用于HPLC分析生物胺的熒光衍生試劑的開發(fā)及其應(yīng)用.pdf

1、多胺是從微生物到高等生物所有生物體內(nèi)廣泛存在的小分子堿性脂肪族化合物，代表性的物質(zhì)有腐胺(PUT)、亞精胺(SPD)、精胺(SPM)。多胺在生物體內(nèi)起著重要的作用，直接參與生物體內(nèi)的多種生理活動，是生物體生長和細(xì)胞代謝所必需的痕量活性物質(zhì)，生物體內(nèi)多胺的含量與組織的病變、生長發(fā)育的水平有直接的關(guān)系。因此開發(fā)選擇性好、靈敏度高、經(jīng)濟實用的分析多胺的方法一直是人們關(guān)注和研究的熱點之一。反相高效液相色譜柱前衍生熒光檢測法是目前分析生物體內(nèi)多胺

2、的有效方法之一，但大部分衍生試劑在實際應(yīng)用中都存在著不同程度的缺陷，比如因分子質(zhì)量過大，使分離效果降低：因衍生物的疏水性太強，為了得到合適的保留時間，需要增加流動相中的有機溶劑的比例等。 本文為了開發(fā)用于HPLC法分析生物胺的熒光衍生試劑，設(shè)計、合成了幾種分子質(zhì)量較小、疏水性較低的化合物，并測定了光譜性質(zhì)，探討了它們與多胺類化合物的反應(yīng)性能以及衍生物的HPLC行為。 熒光衍生試劑的初始原料選擇2-氨基嫻酸、水楊酸、鄰氨基

3、苯甲酸和V—甲基氨基苯甲酸。其中鄰氨基苯甲酸和N—甲基氨基苯甲酸直接把市售的無水物鄰氨基苯甲酸酐和N—甲基氨基苯甲酸酐作為為熒光試劑，而2-氨基煙酸和水楊酸則合成對應(yīng)的活性酯作為熒光衍生試劑。并選擇己胺和二丙胺，探討了四種熒光衍生試劑與伯胺和仲胺的反應(yīng)性以及衍生物的光譜性質(zhì)。結(jié)果表明，己胺衍生物顯示出較強的熒光，二丙胺衍生物幾乎沒有熒光。反應(yīng)性能方面，在四種熒光試劑中鄰氨基苯甲酸酐的反應(yīng)性最強，在100℃下，反應(yīng)4h時幾乎定量完成。

4、 選擇性能較好的鄰氨基苯甲酸酐為熒光衍生試劑，柱前衍生HPLC法分析了腐胺、亞精胺及精胺混合溶液中的多胺。結(jié)果衍生反應(yīng)在100℃下，反應(yīng)5.5h時衍生物的生成量達到最大。在色譜分析條件為流動相：50mmol·L-1磷酸二氫鈉；乙腈=3：2，激發(fā)波長λex=310nm，發(fā)射波長λem=410nm，流速：1.0mL·mim-1，杠溫為37℃時，得到了分離效果好和保留時間適合的色譜圖。 另外，還合成了八種鄰氨基苯甲酸酐類其它化合物