲線估算Thr濃度為121μg/ml時，酪蛋白α<,s1>mRNA表達豐度最高。培養(yǎng)體系中Phe濃度為120μg/ml和135μg/ml時，乳腺酪蛋白α<,s1> mRNA表達豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其中Phe濃度為135μg/ml時，酪蛋白α<,s1> mRNA表達豐度最高。通過擬

8、合曲線估算Phe濃度為126μg/ml時，酪蛋白α<,s1> mRNA表達豐度最高。因此，乳腺組織培養(yǎng)體系中Lys、Met、Thr和Phe濃度分別為197、107、121和126μg/ml時，酪蛋白α<,s1>mRNA表達豐度最高綜上所述，以DMEM/F<,12>培養(yǎng)液(含2.0mol/L二甲基亞砜、0.1mol/L蔗糖和20％胎牛血清)作為冷凍保護液，采用降溫速率V2并于-20℃保存4h后的奶牛乳腺組織能夠保持最佳的活性。乳腺組織培養(yǎng)