基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜分析細(xì)菌方法的規(guī)范化研究.pdf

1、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI TOF MS)是最近發(fā)展起來的一種分析化學(xué)技術(shù),能提供各具特征的細(xì)菌質(zhì)量指紋圖譜,實(shí)現(xiàn)檢測和鑒定的目的.該研究通過對MALDI TOF MS分析細(xì)菌的方法進(jìn)行系統(tǒng)的研究,闡明影響MALDI分析的重要實(shí)驗(yàn)因素的作用,并建立MALDI TOF

2、MS分析細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法,從而實(shí)現(xiàn)不同菌種和同一種內(nèi)不同菌株的鑒定,為建立炭疽芽孢桿菌和鼠疫耶爾森氏菌的質(zhì)量圖譜數(shù)據(jù)庫奠定基礎(chǔ),從而能夠快速準(zhǔn)確地檢測和鑒定中國不同來源的炭疽芽孢桿菌和鼠疫耶爾森氏菌,在生物恐怖或傳染性疾病爆發(fā)時,作為微生物法醫(yī)學(xué)的一種重要技術(shù),快速、準(zhǔn)確地鑒定細(xì)菌,并追蹤其來源.方法:根據(jù)研究目的,選擇以下菌株進(jìn)行試驗(yàn):革蘭氏陽性菌包括含芽孢的炭疽芽胞桿菌和不含芽孢的金黃色葡萄球菌;革蘭氏陰性菌包括鼠疫耶爾森氏菌,大

3、腸桿菌和胞外多糖含量高的洋蔥伯克霍爾德氏菌;同一屬內(nèi)不同種的細(xì)菌(伯克霍爾德氏菌屬的7個種);同一種內(nèi)的不同菌株(11株大腸桿菌和20株金黃色葡萄球菌).在試驗(yàn)中,以炭疽芽孢桿菌和鼠疫耶爾森氏菌為目標(biāo)菌,試驗(yàn)了不同的樣品處理方法包括直接分析,溶劑處理(單一溶劑處理和組合溶劑處理)和酶處理(溶菌酶和胰蛋白酶),及不同的實(shí)驗(yàn)因素包括基質(zhì)、基質(zhì)溶劑、處理用溶劑、菌體的量、點(diǎn)樣方法,通過MALDI TOF MS分析提供的細(xì)菌各種成分的質(zhì)量信息,