中國(guó)鹵蟲胚胎滯育解除過程中akt-pkb基因的作用及表達(dá)模式.pdf

1、本文采用RACE技術(shù)以中國(guó)鹵蟲為實(shí)驗(yàn)材料對(duì)akt的cDNA全長(zhǎng)序列進(jìn)行了研究，利用原位雜交技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分別對(duì)中國(guó)鹵蟲As-akt基因的表達(dá)部位以及As-akt和As-pdk1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1)在中國(guó)鹵蟲不同胚胎發(fā)育時(shí)期、鹽度和溫度脅迫中的表達(dá)量進(jìn)行研究。中國(guó)鹵蟲(Artemia sinica)廣泛分布于鹽湖、鹽田等高鹽水體中，由于含有較高的不飽和

2、脂肪酸和蛋白質(zhì)等特點(diǎn)，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中重要的開口餌料。中國(guó)鹵蟲的生殖方式存在卵胎生和卵生兩種方式。當(dāng)環(huán)境脅迫時(shí)，中國(guó)鹵蟲以卵生方式產(chǎn)生滯育胚胎（滯育卵），以對(duì)抗干燥、寒冷、冰凍等惡劣環(huán)境，以減少不良環(huán)境對(duì)胚胎的影響。此時(shí)，胚胎停止發(fā)育，新陳代謝減慢。因此，滯育在中國(guó)鹵蟲應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫，保護(hù)胚胎存活的的過程中起著非常重要的作用。絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶Akt也被稱做蛋白激酶B(PKB)，是細(xì)胞內(nèi)非常重要的一種信號(hào)分子。Akt在細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖，分化，

3、運(yùn)動(dòng)，葡萄糖穩(wěn)態(tài)，細(xì)胞存活以及細(xì)胞凋亡等多種胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。但對(duì)于akt基因在中國(guó)鹵蟲滯育解除過程中、胚胎發(fā)育過程中以及高鹽、低溫脅迫下的表達(dá)未見報(bào)道，有待進(jìn)一步深入研究和分析。
　　分子克隆和生物信息學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，中國(guó)鹵蟲的akt cDNA全長(zhǎng)序列為1613bp，它包括1416bp的開放閱讀框(open reading frame，ORF)這段序列編碼472個(gè)氨基酸序列。使用ClustalX和MEGA4.0軟

4、件對(duì)中國(guó)鹵蟲akt基因的氨基酸序列與其他物種該基因的氨基酸序列進(jìn)行分子進(jìn)化分析，使用多種在線軟件對(duì)As-akt基因的氨基酸序列的信號(hào)肽、跨膜區(qū)域、親疏水性以及磷酸化位點(diǎn)等進(jìn)行分析。Akt分子量為54.41kD，理論等電點(diǎn)為7.97。
　　原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在0h-20h在胚胎中均勻分布，在40h，3d，5d主要分布在頭部、胸部、腹部以及附屬物質(zhì)里。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示As-akt和As-pdk1在中國(guó)鹵蟲胚胎發(fā)育的各時(shí)