必需氨基酸濃度對(duì)奶牛乳腺酪蛋白α-,S1-基因表達(dá)的影響.pdf

1、本文研究了冷凍保護(hù)液組成和冷凍程序?qū)龃婺膛Ｈ橄俳M織活力的影響，并通過乳腺組織體外培養(yǎng)模型，研究了培養(yǎng)體系中賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸濃度對(duì)奶牛乳腺酪蛋白α<,s1>基因表達(dá)的影響。 試驗(yàn)一、冷凍保護(hù)液組成試驗(yàn)：試驗(yàn)按照3×3兩因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行，因素一為冷凍保護(hù)液中二甲基亞砜濃度，設(shè)計(jì)為1.0、1.5和2.0mol/L三個(gè)水平，每個(gè)水平3個(gè)重復(fù)；因素二為冷凍保護(hù)液中蔗糖濃度，設(shè)計(jì)為0.1、0.2和0.3 mol/L三個(gè)水平

2、，每個(gè)水平3個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示，用含二甲基亞砜2.0 mol/L、蔗糖0.1mol/L的冷凍保護(hù)液保存的乳腺組織其琥珀酸脫氫酶活力顯著高于其他冷凍保護(hù)液(P<0.05)，基因組DNA的降解程度顯著低于其他冷凍保護(hù)液(P<0.05)。因此，冷凍保護(hù)液中含2.0 mol/L，二甲基亞砜、0.1 mol/L蔗糖時(shí)，保存乳腺組織可以獲得最佳的活性。冷凍程序試驗(yàn)：試驗(yàn)按照2×3兩因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行，因素一為降溫速率，設(shè)計(jì)為V1(將冷凍管置于4℃平衡3

3、0min，直接放入-20℃)和V2(將冷凍管于4℃平衡30min，用一層棉花包裹冷凍管放入泡沫盒中，放入-20℃)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。因素二為-20℃保存時(shí)間，設(shè)計(jì)為2、3、4h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示，采用降溫速率V2和-20℃保存4h的冷凍程序保存的乳腺組織，其琥珀酸脫氫酶活力顯著高于其他冷凍程序(P<0.05)，基因組DNA的降解程度顯著低于其他冷凍程序(P<0.05)。因此，乳腺組織經(jīng)降溫速率V2并在-20℃放置4h這一冷凍

4、程序保存后，能夠保持最佳的活性。 試驗(yàn)二、試驗(yàn)按照單因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行，因素分別為乳腺組織培養(yǎng)體系中賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、蘇氨酸(Thr)和苯丙氨酸(Phe)濃度，每個(gè)氨基酸為一個(gè)因素，共有四個(gè)試驗(yàn)。乳腺組織培養(yǎng)液中Lys、Met、Thr和Phe濃度分別為170、60、103和105μg/ml。依次分別調(diào)整乳腺組織培養(yǎng)液中Lys、Met、Thr和Phe濃度，設(shè)計(jì)試驗(yàn)組必需氨基酸濃度，Lys濃度設(shè)為120、145

5、、170、195、220、245、270μg/ml；Met濃度設(shè)為50、60、70、80、90、100、110；Thr濃度設(shè)為73、88、103、118、133、148、163μg/ml；Phe濃度設(shè)為75、90、105、120、135、150、165μg/ml，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示，乳腺組織培養(yǎng)體系中Lys濃度為195μg/ml、220μg/ml時(shí)，乳腺酪蛋白α<,S1> mRNA表達(dá)豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其

6、中Lys濃度為195μg/ml時(shí)，mRNA表達(dá)豐度最高。通過擬合曲線估算Lys濃度為197μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1> mRNA表達(dá)豐度最高。乳腺組織培養(yǎng)體系中Met濃度為110μg/ml時(shí)，乳腺酪蛋白α<,s1> mRNA表達(dá)豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。通過擬合曲線估算Met濃度為107μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1>mRNA表達(dá)水平最高。培養(yǎng)體系中Thr濃度為118μg/ml、133μg/ml時(shí)，乳腺酪蛋白α<,s1

7、> mRNA表達(dá)豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其中Thr濃度為133μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1>mRNA表達(dá)豐度最高。通過擬合曲線估算Thr濃度為121μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1>mRNA表達(dá)豐度最高。培養(yǎng)體系中Phe濃度為120μg/ml和135μg/ml時(shí)，乳腺酪蛋白α<,s1> mRNA表達(dá)豐度顯著高于其他濃度組(P<0.01)。其中Phe濃度為135μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1> mRNA表達(dá)豐度最高。通過擬

8、合曲線估算Phe濃度為126μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1> mRNA表達(dá)豐度最高。因此，乳腺組織培養(yǎng)體系中Lys、Met、Thr和Phe濃度分別為197、107、121和126μg/ml時(shí)，酪蛋白α<,s1>mRNA表達(dá)豐度最高綜上所述，以DMEM/F<,12>培養(yǎng)液(含2.0mol/L二甲基亞砜、0.1mol/L蔗糖和20％胎牛血清)作為冷凍保護(hù)液，采用降溫速率V2并于-20℃保存4h后的奶牛乳腺組織能夠保持最佳的活性。乳腺組織培養(yǎng)