雙向凝膠電泳聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑液蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　聯(lián)合運(yùn)用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù),研究膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(KOA)與非KOA關(guān)節(jié)滑液蛋白質(zhì)組表達(dá)圖譜的差異,進(jìn)一步闡述KOA的發(fā)病機(jī)制,尋找并初步明確KOA關(guān)節(jié)滑液中的特異性生物學(xué)標(biāo)志,為該病的早期診治、療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供可靠的、準(zhǔn)確靈敏的實(shí)驗(yàn)室參考指標(biāo)。
　　方法:
　　收集2011年8月-2012年4月在解放軍總醫(yī)院行關(guān)節(jié)鏡診治的12例

2、KOA患者與12例非KOA膝關(guān)節(jié)疾病患者(半月板損傷10例,盤(pán)狀半月板2例,均無(wú)明顯關(guān)節(jié)軟骨損傷)關(guān)節(jié)滑液標(biāo)本。KOA患者疾病嚴(yán)重程度分級(jí)采用Kellgren-Lawrence(KL)放射學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。2-DE的第一向電泳采用固相PH梯度電泳,第二向采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析關(guān)節(jié)滑液蛋白質(zhì)組成分。電泳后經(jīng)質(zhì)譜兼容銀染,ImageMaster2DPlatinum軟件分析,將有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)膠內(nèi)胰蛋白酶解,經(jīng)MALDI-TOF-

3、MS鑒定分析,定性后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)定量分析部分具有潛在臨床意義的蛋白。
　　結(jié)果:
　　KOA患者與非KOA膝關(guān)節(jié)疾病患者關(guān)節(jié)滑液相比較,經(jīng)2-DE-質(zhì)譜技術(shù)分析,共鑒定出31個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的蛋白(p<0.05),差異點(diǎn)分布在pI3.0-10.0、分子量14.0kDa-97.0kDa之間。其中25個(gè)(80.6％)被認(rèn)為具有潛在的臨床意義。在這25個(gè)蛋白中,有12個(gè)(48%)結(jié)構(gòu)蛋白,5個(gè)(20%)代謝酶

4、類(lèi),2個(gè)(8%)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,2個(gè)(8%)免疫球蛋白,4個(gè)(16%)其它類(lèi)型蛋白。其中20個(gè)(80%)在KOA滑液中表達(dá)上調(diào),5個(gè)(20%)表達(dá)下調(diào)。組織相容性白細(xì)胞抗原-DR(HLA-DR)、結(jié)合珠蛋白在KOA中表達(dá)上調(diào),且與病情嚴(yán)重程度高度相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.根據(jù)蛋白質(zhì)不同的分子量和等電點(diǎn),通過(guò)2-DE可分離關(guān)節(jié)滑液中蛋白質(zhì)成分,并可利用分析軟件找到KOA關(guān)節(jié)滑液中的差異蛋白質(zhì)。
　　2.KOA與非KOA相比,