DNA氧化損傷標(biāo)記物8-羥基脫氧鳥苷的毛細(xì)管電泳安培檢測(cè)方法研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳是上世紀(jì)80年代建立并迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)，具有分離效率高、分析速度快、重現(xiàn)性好及樣品用量少等特點(diǎn)，己廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生命科學(xué)、藥物和環(huán)境分析等領(lǐng)域。
　　 研究表明，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)如O2-1、O-、HO2·、·OH、H2O2、RO·、ROO·等可導(dǎo)致DNA氧化損傷，這與衰老、腫瘤的發(fā)生、惡變以及糖尿病和心血管疾病等密切相關(guān)。在二十多種DNA氧化損傷

2、產(chǎn)物中，8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG)被公認(rèn)為是最重要的標(biāo)志物之一。它與DNA復(fù)制與修復(fù)過(guò)程中，導(dǎo)致鳥嘌呤與胞嘧啶及腺嘌呤與胸腺嘧啶發(fā)生錯(cuò)位(G:C→A:T)，堿基脫落及DNA鏈斷裂，誘發(fā)DNA點(diǎn)突變有關(guān)。8-OHdG將是一種很好的評(píng)價(jià)致突變和癌變危險(xiǎn)的標(biāo)記物。由于尿中的8-OHdG不能被進(jìn)一步代謝，因此尿中8-OHdG對(duì)評(píng)價(jià)個(gè)體癌變危險(xiǎn)或診斷與氧自由基相關(guān)疾病方面是一種很有用的

3、標(biāo)記物，在臨床上具有很高的應(yīng)用價(jià)值和推廣意義。
　　 要將8-OHdG作為腫瘤標(biāo)記物用于臨床常規(guī)診斷，首先要建立一種分析速度快、分離效率高、靈敏度高、選擇性好、價(jià)廉、易商品化、可用于常規(guī)分離檢測(cè)8-OHdG的方法。本論文的主要工作就是發(fā)展了一種基于分子印跡萃取、毛細(xì)管電泳-安培檢測(cè)(capillary electrophoresis-amperometric detection，CE-AD)聯(lián)用方法。利用一步分子印記固相微萃取預(yù)

4、處理尿樣，結(jié)合毛細(xì)管在柱富集技術(shù)--動(dòng)態(tài)pH調(diào)節(jié)進(jìn)樣fdynamic pHjunction)，進(jìn)一步提高了方法的靈敏度，使其檢測(cè)限達(dá)到2.6 nmol/L(S/N=3)；8-OHdG濃度在10 nmol/L～1.5μmol/L濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R=0.9999)；遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.1％和4.0％，尿樣的加標(biāo)回收率為85.1％。論文中詳細(xì)討論了分離電壓、檢測(cè)電位、緩沖液濃度及pH值等因素對(duì)分析的