高濃度氨基酸對人腎小管上皮細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：本實驗?zāi)M高蛋白飲食后體內(nèi)氨基酸水平，從細(xì)胞水平觀察高濃度混合氨基酸以及單一高濃度甘氨酸、賴氨酸對腎小管上皮細(xì)胞增殖，分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)和表達(dá)血管緊張素II-1型受體(ATlR)的影響。 方法：實驗分四組：對照組(含5﹪血清的RPMI-1640培養(yǎng)液)；高濃度混合氨基酸組(每種氨基酸的水平高于1640培養(yǎng)液1.5-6倍，含5﹪血清)；高濃度甘氨酸培養(yǎng)液組(僅甘氨酸濃度較1640培養(yǎng)液升高，含5﹪血清)；

2、高濃度賴氨酸培養(yǎng)液組(僅賴氨酸濃度較1640培養(yǎng)液升高，含5﹪血清)。采用對數(shù)生長期的人腎小管上皮細(xì)胞(HK一2細(xì)胞)加入含不同濃度氨基酸的培養(yǎng)液分別孵育12小時、24小時、36小時、48小時。用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測細(xì)胞的增殖能力，觀察不同類型的培養(yǎng)液在不同作用時間對HK-2細(xì)胞增殖的影響；選取刺激增殖作用最明顯的時間，以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測培養(yǎng)上清液中TGF-β1的濃度，用細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測HK-2細(xì)胞表達(dá)

3、ATlR的情況。采用SPSS 13.00統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)值表達(dá)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)，統(tǒng)計分析采用方差分析(S-N-K檢驗)，P<0.05為差異有顯著。 結(jié)果：1．MTT實驗顯示高濃度混合氨基酸組、甘氨酸組、賴氨酸組均能刺激HK-2增殖，各組和對照組比較吸光度都有增加(p(0.05)；各組的促增殖作用在24小時出現(xiàn)，36小時促增殖率最大，48小時有所下降；混合氨基酸組和另外兩個實驗組對比促增殖作用較強，吸光度較

4、高(p<0.05)；甘氨酸和賴氨酸組對比兩組數(shù)據(jù)無差別，促增殖作用相似(p>0.05)。 2．ELISA結(jié)果顯示高濃度混合氨基酸干預(yù)的細(xì)胞上清液中TGF-β1濃度明顯升高，和對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；甘氨酸組和賴氨酸組上清液中TGF-β1濃度和對照組相比無差別(p>0.05)。 3．細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示高濃度混合氨基酸干預(yù)后HK-2表達(dá)ATlR增強，和對照組相比染色明顯加深，平均積分光密度升高，甘氨酸組和賴氨酸組細(xì)

5、胞表達(dá)ATlR和對照組相比無差別(p>0.05)。 結(jié)論：1．高濃度混合氨基酸、高濃度甘氨酸、高濃度賴氨酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖，在24小時出現(xiàn)，36小時達(dá)高峰，隨時間增加促增殖作用略有下降。混合氨基酸促增殖作用明顯較強，甘氨酸和賴氨酸促增殖作用相似； 2．高濃度混合氨基酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞分泌TGF-β1增多，高濃度甘氨酸、高濃度賴氨酸無此作用； 3．高濃度混合氨基酸促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)ATlR上調(diào)，高濃度甘