熒光比率法檢測(cè)過(guò)氧亞硝酸根陰離子的研究以及CdTe量子點(diǎn)-米托蒽醌復(fù)合物的形成及其應(yīng)用研究.pdf

1、本論文研究?jī)?nèi)容分為兩部分。第一部分為熒光比率法表征過(guò)氧亞硝酸根陰離子(ONOO-)的方法研究，及基于此建立抗癌藥物米托蒽醌抑制二氧化氮自由基作用評(píng)價(jià)的比率熒光法研究；第二部分為CdTe量子點(diǎn)-米托蒽醌復(fù)合物的形成及應(yīng)用于核酸檢測(cè)的初步研究。第二部分內(nèi)容是基于課題組現(xiàn)行研究課題的新的發(fā)展方向，為實(shí)驗(yàn)中觀(guān)察到的現(xiàn)象的拓展。 第一部分第一章首先簡(jiǎn)要介紹了活性氧自由基的定義及研究意義；綜述了ONOO-的形成、分解、性質(zhì)及其表征方法；系統(tǒng)

2、闡述了熒光比率法的檢測(cè)原理和應(yīng)用的研究進(jìn)展，并在此基礎(chǔ)上提出了本論文第一部分的研究設(shè)想，引用參考文獻(xiàn)160篇。 第一部分第二章對(duì)熒光比率法檢測(cè)過(guò)氧亞硝酸根陰離子的方法進(jìn)行了研究，該章共分為三節(jié)。 第一節(jié)：基于鋱絡(luò)合物發(fā)光的熒光比率法檢測(cè)ONOO-的研究。ONOO-在弱酸性介質(zhì)中易質(zhì)子化生成其共軛酸(ONOOH)，ONOOH均裂生成·OH?！H作用于對(duì)苯二甲酸發(fā)生芳環(huán)羥基化反應(yīng)，生成強(qiáng)熒光物質(zhì)鄰羥基對(duì)苯二甲酸。對(duì)苯二甲酸

3、具有敏化鋱發(fā)光的特性，羥基化導(dǎo)致其敏化活性消失。因此，在對(duì)苯二甲酸一鋱敏化發(fā)光體系中加入ONOO-，將觀(guān)察到鋱的特征發(fā)射受到抑制，同時(shí)伴隨著鄰羥基對(duì)苯二甲酸的特征發(fā)射峰的出現(xiàn)的現(xiàn)象，且隨著ONOO-濃度的加大，430 nm處的鄰羥基對(duì)苯二甲酸特征發(fā)射與545 nm處的鋱?zhí)卣靼l(fā)射之比值呈增大的趨勢(shì)，從而可以利用這兩個(gè)峰的強(qiáng)度變化比來(lái)表征ONOO-。 第二節(jié)：基于芘激基締合物形成的熒光比率法檢測(cè)ONOO-的初步研究。該項(xiàng)研究的基本思

4、路是發(fā)展基于芘的二聚體一單體平衡的、以O(shè)NOO-為目標(biāo)分子的比率型熒光探針，即以芘分子標(biāo)記酪胺，當(dāng)酪胺與目標(biāo)分子ONOO-作用時(shí)易發(fā)生二聚，酪胺的二聚，拉近了分別標(biāo)記于兩個(gè)酪胺分子上的芘分子，兩個(gè)芘分子由于距離接近而出現(xiàn)激基締合物發(fā)射，與之同時(shí)，伴隨著單體發(fā)射的熒光峰減弱，激基締合物態(tài)與單體態(tài)發(fā)射的熒光強(qiáng)度之比IE/IM應(yīng)與目標(biāo)分子ONOO-的濃度相關(guān)，以此為基礎(chǔ)發(fā)展建立基于熒光比率原理的ONOO-熒光分析法。這部分實(shí)驗(yàn)只進(jìn)行了初步的探

5、索，尚未達(dá)到預(yù)期的效果。 第三節(jié)：基于酪氨酸二聚的同步熒光法比率法檢測(cè)ONOO-的研究。酪氨酸與目標(biāo)分子ONOO-作用時(shí)，如果控制酪氨酸的濃度遠(yuǎn)大于ONOO-，可得到單體發(fā)射恒定不變而二聚體的發(fā)射則隨目標(biāo)分子的濃度的增大而增強(qiáng)的同步發(fā)射光譜特征。采用同步熒光掃描，以酪氨酸自身的熒光作內(nèi)參比，二聚酪氨酸的熒光強(qiáng)度與酪氨酸自身的熒光強(qiáng)度的比值與ONOO-的濃度在一定范圍內(nèi)呈線(xiàn)性相關(guān)，且能不受儀器測(cè)試參數(shù)改變影響，從而建立了一種基于內(nèi)

6、參比的同步熒光比率檢測(cè)ONOO-的方法。 第一部分第三章是在第二章第三節(jié)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，建立了用于評(píng)價(jià)抗癌藥米托蒽醌清除二氧化氮自由基效力的熒光法。二氧化碳催化ONOO-產(chǎn)生·NO2，·NO2誘導(dǎo)強(qiáng)熒光酪氨酸二聚體形成。米托蒽醌具有抗氧化活性，當(dāng)體系中引入米托蒽醌時(shí)，米托蒽醌與酪氨酸競(jìng)爭(zhēng)·NO2，抑制酪氨酸二聚，表現(xiàn)為二聚體熒光強(qiáng)度降低。據(jù)此建立了一種間接表征米托蒽醌抗氧化效力的方法。 第一部分第四章是對(duì)第一部分的研

7、究工作的總結(jié)，指出工作的不足，并對(duì)研究工作的前景提出了設(shè)想。 第二部分第一章首先簡(jiǎn)要介紹了量子點(diǎn)及其復(fù)合物研究意義，并在此基礎(chǔ)上提出了研究的設(shè)想。然后根據(jù)文獻(xiàn)合成了水溶性的巰基乙酸包裹的CdTe量子點(diǎn)，進(jìn)而依據(jù)靜電作用原理，制備了量子點(diǎn)-米托蒽醌(QD-MXT)復(fù)合物。與CdTe量子點(diǎn)具有強(qiáng)發(fā)光特性形成強(qiáng)烈反差的是該復(fù)合物中量子點(diǎn)的熒光幾乎完全猝滅，為一非熒光復(fù)合物。當(dāng)QD-MXT復(fù)合物作用于DNA后，由于DNA與米托蒽醌發(fā)生分