蚓激酶基因在奶牛乳腺中表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本試驗構建了重組逆轉錄病毒載體，旨在對其包裝獲得重組病毒，為最終獲得其轉基因奶牛乳腺生物反應器提供依據。 首先，將含有山羊β-酪蛋白基因(β-casein)5’區(qū)調控序列(BCP)、蚓激酶基因(lumbrokinase)以及牛生長激素基因polyA(BGHpolyA)序列的表達盒克隆到骨架為Moloney小鼠白血病病毒(缺失基因組)、含有標記基因NeoR的逆轉錄病毒載體pLNCL中，構建了蚓激酶重組逆轉錄病毒載體pLN-BCP-

2、LKR。以生理鹽水為溶劑，將質粒轉染泌乳期奶牛乳腺小葉，收集不同時段奶樣，采用纖維蛋白平板溶圈法(FibrinAgarosePlateAssay，F(xiàn)APA)檢測其纖溶活性，結果顯示，BCP作為乳腺特異性啟動子能指導目的基因即蚓激酶基因在奶牛乳腺組織實現(xiàn)有效表達。 以脂質體為轉染劑，轉染包裝細胞PA317，對pLN-BCP-LKR質粒進行包裝，得到了PI、P2、P3、P4、P5五株可持續(xù)產生病毒顆粒的細胞克隆。通過體外感染NIH3

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