根瘤菌NGR234蛋白Y4lO的研究：結(jié)瘤過(guò)程中的共生作用及篩選與Y4lO互作寄主蛋白.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文根瘤菌NGR234蛋白Y4lO的研究：結(jié)瘤過(guò)程中的共生作用及篩選與Y4lO互作寄主蛋白姓名：楊鳳娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：ChristianStaehelin20090603孫逸仙(中山)大學(xué)一碩士學(xué)位論文與YopJ相比較，Y410卻不能乙?；z裂原活化蛋白激酶激酶(mitogenactivatedproteinkinasekinaseMAeKK)。因此酵母雙雜交系統(tǒng)被用來(lái)篩選與Y410互作的寄主蛋白

2、。NGR234誘導(dǎo)菜豆(玉豆l號(hào))形成根瘤(收獲于接種后24天)的RNA被用于構(gòu)建eDNA文庫(kù)。通過(guò)營(yíng)養(yǎng)標(biāo)記基因和p半乳糖苷酶基因(1acZ)的篩選，43個(gè)陽(yáng)性克隆被篩選到。測(cè)序，然后在數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)序列，結(jié)果獲得28個(gè)假定的寄主互作蛋白。3個(gè)獨(dú)立的克隆編碼一種蛋白，該蛋白同源于擬南芥BN乙酰已糖胺酶／己糖胺酶，水解酶，水解氧糖基復(fù)合體(ATHEX2／HEX01)；另3個(gè)獨(dú)立的克隆編碼的蛋白相似于白絨紅蛋鳥巢菌(Nidulaniveoto

3、mentosa)假定ATP合成酶(atps基因)；還有3個(gè)獨(dú)立的克隆編碼大豆(G咖inemax)6磷酸葡萄糖酸脫氫酶的同源蛋白。菜豆谷氨酰氨合成酶，尿酸酶II(uriII)和質(zhì)膜嵌入蛋白1；3(PIP1；3)則分別由2個(gè)獨(dú)立的克隆編碼。此外，還有許多的單個(gè)克隆編碼不同的蛋白，如菜豆l，3，4一三磷酸肌醇5／6一激酶(inositol13，4trisphosphate5／6kinase，ipk3)和肌動(dòng)蛋白等等。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，1，3，

4、4三磷酸肌醇5／6激酶是一種能合成磷酸肌醇的蛋白激酶。對(duì)于植物，種子中磷酸肌醇可作為磷元素的儲(chǔ)備，而且可能起著細(xì)胞信號(hào)分子的作用。肌動(dòng)蛋白是植物骨架的主要組成之一。肌動(dòng)蛋白骨架可能對(duì)根瘤的形成具有重要作用，因此我們就繼續(xù)對(duì)菜豆l，3，4一三磷酸肌醇5／6激酶基因和菜豆肌動(dòng)蛋白進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究。從菜豆eDNA文庫(kù)中擴(kuò)增到以上基因的全長(zhǎng)，并利用酵母雙雜交檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)一步確認(rèn)菜豆1，3，4一三磷酸肌醇5／6一激酶和菜豆肌動(dòng)蛋白與Y410之