大黃魚魚卵和魚精過敏原的性質(zhì)研究.pdf

1、橐簍大學(xué)碩士學(xué)位論文大黃魚魚卵和魚精過敏原的性質(zhì)研究Researchonthecharacterizationoftheallergensintheroeandmiltfromlargeyellowcroaker(Pseudosciaenacrocea)論文答辯日期：至Q量壘生魚旦量旦大黃魚魚卵和魚精過敏原的性質(zhì)研究摘要大黃魚，作為我國重要的經(jīng)濟(jì)魚類，其產(chǎn)量逐年增加。隨著福建大黃魚特色加工區(qū)域的形成和對提高大黃魚加工副產(chǎn)物附加值的重視，

2、大黃魚魚卵和魚精的開發(fā)利用越來越引起研究者的關(guān)注。但是存在于魚卵和魚精中的過敏原若在加工過程中未被去除，則容易引起過敏人群出現(xiàn)過敏反應(yīng)，帶來食品安全問題。這在一定程度上制約了大黃魚加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，開展大黃魚魚卵和魚精過敏原的研究尤為重要。本實(shí)驗(yàn)利用20份大黃魚魚卵過敏患者血清，通過ELISA和Westemblotting分析確定了大黃魚魚卵中的主要過敏原為16kDa的蛋白組分。采用丙酮沉淀、硫酸銨鹽析及系列柱層析(DEAESeph

3、arose、SPSepharose和SephacrylS200HR)等方法，從大黃魚魚卵中純化得到該蛋白并經(jīng)肽指紋質(zhì)量圖譜鑒定其為p’組分(p’一c)。理化性質(zhì)分析結(jié)果顯示，fl-c是一種含糖量為42％的糖蛋白，耐酸堿且具有良好的熱穩(wěn)定性；體外模擬胃腸液消化實(shí)驗(yàn)中，雖然p’一c較易被胃蛋白酶水解，但其消化產(chǎn)物仍具有免疫反應(yīng)性，而相比之下，它對胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶具有較強(qiáng)的耐受性。采用自行制備的兔抗大黃魚魚卵D’c多克隆抗體與鯉魚魚卵、

4、蟹黃、雞蛋等其他13種動(dòng)物卵黃蛋白粗提物進(jìn)行免疫交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，f；-c是魚類魚卵中特有的蛋白。此外，采用陽性混合血清池與8種魚類卵黃蛋白粗提物進(jìn)行抑制性ELISA分析。結(jié)果表明，不同來源的魚卵之間，其過敏蛋白雖然均存在較強(qiáng)的免疫交叉反應(yīng)但也存在一定的差異。利用美拉德反應(yīng)及3種物理加工方式(紫外照射、超聲聯(lián)合加熱、高溫高壓)處理大黃魚魚卵及B’_c，隨后提取卵黃蛋白粗提物，并對其及fI-c進(jìn)行模擬胃腸液二相消化實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，美

5、拉德反應(yīng)能明顯降低大黃魚魚卵過敏原的IgG／IgE結(jié)合活性，超聲聯(lián)合加熱和高溫高壓處理能降低其消化產(chǎn)物的IgG／IgE結(jié)合活性。在此基礎(chǔ)上，開發(fā)了一種利用美拉德反應(yīng)結(jié)合高溫高壓處理加工魚子罐頭的方法。通過該方法制成的魚子罐頭中，魚卵過敏原的IgE結(jié)合活性較低。此外，本實(shí)驗(yàn)利用25份大黃魚魚精過敏患者血清，通過ELISA和Westemblotting分析確定了大黃魚魚精中的主要過敏原為12kDa的蛋白組分。采用硫酸酸解、乙醇沉淀及Seph

6、acrylS200HR柱層析等方法，從大黃魚魚精中分離得到12kDa及分子量相近的多組分蛋白，經(jīng)圓二色光譜分析確定其為魚精蛋白。理化性質(zhì)分析結(jié)果顯示，魚精蛋白是一種含糖量為25％，含有0糖苷鍵，耐酸堿且具有良好熱穩(wěn)定性的堿性蛋白。利用RPHPLC對3種魚類魚精蛋白的組分進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，鮭魚、鯡魚及大黃魚魚精蛋白中分別含有4、3、6個(gè)組分。隨后通過Quickflowheparinaffinitygel柱層析對大黃魚魚精蛋白中的6個(gè)組分