壇紫菜自由絲狀體膠囊化超低溫保存.pdf

1、遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文壇紫菜自由絲狀體膠囊化超低溫保存姓名：劉明申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物生理指導(dǎo)教師：王起華19990101壇紫菜自由絲狀體膠囊化超低溫保存采用超低溫冰凍保存技術(shù)保存種質(zhì)可完全終止所有的細(xì)胞代謝活動，排除r遺傳性狀的變異，同時保持細(xì)胞的全能性“]，獲得基因組的穩(wěn)定性““，從而達(dá)到長期(幾年以至IJL年)保存的目的。采用此技術(shù)保存海藻組織細(xì)胞或人工苗可以防止污染，亦可節(jié)省時間、空間和人力，有利于藻類種質(zhì)庫的建立。超低

2、溫保存高等植物種質(zhì)已有大量報道3，微藻方面也有一些報道，如60年代美國HolmHanson””利用液氮保存幾種藍(lán)藻和綠藻；HwangSWm3等人保存22種藻長達(dá)6“8年之久Saks，NM“”用五種鹽澤底棲藻進(jìn)行了液氯冷凍保存的研究；Mor。i。，GJ?！?0年代后期對多種微藻的超低溫保存技術(shù)和方法作了較為深入的研究；Ben—AmotzEl2]對12種海洋單細(xì)胞藻的液氦保存進(jìn)行了研究，認(rèn)為單細(xì)胞海洋藻類的超低溫保存能力與藻類的內(nèi)在特征和細(xì)

3、胞的特定性質(zhì)有密切聯(lián)系；日本Hatan。，SH[I5]對小球藻抗凍性和冰凍保存方面進(jìn)行了深入的研究。在大型海洋藻類方面超低溫保存研究相對較少。VandeerMeet，JPo”等人成功地保存了江籬組織等大型海藻陳國宜‘3]“””對條斑紫菜、壇紫菜和其它幾種紅藻的果孢子的液氯保存作了初步探討；Terumato，1[2“，在大型藻類的超低溫保存方面也作丁一些工作。紫菜是一種大有發(fā)展前途的海水養(yǎng)殖品種。紫菜的生活史包括大型的葉狀配于體階段和微小

4、的絲狀孢子體(即殼斑藻)階段。在實驗室中可在幾個月內(nèi)完成生活史o]，實驗室中培養(yǎng)于液體培養(yǎng)基中的自由絲狀俸生長方式不同于自然著生于貝殼上的貝殼絲狀體，光照、溫度條件對其生長發(fā)育的影響因種而異，且與實驗材料有關(guān)。壇紫菜自由絲狀體的生長發(fā)育與光溫條件密切相關(guān)，Z5uc～29^c是孢子囊枝形成的適宜溫度范圍，光強對孢子囊枝形成的影響僅限于光照時間不長于12h(即短日照)，在25℃～29℃內(nèi)，孢子囊棱的形成速度和形成量隨光強的提高而增太，孢子囊

5、枝形成的適宜光強范圍是10～40；zmol／m2s(約為5975～23901ux)。據(jù)此，可以調(diào)控絲狀體生長發(fā)育進(jìn)程，獲得理想的生長發(fā)育階段的材料。目前，紫菜分離出來的許多株系都是以自由絲狀體形式保存在實驗室中，對自由絲狀體進(jìn)行的超低溫保存近幾年也開展趁來了。KuwanoK等于93年口”、94年o”對條斑紫菜自由絲狀體進(jìn)行了降溫速率01℃一1o℃／分，預(yù)凍溫度40oc，由10DMSOf二甲基亞砜)和05M山梨醇組成的50％海水基礎(chǔ)溶液作

6、為理想的冰凍保護(hù)劑，快速化凍后中性紅染色法與再培養(yǎng)法結(jié)合測定有存活率的超低溫保存研究。利用此程序，94年KuwanoK等n，1同時也對壇紫菜自由絲狀俸作了初步探討，芽活率為66％97年李悔。對不同培養(yǎng)條件對壇紫菜自由絲狀體的常規(guī)超低溫保存的影響作了實驗，實驗結(jié)果巾與Kuwano實驗相同培養(yǎng)條件材料的存活率很低，褒驗三周內(nèi)均為1％。而在短日照、高溫培莽條件F的材料。實驗結(jié)果較之則高。本實驗中對于這兩種培養(yǎng)條件下的自由絲狀i奉進(jìn)行了同他們冰