毛細管電泳對支鏈氨基酸分離檢測方法的研究及應用.pdf

1、支鏈氨基酸（BCAAs）是一類能夠促進人體肌肉合成和緩解疲勞，提高免疫力的重要氨基酸，是運動營養(yǎng)補劑中關鍵的功效成份，定量分析運動營養(yǎng)補劑中以及運動員尿樣中BCAAs的含量不僅能夠達到對運動營養(yǎng)補劑的質量監(jiān)控和功效評價的目的，并且還能通過運動員BCAAs攝入量和排泄量的關系來為運動員營養(yǎng)補劑使用方案的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。另外，人體尿樣中BCAAs濃度的升高還是一些疾病的生物標志（如楓糖尿病）。在眾多的氨基酸拆分方法中，毛細管電泳（CE）技

2、術因其分析速度快、分離能力強、試劑消耗少等優(yōu)點而被廣大研究者廣泛應用。紫外（UV）檢測器擁有價格低廉，應用廣泛的優(yōu)勢。本課題旨在開發(fā)簡便的BCAAs的CE-UV分析方法以期應用于上述方面。
　　第一章中主要介紹了CE系統(tǒng)的構造與基本原理，并重點闡述了BCAAs補充對運動員的重要作用和過度補充BCAAs（或蛋白質類運動營養(yǎng)補劑）對人體的危害以及BCAAs需求量和最大可耐受攝入量的測定方法。提出了CE應用于BCAAs分析以及運動員營養(yǎng)

3、補劑使用方案開發(fā)的良好前景。
　　第二章主要對六種背景吸光電解質的紫外吸收性質以及與幾種重要氨基酸的電泳淌度進行了考察與比對，并結合這六種電解質的穩(wěn)定性，最終選擇了適用于BCAAs間接紫外檢測的背景電解質對氨基水楊酸（PAS）。通過添加EDTA，亮氨酸（Leu）和異亮氨酸（Ile）能夠實現(xiàn)部分分離，但L-Ile的色譜峰卻始終與Leu重疊，無法通過EDTA的添加實現(xiàn)分離。因此，后續(xù)的工作重點在于選擇合適的背景添加劑使Leu和Ile完

4、全分離。
　　第三章是BCAAs的CE-間接紫外檢測方法的開發(fā)。通過對pH值、背景添加劑濃度以及背景紫外吸光電解質濃度等影響條件的優(yōu)化以及影響機理的討論，最終確定了最優(yōu)分離條件為2.0 mM Na2HPO4，10.0 mM PAS，40.0 mMβ-環(huán)糊精（β-CD），pH=12.2。在此條件下，Leu和L-Ile的分離度為1.0（樣品濃度均為0.5 mM），方法的重現(xiàn)性良好（峰面積的RSD<2.1％，n=5），靈敏度雖低于熒光、

5、質譜等檢測器，但本章中BCAAs的分析方法可以避免繁雜的柱前衍生過程，并且價格低廉，可應用范圍廣。
　　第四章是基于BCAAs在較低的紫外波長下（<220 nm）有一定的紫外吸收的原理，開發(fā)了BCAAs低波長直接紫外檢測方法，在40.0 mM硼砂，40.0 mMβ-CD，pH=10.2的條件下，BCAAs能夠得到完全分離。方法的背景電解質組成更加簡單，同時檢測的靈敏度也要高于文獻報道的相似工作。
　　第五章是間接檢測法和直接