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文檔簡介
1、本文選取具有代表性的五種保護氨基酸,根據(jù)保護氨基酸的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)的差異,分別采用毛細管區(qū)帶電泳、毛細管膠束電動色譜以及非水毛細管電泳進行了手性拆分.不同毛細管電泳拆分體系的選擇與運用,為建立拆分N-Fmoc保護氨基酸方法提供了可能.具體內(nèi)容如下:1、毛細管區(qū)帶電泳拆分.選擇DM-β-CD為手性選擇劑實現(xiàn)對Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Val-OH的毛細管區(qū)帶電泳分離.對毛細管電泳的分離條件進行了優(yōu)化,最終獲得分離色譜條件為
2、:毛細管50μm×40cm(有效長度為30cm);電解液:40mmol·L<'-1>磷酸二氫鈉溶液,內(nèi)含商品化20mmol·L<'-1> 2,6-二甲基-β-環(huán)糊精,用Tris調(diào)pH為5.0;電壓:20kv;溫度:毛細管柱溫25℃,樣品恒溫25℃;電極:正向:檢測波長:λ=214nm.在此色譜條件下,Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Val-OH對映體的分離度分別為2.54和1.62.并對Fmoc-Asp(otBu)-OH、
3、Fmoc-Val-OH的實驗方法進行了驗證,結(jié)果顯示該方法準確,可行.同時對環(huán)糊精拆分原理進行了初步的推測:對于兩種N-Fmoc保護氨基酸對映體來說,有可能是保護氨基的疏水骨架-芴甲氧羰?;鶑拇侄丝谶M入環(huán)糊精內(nèi)部疏水空腔中,形成主—客體復合物.在環(huán)糊精的空腔外的氨基酸的羧基和側(cè)鏈,與環(huán)糊精的空腔外緣仲羥基之間形成氫鍵而達到手性識別.2、毛細管膠束電動色譜拆分.選擇γ-CD為手性選擇劑實現(xiàn)對N-Fmoc-Lys(Boc)-OH的毛細管膠束
4、電動色譜分離.對毛細管電動色譜的分離條件進行了優(yōu)化,最終獲得分離色譜條件為:毛細管50μm×40cm(有效長度為30cm);電解液:40mmol·L<'-1>磷酸二氫鈉溶液,內(nèi)含商品化60mmol·L<'-1> γ-環(huán)糊精,100 mmol·L<'-1>十二烷基磺酸鈉(SDS),用氫氧化鈉調(diào)pH為8.3;電壓:18kv;溫度:毛細管柱溫35℃,樣品恒溫25℃;電極:正向;檢測波長:λ=214nm;在此色譜條件下,N-Fmoc-Lys(B
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