柑橘類黃酮的分離、結(jié)構(gòu)鑒定、化學(xué)修飾及生物活性研究.pdf

1、柑橘是我國的大宗水果，皮中富含精油、果膠和類黃酮等生物活性成分，是一種具有很高開發(fā)潛力的資源。但目前我國柑橘加工業(yè)的副產(chǎn)物--柑橘皮渣基本沒有利用，造成優(yōu)質(zhì)資源的浪費。本研究旨在開展溫州蜜桔皮的基本組成分析，探討柑橘皮中類黃酮化合物的提取工藝和分離純化方法，對純化的類黃酮化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定和化學(xué)修飾改性。同時，通過系列體外抗氧化能力和活性篩選模型進行柑橘類黃酮化合物的生物活性研究，為柑橘皮類黃酮的綜合利用提供理論依據(jù)，主要研究內(nèi)容和結(jié)果

2、如下：
　　 應(yīng)用氨基酸全自動分析技術(shù)對溫州蜜桔皮中蛋白質(zhì)的分析，結(jié)果表明柑橘皮中蛋白質(zhì)百分含量為3．45％(干物質(zhì))，其中必須氨基酸含量占1．34％，蛋白質(zhì)中必須氨基酸占35．96％，略小于大豆分離蛋白中必須氨基酸的39．4％。蛋氨酸和胱氨酸為柑橘皮中的限制性氨基酸。
　　 采用GC-MS技術(shù)對柑橘皮油中的脂肪酸和揮發(fā)油的化學(xué)組成進行分析鑒定，確定柑橘皮油主要含有13種脂肪酸：6種飽和脂肪酸，占脂肪酸總量的27％，主要

3、是十六烷酸19．75％；7種不飽和脂肪酸，占脂肪酸總量的66．62％，主要是9，12-十八碳二烯酸37．14％、亞麻酸19．06％。
　　 溫州蜜桔精油中揮發(fā)性成分基本由烴類化合物組成，占總量的96．56％，其它含量由高到底依次為醇類、醛類、酮類、酯類和酚類化合物。其中烴類化合物以烯烴類不飽和化合物(84．85％)為主，主要是異檸檬油精(25．92％)、2-(1-甲基乙縮醛)-二環(huán)[2，2]庚烷(19．82％)、4-甲基-1-(

4、1-甲乙基)-環(huán)己烯(15．81％)，炔烴化合物以2．乙基-1-辛烯-3-炔(9．20％)為主。醇類、醛類、酮類、酯類和酚類化合物含量相對很少。
　　 應(yīng)用高壓液相色譜及紫外光譜技術(shù)，對柑橘皮中類黃酮的種類進行了分析，初步確定柑橘皮中類黃酮種類應(yīng)有25種左右。
　　 采用二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計研究了柑桔皮中總黃酮的超聲波輔助提取工藝，并對建立的數(shù)學(xué)模型進行了規(guī)劃求解及試驗驗證。結(jié)果表明：pH值對總黃酮得率有極顯著影響，乙醇

5、濃度、液料比以及時間同乙醇濃度之間的和時間同pH值之間的交互項對總黃酮得率有顯著影響，超聲時間對總黃酮得率無顯著影響。經(jīng)試驗驗證，當(dāng)pH值為5．6、乙醇濃度為75％、液料比為26、超聲時間為80min時總黃酮得率最高，達(3．314±0．163)％(n=3)，與理論計算值3．348％基本一致?；貧w模型可較好地預(yù)測柑桔皮中總黃酮的提取得率。
　　 通過硅膠、聚酰胺以及Sephadex HL-20柱對溫州蜜桔皮中類黃酮化合物進行反復(fù)

6、分離純化，從中分離出5種類黃酮單體。借助于ESI-MS和1H-NMR13C-NMR以及紅外光譜等技術(shù)，對五種單體進行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)。它們分別是：化合物A為3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮；化合物B為5，6，7，8，4’-五甲氧基黃酮；化合物C為3-羥基-5，6，7，8，3’，4’-六甲氧基黃酮；化合物D為5，6，7，8，3’，4’-六甲氧基黃酮；化合物E為橙皮苷。其中化合物C在柑橘中是首次報道。
　　 通過亞油酸體系、脂

7、質(zhì)體體系分別對柑橘皮中的5種類黃酮單體抗氧化功能進行了研究，結(jié)果表明，柑橘皮類黃酮具有一定的抗亞油酸氧化的能力，化合物D和化合物C表現(xiàn)出很強的抗亞油酸氧化的能力，化合物B的抑制能力次之，和槲皮素的抑制能力基本一致。而化合物E的抑制亞油酸氧化能力最差，僅比蘆丁略強；柑橘皮中類黃酮單體對共軛二烯(CD-POV)的抑制能力不同，均表現(xiàn)出一定的濃度依賴關(guān)系。抑制能力強弱順序為化合物D>化合物C>化合物B>≈槲皮素>化合物A>化合物E>蘆丁。5種

8、類黃酮單體A、B、C、D、E的半抑制濃度IC50分別為3．11、2．65、0．96、0．35、3．52μg/mL。
　　 比較了5個柑橘類黃酮單體對[·OH]自由基的清除效果，清除能力對濃度具有一定的依賴性。以化合物D和化合物C對[·OH]自由基的清除能力較強，IC50分別為3．2μg/mL和5．6μg/mL，化合物E對[·OH]自由基的清除能力最弱(IC50=13．6μg/mL)。清除能力由強到弱的順序為：化合物D>化合物C>

9、化合物B>化合物A>化合物E>蘆丁。
　　 應(yīng)用MTT法和PTP1B法進行了5種柑橘類黃酮單體的抗腫瘤和抗糖尿病活性篩選，結(jié)果表明僅化合物D和化合物B能有效抑制腫瘤細(xì)胞生長，而對蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯酶PTP1B無有效的抑制作用。
　　 以橙皮苷為原料，經(jīng)糖苷水解、選擇性甲基化、脫氫、脫甲基化、O-異戊烯基化和O-法呢烯基化等反應(yīng)步驟，分別以總收率60％、39％、64％、16％、15％合成了藥用類黃酮天然產(chǎn)物桃皮素、木犀草素