Ilk1在小鼠睪丸和卵巢中的表達規(guī)律.pdf

1、雄性哺乳動物精子的發(fā)生、成熟是一個非常復(fù)雜的過程，精細胞需要經(jīng)過變態(tài)發(fā)育而成熟，研究發(fā)現(xiàn)許多基因參與這一生理過程;雌性哺乳動物卵泡發(fā)育和閉鎖是決定配子發(fā)育成熟的關(guān)鍵因素。Elk1是MAPK級聯(lián)反應(yīng)的作用底物，MAPK級聯(lián)反應(yīng)可以磷酸化Elk1，進而激活c-fos的啟動子，參與調(diào)控細胞的增殖與分化過程;同時有研究報道，Elk1對細胞的凋亡有一定的調(diào)節(jié)作用。本課題研究Elk1在雄性小鼠和雌性小鼠性成熟過程中的表達規(guī)律，以探究其對精子發(fā)生和卵

2、泡發(fā)育的作用。同時，在小鼠顆粒細胞中研究過表達Elk1對顆粒細胞增殖凋亡的影響，推測Elk1對卵泡發(fā)育、卵泡閉鎖的調(diào)控機制。實驗設(shè)計和結(jié)果如下:
　　 本課題以不同發(fā)育時期（周齡）小鼠睪丸和附睪石蠟切片為實驗材料，檢測Elk1的定位和表達，揭示Elk1在雄性小鼠性成熟過程中的空間和時間表達模式。通過激素(PMSG，HCG)處理不同時間的卵巢，利用免疫組織化學(xué)法研究不同發(fā)育階段卵泡中Elk1的表達定位規(guī)律，揭示Elk1在卵泡發(fā)育中

3、的作用。應(yīng)用顆粒細胞體外培養(yǎng)模式，檢測Elk1在顆粒細胞中的定位模式，以及過表達后對顆粒細胞增殖水平的影響。
　　 實驗結(jié)果說明:(1) Elk1在不同周齡的小鼠睪丸以及附睪中的表達存在差異。western blot結(jié)果說明，小鼠性成熟前Elk1在睪丸中的表達較高，并且主要在曲細精管的精原細胞中表達，性成熟后表達量較低，在精子細胞中也有表達;在附睪中的表達隨著小鼠周齡的增加呈遞增趨勢。Elk1的表達與精子的發(fā)生、成熟過程有一定的

4、關(guān)聯(lián)，在精原細胞中一直有較高水平定位，暗示其可能在精原細胞的進一步分化和自我維持中發(fā)揮作用，而在精子細胞及精子形成過程中表達暗示其可能也在此期間發(fā)揮作用。(2)激素處理小鼠卵巢，發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)排卵的過程中，PMSG能降低卵巢中Elk1的表達量，差異不顯著;HCG能抑制卵巢中Elk1的表達，并且這一抑制作用時間較短。(3)次級卵泡的初級發(fā)育階段Elk1蛋白表達量較低，有腔卵泡與次級卵泡的表達量較高且差異不顯著，但是排卵前卵泡的表達量明顯較有腔