功能化樹(shù)狀大分子及其納米復(fù)合物作為非病毒載體用于基因傳遞的研究.pdf

1、基因治療是一種將核酸作為藥物輸送到特定細(xì)胞或組織以達(dá)到修復(fù)缺陷基因及治療疾病的方法。目前，在基因傳遞領(lǐng)域發(fā)展高效低毒的非病毒載體仍是一項(xiàng)非常具有挑戰(zhàn)性的研究工作，而發(fā)展一種具有高效轉(zhuǎn)染效率或具有靶向功能的納米載體，實(shí)現(xiàn)治療基因的靶向運(yùn)輸，提高治療的特異性，也己成為必然的研究趨勢(shì)。
　　 在本項(xiàng)研究中，我們報(bào)道了兩種基于聚酰胺-胺（Poly（amidoamine）dendrimers，PAMAM)樹(shù)狀大分子的新型基因載體，即烷基化

2、修飾的聚酰胺-胺樹(shù)狀大分子（G5.NH2-Cn，（n代表碳原子數(shù)目，n=6或12））和包裹納米金顆粒的葉酸功能化聚酰胺-胺樹(shù)狀大分子載體(Au DENPs-FA)，分別以沒(méi)有烷基化修飾的第五代PAMAM樹(shù)狀大分子(G5.NH2)以及沒(méi)有葉酸修飾的包裹納米金顆粒的聚酰胺-胺樹(shù)狀大分子(Au DENPs)作為對(duì)照研究這兩類修飾過(guò)的材料作為基因載體的可行性。
　　 本課題主要包含以下研究?jī)?nèi)容:以第五代PAMAM樹(shù)狀大分子為模板，用環(huán)氧

3、己烷或環(huán)氧十二烷修飾得到碳鏈長(zhǎng)度不同的G5.NH2-Cn，以及通過(guò)控制氯金酸/樹(shù)狀大分子摩爾比為25∶1合成得到具有靶向基因傳遞功能的Au DENPs-FA。在不同N/P下將材料與質(zhì)粒DNA混勻形成載體/pDNA復(fù)合物，對(duì)復(fù)合物的電勢(shì)和粒徑進(jìn)行表征;采用凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)確定材料對(duì)質(zhì)粒DNA的包裹封裝能力;MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)材料的細(xì)胞相容性進(jìn)行評(píng)估;最后利用模型細(xì)胞（Hela細(xì)胞）不斷優(yōu)化參數(shù)，找到最適的轉(zhuǎn)染N/P比，研究載體的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)

4、胞內(nèi)吞效率。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:G5.NH2-Cn/pDNA復(fù)合物的粒徑和電勢(shì)是適于細(xì)胞內(nèi)吞的，生物相容性雖然沒(méi)有較大改善，在N/P=1的情況下轉(zhuǎn)染活性有了明顯增強(qiáng)，內(nèi)吞效率也有一定提高;Au DENPs-FA不僅可以高效壓縮質(zhì)粒DNA，在N/P=0.5時(shí)就可以完全壓縮DNA，而且轉(zhuǎn)染效率大大提高，細(xì)胞相容性也有了一定改善，在N/P=2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率是沒(méi)有修飾葉酸的AuDENPs的兩倍以上，葉酸受體屏蔽實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Au DEN