毛細(xì)管電泳對(duì)支鏈氨基酸分離檢測(cè)方法的研究及應(yīng)用.pdf

1、支鏈氨基酸（BCAAs）是一類(lèi)能夠促進(jìn)人體肌肉合成和緩解疲勞，提高免疫力的重要氨基酸，是運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑中關(guān)鍵的功效成份，定量分析運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑中以及運(yùn)動(dòng)員尿樣中BCAAs的含量不僅能夠達(dá)到對(duì)運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑的質(zhì)量監(jiān)控和功效評(píng)價(jià)的目的，并且還能通過(guò)運(yùn)動(dòng)員BCAAs攝入量和排泄量的關(guān)系來(lái)為運(yùn)動(dòng)員營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑使用方案的開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。另外，人體尿樣中BCAAs濃度的升高還是一些疾病的生物標(biāo)志（如楓糖尿病）。在眾多的氨基酸拆分方法中，毛細(xì)管電泳（CE）技

2、術(shù)因其分析速度快、分離能力強(qiáng)、試劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)而被廣大研究者廣泛應(yīng)用。紫外（UV）檢測(cè)器擁有價(jià)格低廉，應(yīng)用廣泛的優(yōu)勢(shì)。本課題旨在開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便的BCAAs的CE-UV分析方法以期應(yīng)用于上述方面。
　　第一章中主要介紹了CE系統(tǒng)的構(gòu)造與基本原理，并重點(diǎn)闡述了BCAAs補(bǔ)充對(duì)運(yùn)動(dòng)員的重要作用和過(guò)度補(bǔ)充BCAAs（或蛋白質(zhì)類(lèi)運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑）對(duì)人體的危害以及BCAAs需求量和最大可耐受攝入量的測(cè)定方法。提出了CE應(yīng)用于BCAAs分析以及運(yùn)動(dòng)員營(yíng)養(yǎng)

3、補(bǔ)劑使用方案開(kāi)發(fā)的良好前景。
　　第二章主要對(duì)六種背景吸光電解質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)以及與幾種重要氨基酸的電泳淌度進(jìn)行了考察與比對(duì)，并結(jié)合這六種電解質(zhì)的穩(wěn)定性，最終選擇了適用于BCAAs間接紫外檢測(cè)的背景電解質(zhì)對(duì)氨基水楊酸（PAS）。通過(guò)添加EDTA，亮氨酸（Leu）和異亮氨酸（Ile）能夠?qū)崿F(xiàn)部分分離，但L-Ile的色譜峰卻始終與Leu重疊，無(wú)法通過(guò)EDTA的添加實(shí)現(xiàn)分離。因此，后續(xù)的工作重點(diǎn)在于選擇合適的背景添加劑使Leu和Ile完

4、全分離。
　　第三章是BCAAs的CE-間接紫外檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)。通過(guò)對(duì)pH值、背景添加劑濃度以及背景紫外吸光電解質(zhì)濃度等影響條件的優(yōu)化以及影響機(jī)理的討論，最終確定了最優(yōu)分離條件為2.0 mM Na2HPO4，10.0 mM PAS，40.0 mMβ-環(huán)糊精（β-CD），pH=12.2。在此條件下，Leu和L-Ile的分離度為1.0（樣品濃度均為0.5 mM），方法的重現(xiàn)性良好（峰面積的RSD<2.1％，n=5），靈敏度雖低于熒光、

5、質(zhì)譜等檢測(cè)器，但本章中BCAAs的分析方法可以避免繁雜的柱前衍生過(guò)程，并且價(jià)格低廉，可應(yīng)用范圍廣。
　　第四章是基于BCAAs在較低的紫外波長(zhǎng)下（<220 nm）有一定的紫外吸收的原理，開(kāi)發(fā)了BCAAs低波長(zhǎng)直接紫外檢測(cè)方法，在40.0 mM硼砂，40.0 mMβ-CD，pH=10.2的條件下，BCAAs能夠得到完全分離。方法的背景電解質(zhì)組成更加簡(jiǎn)單，同時(shí)檢測(cè)的靈敏度也要高于文獻(xiàn)報(bào)道的相似工作。
　　第五章是間接檢測(cè)法和直接