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1、 分類號: 學(xué)校代碼:10373 密 級: 學(xué) 號:11015071110 碩士學(xué)位論文 碩士學(xué)位論文 題 目: 目:差異表達(dá)克隆格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1 磁小體合成相關(guān)基因 論文作者 論文作者:
2、 邵美麗 邵美麗 指導(dǎo)教師 指導(dǎo)教師: 李 峰 專業(yè)名稱 專業(yè)名稱: 植物學(xué) 研究方向 研究方向: 應(yīng)用微生物 淮北師范大學(xué)研究生處 二○一三年六月Ⅰ 差異表達(dá)克隆格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense) MSR-1磁小體合成相
3、關(guān)基因 邵美麗(植物學(xué)) 摘要:目 的 : 目 的 : 控制菌體生長過程中的氧分壓,篩選獲得產(chǎn)磁小體菌株的最適條件。 選擇最適方法獲取總 RNA, 通過 mRNA 差異顯示技術(shù), 克隆不同氧分壓下,格瑞菲斯瓦爾磁螺菌(M. gryphiswaldense)MSR-1 磁小體合成相關(guān)基因。 方 法 : 方 法 :將格瑞菲斯瓦爾磁螺菌(M. gryphiswaldense)MSR-1 的液體培養(yǎng)和固體平板計數(shù)法建立對應(yīng)關(guān)系,得出每個 OD6
4、00 含有的活菌數(shù);通過控制同容積中不同培養(yǎng)基的量, 篩選菌體最適培養(yǎng)量; 比較不同方法提取格瑞菲斯瓦爾磁螺菌 (M. gryphiswaldense)MSR-1 RNA,選擇 TaKara RNAiso Plus 試劑盒法提取 RNA;設(shè)計、選擇隨機(jī)引物,將驗(yàn)證后的不同引物組合應(yīng)用于 mRNA 差 異 顯 示 技 術(shù)中 ; 通過 BLAST 比 對 及 生 物 學(xué) 軟 件 , 對差異片段的序列特征、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)等進(jìn)行分析和預(yù)測。 結(jié) 果
5、 : 結(jié) 果 :1、建 立 了 磁螺菌(M. gryphiswaldense)MSR-1 的液體培養(yǎng)和固體平板計數(shù)法對應(yīng)關(guān)系,得出每個 OD600 對應(yīng)的活菌數(shù),為以后的實(shí)驗(yàn)提供較便捷的方法和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。 2、通過控制同容積中不同培養(yǎng)基的量,以此比較磁小體合成情況,篩選獲得了產(chǎn)磁小體菌株和不產(chǎn)磁小體菌株的最適培養(yǎng)基量約分別為 40%和 10%。 3、比較 RNA 提取的不同方法,結(jié)果顯示 RNAiso Plus 試劑盒中其特殊成分能選擇
6、性的與 RNA 結(jié)合,能更有效地清除 DNA 及蛋白質(zhì)污染,提取的 RNA 純度、質(zhì)量較高。 4、通過 mRNA 差異顯示技術(shù)克隆基因,共獲得 2 條有效差異片段。差異片段P-1 中 ORF3 讀碼框編碼 186 個氨基酸,其編碼的蛋白與 Ralstonia solanacearum的保守結(jié)構(gòu)域 PvdE 的同源性為 42% (56/132) 。 PvdE 為它是一個 ABC 型嗜鐵素運(yùn)輸系統(tǒng)、融合 ATP 酶和透性酶組件,主要進(jìn)行細(xì)胞
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