小鼠卵巢中Ezrin的表達(dá)規(guī)律及功能初步研究.pdf

1、已有研究表明ezrin與小鼠的胚胎發(fā)育、胚胎在子宮中附植密切相關(guān)，但目前關(guān)于ezrin及磷酸化 ezrin在小鼠卵巢上的表達(dá)研究及對小鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育的調(diào)節(jié)研究甚少。本論文以小鼠卵巢為試驗(yàn)材料，比較PMSG處理組與非處理組的小鼠ezrin的表達(dá)水平；總結(jié)其在卵巢中的表達(dá)規(guī)律；接著分離了腔前卵泡及有腔卵泡，總結(jié)其在卵泡中的表達(dá)規(guī)律；為闡明ezrin對小鼠卵泡發(fā)育的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　同時(shí)以小鼠GV期裸卵為試驗(yàn)材料，通過Ezrin

2、 siRNA注射，研究ezrin對小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育的影響，并檢測ezrin及磷酸化ezrin在小鼠GV期卵母細(xì)胞、MII期卵母細(xì)胞及體外成熟 MII期卵母細(xì)胞的表達(dá)水平?？偨Y(jié)其在卵母細(xì)胞發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律，為闡明ezrin對小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　研究分為以下二部分：
　　1. Ezrin在不同日齡小鼠卵巢及不同發(fā)育階段小鼠卵泡的表達(dá)
　　以定量PCR方法和免疫組化方法檢測小鼠不同日齡卵巢的Ezrin

3、mRNA轉(zhuǎn)錄和ezrin蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在小鼠卵巢的各個(gè)日齡均有Ezrin mRNA轉(zhuǎn)錄，新生10d的小鼠卵巢最低，性成熟10 w的小鼠卵巢最高；規(guī)律是隨著小鼠日齡越大，表達(dá)量呈增高趨勢。免疫組化染色顯示在小鼠卵巢的各個(gè)日齡ezrin蛋白均有表達(dá)，性成熟10 w的小鼠卵巢陽性表達(dá)最強(qiáng)。
　　PMSG處理組的小鼠卵巢的Ezrin mRNA轉(zhuǎn)錄水平高于非處理組的小鼠卵巢，PMSG處理組6W的表達(dá)量最高，各個(gè)日齡的表達(dá)量有差異。免

4、疫組化染色顯示在小鼠卵巢的各個(gè)日齡ezrin蛋白均有表達(dá)，PMSG處理組6W的卵母細(xì)胞陽性表達(dá)最強(qiáng)，PMSG處理組10 w的間質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)較其它組強(qiáng)。
　　通過免疫組化染色，檢測了超排處理的小鼠卵巢及非超排處理的小鼠卵巢上磷酸化ezrin的表達(dá)，結(jié)果顯示在小鼠卵巢的各個(gè)日齡磷酸化ezrin蛋白均有表達(dá)。
　　通過定量 PCR方法檢測小鼠不同發(fā)育階段卵泡的ezrin表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在小鼠的腔前卵泡及有腔卵泡中均有ezrin表

5、達(dá)，有腔卵泡顯著高于腔前卵泡（P<0.05）。
　　2. Ezrin在小鼠卵母細(xì)胞不同發(fā)育階段的表達(dá)及對小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育的影響。
　　以定量PCR方法和間接免疫熒光法檢測小鼠GV期卵母細(xì)胞、MII期卵母細(xì)胞及體外成熟MII期卵母細(xì)胞中的Ezrin mRNA轉(zhuǎn)錄、ezrin及磷酸化ezrin蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在小鼠卵母細(xì)胞的各個(gè)發(fā)育階段均有Ezrin mRNA轉(zhuǎn)錄，在GV期最低，體內(nèi)MII期最高，體外成熟的MII期卵母細(xì)胞

6、明顯低于體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞，各發(fā)育階段表達(dá)量有顯著差異（P<0.05）。免疫熒光染色顯示在小鼠卵母細(xì)胞的各發(fā)育階段ezrin和磷酸化ezrin蛋白均有表達(dá)，體內(nèi)MII期卵母細(xì)胞的表達(dá)最高。通過顯微注射分別注射Ezrin siRNA和陰性對照物到GV期卵母細(xì)胞中，體外培養(yǎng)3h、10h、18h后，統(tǒng)計(jì)卵母細(xì)胞的發(fā)育率及成熟率，以第一極體排出為成熟標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ezrin siRNA注射組的成熟率顯著低于陰性對照組及空白對照組。同時(shí)也收集了不