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文檔簡(jiǎn)介
1、氨基酸是生命有機(jī)體的重要組成部分,其分離分析已成為研究的熱點(diǎn)之一。衍生法與色譜法結(jié)合具有高靈敏度、低檢測(cè)限和簡(jiǎn)便可靠等特點(diǎn),在氨基酸生物學(xué)研究中將倍受重視。
在毛細(xì)管電泳(CE)的模式中,膠束毛細(xì)管電泳(MEKC)具有分離中性物質(zhì)的能力,其分離能力的改善主要依靠緩沖溶液組成和性質(zhì)。多種表面活性劑和添加劑的運(yùn)用與修飾,使得MEKC在生物、化學(xué)、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域中獲得了廣泛的應(yīng)用。
本論文圍繞膠束毛細(xì)管電泳,采用
2、三種新型柱前衍生試劑,開展了氨基酸衍生產(chǎn)物的膠束毛細(xì)管電泳方法研究,主要取得了以下幾方面創(chuàng)新性成果:
1、采用一種新型標(biāo)記試劑N-乙酰苯磺酰氟作為氨基酸柱前衍生試劑,進(jìn)行了衍生條件的優(yōu)化,研究以硼砂-Tris二元緩沖體系為背景電解液,考察了緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度、表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)濃度、有機(jī)改性劑種類及分離電壓等幾個(gè)關(guān)鍵條件的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果:采用40 mmol·L-1硼砂-Tris(1:1)緩沖液(pH9
3、.3)、添加140 mmol·L-1的SDS、5%甲醇及10 mmol·L-1三乙胺作為最適分離體系,建立了以硼砂-Tris為背景電解液分離16種N-乙酰氨基苯磺酰氟氨基酸衍生物的毛細(xì)管電泳新方法;
2、采用一種新型標(biāo)記試劑鄰硝基苯磺酰氯作為柱前衍生試劑,在毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜中引入SDS和手性表面活性劑脫氧膽酸鈉SDC混合型膠束的作用模式,建立了分離20種氨基酸衍生物的新方法。研究以硼砂緩沖體系為背景電解液,考察了緩沖液的
4、pH值和離子強(qiáng)度、SDS和SDC的濃度及有機(jī)改性劑甲醇的含量等幾個(gè)關(guān)鍵因素的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用50 mmol·L-1硼砂緩沖液(pH9.0)、140 mmol·L-1的SDS、20 mmol·L-1的SDC、10 mmol·L-1NaCl及7%甲醇作為最適分離體系,20種鄰硝基苯磺酰氯氨基酸衍生物達(dá)到基線分離;
3、采用對(duì)甲基苯磺酰氯作為柱前衍生試劑,利用SDC在膠束電動(dòng)毛細(xì)管中與SDS的協(xié)同作用,建立了毛細(xì)管膠束電
5、動(dòng)色譜用于氨基酸衍生產(chǎn)物的分離新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用40 mmol·L-1硼砂緩沖液(pH9.0)、140 mmol·L-1的SDS、20 mmol·L-1的SDC及7%甲醇的分離條件可使20種對(duì)甲基苯磺酰氯氨基酸衍生物基線分離;
4、建立了D-γ-谷氨酰-色氨酸合成體系,綠豆蛋白酶解液的水解產(chǎn)物體系,以及玉米漿發(fā)酵液體系中氨基酸分析物的定性定量HPCE檢測(cè)的新方法,證明了該種毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜新模式下分離檢測(cè)氨基酸類
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