簡介：本實(shí)驗(yàn)研究課題以人宮頸癌細(xì)胞株HELA為研究載體將ADAM10干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入HELA細(xì)胞中通過篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HELA細(xì)胞ADAM10基因沉默細(xì)胞系從而研究HELA細(xì)胞ADAM10基因沉默前后細(xì)胞活性的改變。目的通過研究ADAM10基因沉默前后的HELA細(xì)胞活性的改變找出ADAM10基因引起腫瘤細(xì)胞增殖遷移的作用靶點(diǎn)與可能作用機(jī)制為進(jìn)一步的以ADAM10為核心的腫瘤治療提供更多可靠依據(jù)。方法制備可供轉(zhuǎn)染的高純度環(huán)狀干擾質(zhì)粒熒光顯微鏡觀測轉(zhuǎn)染效率REALTIMEPCR檢測ADAM10基因表達(dá)WESTERNBLOTTING檢測ADAM10蛋白表達(dá)水平MTT法比較沉默前后HELA細(xì)胞增殖的變化TRANSWELL細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞周期變化REALTIMEPCR檢測CD44、CD44V6、CYCLINA1CYCLIND1WESTERNBLOTTING檢測ERK、PERK。結(jié)果轉(zhuǎn)染后得到ADAM10沉默細(xì)胞系幾乎不表達(dá)ADAM10蛋白MTT法顯示沉默前后細(xì)胞增殖有顯著性差異TRANSWELL實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示沉默前后細(xì)胞侵襲有顯著性差異流式細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示沉默ADAM10基因后HELA細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯沉默ADAM10基因后CD44基因表達(dá)無顯著性差異CD44V6基因表達(dá)下調(diào)CYCLINA1無顯著性變化CYCLIND1表達(dá)下調(diào)沉默ADAM10基因后WESTERNBLOTTING顯示ERK表達(dá)無顯著性差異PERK表達(dá)下調(diào)。結(jié)論1HELA細(xì)胞中ADAM10蛋白表達(dá)水平可以影響CD44V6的基因表達(dá)2沉默ADAM10基因后細(xì)胞的侵襲性顯著性降低可能是通過ADAM10蛋白表達(dá)水平影響CD44V6的基因表達(dá)。3沉默ADAM10基因后HELA細(xì)胞出現(xiàn)G1期阻滯細(xì)胞增殖速率降低4沉默ADAM10基因后HELA細(xì)胞出現(xiàn)G1期阻滯其機(jī)制可能與ADAM10調(diào)節(jié)細(xì)胞信號RAS通路引起PERK表達(dá)下降有關(guān)。

簡介：分類號學(xué)號學(xué)號D201078344學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級密級博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文結(jié)直腸癌中新的細(xì)胞亞群結(jié)直腸癌中新的細(xì)胞亞群NCCC的分離與生的分離與生物學(xué)物學(xué)功能的研究功能的研究申請人申請人姓名姓名閔江指導(dǎo)教師師龔建平龔建平教授教授學(xué)科專業(yè)業(yè)外科學(xué)外科學(xué)研究方向向胃腸腫瘤胃腸腫瘤論文起止時(shí)間論文起止時(shí)間20109－20134華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡介：四川I大學(xué)博士學(xué)位論文題目墊蕉墮生絲緝絲生墊鱟塾廛盈甚握壹墊壁疸墊塹盟瘟塾魚墊堡盆塹作者塹塾完成日期2QQ量生壘目培養(yǎng)單位生全盤堂堂隆指導(dǎo)教師墊奎窒墮圭專業(yè)盈塹莖研究方向盤塹紐絲魚金量生塹鱟授予學(xué)位日期年月日四川大學(xué)博上學(xué)位論文胞周期、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞中的超氧化物歧化酶SUPEROXIDEDISMUTASESOD、丙二醛MALEICDIALDEHYDE，MDA的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜受到～一定強(qiáng)度的電磁脈沖處理時(shí)，其通透性障礙受到抑制，細(xì)胞膜上出現(xiàn)微孔，微孔的直徑為LLM級，大小不等，分布不均勻，發(fā)生電穿孔的細(xì)胞幾率達(dá)到8963％。細(xì)胞膜的微絨毛受到損傷，細(xì)胞內(nèi)容物噴出。細(xì)胞周期發(fā)生改變，其中G2期發(fā)生顯著改變。線粒體發(fā)生腫脹，嵴消失，內(nèi)膜斷裂。細(xì)胞核出現(xiàn)染色質(zhì)凝集，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。電磁脈沖處理后細(xì)胞的凋亡率提高78％，與對照組相比顯著提高PM05。通過檢測SOD活性和MDA濃度，發(fā)現(xiàn)電磁脈沖對細(xì)胞內(nèi)的SOD活性和MDA的濃度沒有顯著性影響P005。在體外，將培養(yǎng)到對數(shù)生長期的S180肉瘤細(xì)胞隨機(jī)分為4組，即對照組、電療組、化療組和電化療組。然后分析各組細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡率、SOD活性和MDA濃度。結(jié)果表明，電化療組、電療組、化療組、對照組的凋亡率分別為44131％、7119％、28324％、2516％，電化療組的凋亡率與化療組、電療組、對照組相比，顯著提高FP005。在體內(nèi)，用昆明小鼠復(fù)制S180肉瘤模型，將荷有肉瘤的昆明小鼠隨機(jī)分為對照組、電療組、化療組和電化療組。此外，還用無腫瘤健康小鼠作為空白對照組。然后，檢91|I各組腫瘤抑癯率、治愈率、小鼠衄漿中的SOD、MDA、過氧化氫酶CATALASE，CAT、肝功、腎功、肝指數(shù)、脾指數(shù)，血液電導(dǎo)率和介電常數(shù)。通過免疫組化，檢測腫瘤組織中的血管內(nèi)皮生長因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORVEGF的表達(dá)以及腫瘤微血管的密度MICROVESSELDENSITYMVD。運(yùn)用組織病理學(xué)切片技術(shù)觀察比較各組腫瘤組織的病理變化。結(jié)果表明，電化療組腫瘤抑瘤率、治愈率顯著高于化療組和電療組，表明電化療法能顯著提高抗腫瘤藥物的療效。通過分析，電化療組的治愈率比化療組和電療組的治愈率之和還高，表明電磁脈沖和抗腫瘤藥物相結(jié)合具有協(xié)同增效的作用。電化療組的超氧化物歧化酶和過氧化氫酶顯著提高，丙二醛的濃度顯著降低，提高了機(jī)體的抗氧化能力和減2

簡介：背景干細(xì)胞治療急性心肌梗死是近年來研究的熱點(diǎn)。脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞ADIPOSETISSUEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，ADMSCS作為一種新的細(xì)胞工程的種子細(xì)胞因?yàn)槿〔姆奖?、來源充足、更易被人們所接受等?yōu)點(diǎn)逐漸被大家接受。國內(nèi)、外對于ADMSCS的研究還外于起步階段，其治療機(jī)制的基礎(chǔ)研究還很有限，在臨床應(yīng)用前尚有許多問題有待解決。目前干細(xì)胞移植治療心梗的可能機(jī)制主要有兩種1、MSCS可分化為心肌細(xì)胞。2、通過旁分泌生長因子如HGF、VEGF等來發(fā)揮作用。最近科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞的分化能力存在性別差異，從雌性小鼠肌肉中提取的干細(xì)胞比雄性肌肉中提取的更易分化為身體組織。那么人干細(xì)胞是否也存在分化的性別差異呢性別或其它個(gè)體因素如年齡、是否有高血壓、糖尿病、冠心病等對于干細(xì)胞增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力等生物學(xué)特性是否有影響呢這些問題的解決對于了解ADMSCS本身的生物學(xué)特性，指導(dǎo)ADMSCS基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用具有十分重要的意義。目的一是要建立從人腹部皮下脂肪組織中分離、培養(yǎng)ADMSCS方法，并從表面標(biāo)志物及多向分化潛能方面對其進(jìn)行鑒定，為后續(xù)研究做準(zhǔn)備。二是觀察比較不同人ADMSCS增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力的差別，從細(xì)胞水平探索ADMSCS是否存在個(gè)體差異，為今后干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用提供一種新的視角。內(nèi)容和方法根據(jù)以上目的，本研究分成為兩個(gè)部分第一部分研究人ADMSCS的分離及體外培養(yǎng)；并通過對獲取的細(xì)胞進(jìn)行CD13、CD44、CD45、HLADR和VWF免疫組化細(xì)胞表面間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志的鑒定及成脂、成骨、成心肌多向分化潛能的檢驗(yàn)來驗(yàn)證其是否為間充質(zhì)干細(xì)胞。第二部分對第一部分獲取的人ADMSCS分別采用MTT比色實(shí)驗(yàn)、ELISA雙抗體夾心法、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)來比較不同人ADMSCS在增殖、旁分泌、分化及抗凋亡能力方面的差別。結(jié)果從人腹部皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出長梭形細(xì)胞。這些細(xì)胞的細(xì)胞表面分子CD13、CD44皆陽性，CD45，HLADR、VWF均陰性；具有成脂、成骨、成心肌的多向分化能力。MTT比色實(shí)驗(yàn)示人ADMSCS由OD值描繪的生長曲線大致形狀相似，呈S型。在第5D、7D、9D女性HADMSCS的OD值明顯高于相應(yīng)的男性HADMSCSP＜001，同時(shí)年輕個(gè)體ADMSCS的OD值更高。經(jīng)10UMOLL5AZA誘導(dǎo)24小時(shí)后，流式細(xì)胞技術(shù)示女性HADMSCS的TNT的表達(dá)率普遍高于男性HADMSCS273％±24％VS189％±25％，P＜001，而且年輕個(gè)體的ADMSCS更容易被誘導(dǎo)并表達(dá)TNT。ELISA結(jié)果示女性HADMSCS分泌VEGF和HGF的能力要強(qiáng)于男性HADMSCS，前者為1582±132PG106個(gè)細(xì)胞VS1265±133PG106個(gè)細(xì)胞P＜001，后者為13316±1404PG106個(gè)細(xì)胞VS11790±1541PG106個(gè)細(xì)胞P＜001。用含500UMOLLH2O2的培養(yǎng)基誘導(dǎo)30分鐘后，流式細(xì)胞技術(shù)示女性HADMSCS的凋亡率低于男性HADMSCS1868％±135％VS2521％±157％，P＜001，同時(shí)年輕個(gè)體的AOMSCS更容易被誘導(dǎo)凋亡。結(jié)論1通過酶消化的方法成功地從人皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出具有多向分化潛能的ADMSCS。2HADMSCS在增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力上存在性別差異。年齡也是影響HADMSCS增殖、分化和凋亡的一個(gè)重要因素。個(gè)體本身的冠心病、高血壓、糖尿病狀況并不會影響其ADMSCS的生物學(xué)特性。

簡介：點(diǎn)擊查看更多人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及體外轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號密級UDC編號學(xué)位論文MICRNA134靶向靶向NANOG基因調(diào)控基因調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性MICRNA134REGULATESBIOLOGICALACTIVITIESOFGLIOMACELLSVIAREDUCINGNANOGEXPRESSION楊洋指導(dǎo)教師姓名牛朝詩教授安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院神經(jīng)外科申請學(xué)位級別碩士專業(yè)名稱神經(jīng)外科提交論文日期2013年3月論文答辯日期2013年5月學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)答辯委員會主席教授評閱人教授等2013年05月學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKI中國知識資源總庫，在中國博碩士學(xué)位論文評價(jià)數(shù)據(jù)庫中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文腦動靜脈畸形臨床病理與血管平滑肌細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)研究姓名曾濤申請學(xué)位級別博士專業(yè)神經(jīng)外科指導(dǎo)教師陳銜城20051101●●●◆復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文方法對經(jīng)伽瑪?shù)吨委煹?例CAVM患者的病理標(biāo)本采用HE染色，并用。一平滑肌肌動蛋白SMA、增殖細(xì)胞核抗原PCNA、骨橋蛋白OPN及血管內(nèi)皮生長因子VEGF等抗體進(jìn)行免疫組化研究，其中1例作透射電鏡檢查。結(jié)果CAVM在伽瑪?shù)吨委熜g(shù)后進(jìn)行性的血管病理變化包括內(nèi)皮細(xì)胞損傷、內(nèi)膜增厚，管壁增厚，管腔狹窄。繼之管壁玻璃樣變，管腔逐漸消失。玻璃樣變的管壁或閉塞的管腔可以出現(xiàn)管腔再通。OPN、PCNA在表現(xiàn)為早期放射反應(yīng)的動脈管壁中有強(qiáng)表達(dá)，在晚期放射反應(yīng)的血管中表達(dá)消失；電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷脫落，內(nèi)彈力層分層或者斷裂，血管平滑肌細(xì)胞分布不規(guī)則。內(nèi)膜下、血管中膜及外膜大量膠原沉著為電鏡檢查的特征；L例標(biāo)本見內(nèi)皮細(xì)胞PCNA及VEGF陽性染色的網(wǎng)狀毛細(xì)血管樣血管。結(jié)論放射治療后CAVM血管中層的VSMC增生，部分轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇?。VSMC的遷移、增生是伽瑪?shù)吨委熀蠊芮贿M(jìn)行性狹窄的關(guān)鍵因素。關(guān)鍵詞嚙動靜脈琦形；放射外科伽瑪?shù)恫±鞷免疫組織化學(xué)第三部分骨橋蛋白在腦動靜脈畸形中的表達(dá)及意義目的骨橋蛋白OPN的表達(dá)是合成型血管平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志，也是血管主要細(xì)胞成分的重要趨化因子和黏附分子，在病理性血管重塑過程中起重要作用。本研究旨在探討OPN在人腦動靜脈畸形CAVM血管組織及其在立體定向伽瑪?shù)斗派?、血管?nèi)栓塞治療后的表達(dá)情況并探討其意義。方法42例其中5例經(jīng)過伽瑪?shù)斗派渲委?，LL例經(jīng)歷過血管內(nèi)栓塞治療手術(shù)切除的CAVM病理標(biāo)本進(jìn)行HE及免疫組化染色分析，并檢測畸形血管中OPN的表達(dá)情況。結(jié)果26例無術(shù)前治療史的畸形血管組織中22例OPN有不同程度的表達(dá)，主要表達(dá)在CAVM的靜脈部分，尤多見于管壁不規(guī)則增厚的靜脈。在類似粥樣硬化樣的動脈處也有表達(dá)。正常腦組織的血管中未見有OPN的表達(dá)，表明CAVM血管中有部分VSMC轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇汀０从袩o出血史及畸形血管團(tuán)大小分組進(jìn)行對比分析，未發(fā)現(xiàn)組間有顯著性差異經(jīng)歷伽瑪?shù)吨委煹?例中，2例在早期及中期放射反應(yīng)的動脈中可見OPN的較強(qiáng)陽性表達(dá)。在經(jīng)歷栓塞治療的11／N中，7FF『J在新生內(nèi)膜組織或者異物巨細(xì)胞中見至IJOPN的陽性表達(dá)。結(jié)論OPN在人CAVM血管組織中多有表達(dá)，這是CAVM的血管適應(yīng)血流動力學(xué)狀態(tài)而具有的血管重塑的特征性表現(xiàn)。在放射、血管內(nèi)栓塞治療后的血管組織中的表達(dá)提示它對血管重塑可能發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞』鎣塾靜脈畸形骨橋蛋白確瞬軻卜崩塞一

簡介：分類號分類號密級密級UDC編號編號碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文DADS對DJ1核定位高表達(dá)人白血核定位高表達(dá)人白血病HL60細(xì)胞生物學(xué)行為的影響細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究生姓名秦晶導(dǎo)師姓名、職稱譚暉副教授學(xué)科、專業(yè)名稱病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向白血病防治的分子機(jī)制2014年05月本研究基金資助項(xiàng)目本研究基金資助項(xiàng)目1、國家自然科學(xué)基金2、湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金8110037511K057

簡介：人類胚胎干細(xì)胞HUMANEMBROYNICSTEMCELLS，HESCS及人類誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞INDUCEDHUMANPLURIPOTENTSTEMCELLS，HIPSCS具有無限增殖及多向分化潛能，這不僅為再生醫(yī)學(xué)研究提供了潛在的細(xì)胞來源，而且為建立疾病特異性疾病模型開展研究，以及最終的個(gè)體化治療提供了良好的物質(zhì)基礎(chǔ)。由HESCS分化而來的造血干細(xì)胞已經(jīng)被成功地誘導(dǎo)分化為具有功能的紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板、巨核細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞DC、自然殺傷細(xì)胞NK和功能未確定的T、B淋巴細(xì)胞，而從HESCS分化誘導(dǎo)嗜堿性粒細(xì)胞的相關(guān)工作至今尚無報(bào)道。嗜堿性粒細(xì)胞BASOPHILS是起源于骨髓多能造血干細(xì)胞，在骨髓內(nèi)分化成熟后進(jìn)入外周血的一類細(xì)胞群。其表型及其部分特性和嗜酸性粒細(xì)胞以及肥大細(xì)胞相似。嗜堿性粒細(xì)胞在介導(dǎo)過敏反應(yīng)與發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用中具有重要的功能，并且在增強(qiáng)免疫應(yīng)答記憶等方面發(fā)揮作用。鑒此，探討嗜堿性粒細(xì)胞分化發(fā)育途徑涉及調(diào)控機(jī)制具有重要的理論和研究價(jià)值。嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞均具有相似的細(xì)胞表型和功能。這三種細(xì)胞的早期發(fā)育至今都存在著爭議。有研究表明，嗜堿性粒細(xì)胞早期與嗜酸性粒細(xì)胞一起發(fā)育，也有研究認(rèn)為嗜堿性粒細(xì)胞與肥大細(xì)胞的早起發(fā)育是一條途徑。因此從HESCSHIPSCS向嗜堿性粒細(xì)胞分化發(fā)育的研究將有助于解決這一科學(xué)問題的價(jià)值。鑒此，本研究探索性建立由HESCSHIPSCS來源的、誘導(dǎo)分化成熟的嗜堿性粒細(xì)胞的培養(yǎng)方法，在此基礎(chǔ)上對其生物學(xué)功能進(jìn)行初步探討。第一部分HESCSHIPSCS向早期造血干細(xì)胞分化及其生物學(xué)特性目的建立HESCSHIPSCS向早期造血干細(xì)胞分化的方法，并對HESCSHIPSCS誘導(dǎo)分化的造血干細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行比較。方法①從小鼠胚胎中分離培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維母細(xì)胞（MOUSEEMBRYNICFIBROBLAST，MEF）細(xì)胞，體外擴(kuò)增，并作為滋養(yǎng)層與人類胚胎干細(xì)胞系H1，人類誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞G1、G4、B6、B7共培養(yǎng)保持其生長和未分化能力。②用未分化的HESCSHIPSCS分別與小鼠主動脈性腺中腎區(qū)AGM成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化成早期造血干細(xì)胞。③經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測分析這幾組誘導(dǎo)分化后的早期造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物特征。④經(jīng)PTPCR檢測HESCS誘導(dǎo)的早期造血干細(xì)胞的基因表達(dá)。結(jié)果①經(jīng)體外分離、消化、傳代培養(yǎng)出大量的MEF細(xì)胞，作為HESCSHIPSCS的滋養(yǎng)層細(xì)胞，促使其快速生長繁殖而不分化。②經(jīng)未分化的HESCSHIPSCS與小鼠AGM成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)14D后，可以成功誘導(dǎo)出大量的早期造血干祖細(xì)胞。③通過流式檢測分析，發(fā)現(xiàn)經(jīng)本實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)培養(yǎng)的早期造血干祖細(xì)胞具有向紅系、內(nèi)皮系、髓系等細(xì)胞分化的能力，進(jìn)一步證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)所采用培養(yǎng)方法能大量有效誘導(dǎo)出早期二次造血干祖細(xì)胞。④經(jīng)過RTPCR的檢測發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法早在共培養(yǎng)階段就可以檢測到早期造血調(diào)控所必須的基因CD34、CKIT、GATA1的表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了本方法誘導(dǎo)培養(yǎng)出早期造血干祖細(xì)胞的有效性。結(jié)論通過HESCSHIPSCS與小鼠AGM成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)方法可以大量、有效地誘導(dǎo)出早期的二次造血干細(xì)胞。第二部分HESCSHIPSCS向成熟嗜堿性粒細(xì)胞誘導(dǎo)分化及生物學(xué)特性目的建立人類胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞向嗜堿性粒細(xì)胞分化的方法，并鑒定其極其生物學(xué)特性。探討由人類胚胎干細(xì)胞經(jīng)分化得到的嗜堿性粒細(xì)胞的趨化能力及釋放組胺功能。方法①經(jīng)過不同細(xì)胞因子的三階段的誘導(dǎo)法得到一定量的含有堿性顆粒的粒細(xì)胞。②通過光學(xué)顯微鏡觀察，對細(xì)胞的增殖進(jìn)行計(jì)算統(tǒng)計(jì)利用MAYGIEMASA、TOLUIDINEBLUE染色對細(xì)胞大體形態(tài)染色觀察免疫熒光染色對其細(xì)胞顆粒進(jìn)行特異性的染色，并且將其與嗜酸性粒細(xì)胞作比較，證實(shí)所誘導(dǎo)的細(xì)胞為嗜堿性粒細(xì)胞。③通過FACS和半定量RTPCR對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行表型和基因檢測，同時(shí)用嗜酸性粒細(xì)胞作為對照進(jìn)行比較性研究。④用不同濃度的N甲酰化甲硫酰亮氨酰苯丙氨酰胺FMLP，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子EOTAXIN，F(xiàn)CΕRICRA1置于TRANSWELL板下室，觀察細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞的趨化能力，并且與嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行比較研究。⑤用不同濃度的FMLP，EOTAXIN、FCΕRICRA1置于TRANSWELL板下室，觀察嗜堿性粒細(xì)胞的趨化能力，并且與嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行比較研究。⑥用不同濃度的FCΕRICRA1在液體培養(yǎng)第14天與第21天刺激嗜堿性粒細(xì)胞，收集上清，并裂解細(xì)胞，收集細(xì)胞內(nèi)含有的因子。用ELISA檢測試劑盒檢測胞內(nèi)和分泌組胺量，并算出組胺釋放率。結(jié)果①經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)3天后開始大量增殖，7天開始增殖速度明顯加快，一般在兩周達(dá)到細(xì)胞增殖的高峰，兩周后鏡下觀察，細(xì)胞呈不規(guī)則且顆粒粗大。②MAYGIEMASA染色可見大約214％的細(xì)胞呈現(xiàn)胞體不規(guī)則形，胞漿胞內(nèi)可見粗大的藍(lán)紫色顆粒，胞核為單核或者分葉兩葉核約419％的細(xì)胞胞內(nèi)含有紫紅色的異染顆粒免疫熒光染色可見此類細(xì)胞，胞內(nèi)顆粒表達(dá)2D7但不表達(dá)EPO，高表達(dá)PROMBP而低表達(dá)MBP。③HIPSCS來源細(xì)胞向嗜堿性粒細(xì)胞誘導(dǎo)后，2D7EPO的細(xì)胞比例遠(yuǎn)高于HESCSH1來源的細(xì)胞PROMBP陽性率高于HESCS，而MBP陽性率卻比HESCS低。④通過FACS分析，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面有嗜堿性粒細(xì)胞特異性標(biāo)志的表達(dá)，并且RTPCR的檢測也證實(shí)這些細(xì)胞不含有嗜酸性粒細(xì)胞的基因。⑤趨化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，嗜堿性粒細(xì)胞比嗜酸性粒細(xì)胞的趨化功能更強(qiáng)。⑥嗜堿性粒細(xì)胞能有效地釋放組胺，而且在液體培養(yǎng)第21天的釋放量比第14天多。結(jié)論通過細(xì)胞因子的三步誘導(dǎo)方法可以從HESCS成功有效地誘導(dǎo)得到一定比例的成熟的嗜堿性粒細(xì)胞，并且在HIPSCS的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中也得到了驗(yàn)證。此嗜堿性粒細(xì)胞具有其特有的趨化功能，并且經(jīng)FCΕRⅠ刺激能釋放組胺。本研究證實(shí)了該誘導(dǎo)方法可靠，這對嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)疾病研究和藥物開發(fā)建立了特異性疾病模型，具有重要的理論價(jià)值。

簡介：獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得注；如沒查其他盂要掛別直明數(shù)奎攔互窒或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名宿琴Z變、簽字日期鐘么月，日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名旃查＼導(dǎo)師簽字乏歌簽字日期晰‘月歹日簽字日期杖。腳年6月√日NFKB沉默對鼻咽癌58F細(xì)胞的生物學(xué)作用研究中文摘要目的構(gòu)建人NFKB基因小干擾RNASIRNA重組質(zhì)粒表達(dá)載體，沉默人鼻咽癌58F細(xì)胞中NFKBP65基因的表達(dá)，探明NFKB在鼻咽癌中的生物學(xué)作用，為鼻咽癌防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1根據(jù)GENBANK中人NFKBP65的表達(dá)序列，設(shè)計(jì)、合成NFKB特異性干擾序列SINFKB，同時(shí)合成陰性序列HK，合成的干擾序列的正義鏈和反義鏈退火合成雙鏈DNA干擾片段，將干擾DNA片段亞克隆到PGENESI卜I2質(zhì)粒表達(dá)載體上，構(gòu)建重組NFKBP65特異性抑制的質(zhì)粒表達(dá)載體PGENESIL一12一NFKB和重組陰性表達(dá)質(zhì)粒載體PGENESIL一12一HK。2將構(gòu)建的重組質(zhì)粒表達(dá)載體PGENESIL一12一NFKB、PGENESIL一12HK分別轉(zhuǎn)入JML09菌株進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，提取質(zhì)粒并純化。3應(yīng)用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒表達(dá)載體PGENESIL一12一NFKB、PGENESIL一12HK分別轉(zhuǎn)染人鼻咽癌58F細(xì)胞，顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)，分析轉(zhuǎn)染效率。4實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組未轉(zhuǎn)染載體的58F細(xì)胞、陰性對照組轉(zhuǎn)入PGENESIL一12一HK質(zhì)粒表達(dá)載體的58F細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)入PGENESIL一12一NFKB質(zhì)粒表達(dá)載體的58F細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48H后采用WESTERNBLOTTING方法檢測鼻咽癌細(xì)胞中NFKBP65基因的蛋白表達(dá)水平。采用MTT及流式細(xì)胞儀分析NFKB沉默對鼻咽癌58F細(xì)胞的增殖抑制作用以及對細(xì)胞周期的影響。結(jié)果1成功構(gòu)建PGENESI卜12一NFKB重組質(zhì)粒表達(dá)載體。2與對照組和陰性對照組比較，轉(zhuǎn)入PGENESIII2一NFKB重組質(zhì)粒表達(dá)載體的58F細(xì)胞，NFKBP65蛋白表達(dá)明顯下降，對照組與陰性對照組比較，58F細(xì)胞NFKBP65蛋白表達(dá)無明顯差異。說明NFKBP65SIRNA能抑N58F

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文RUNX3基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制姓名王國安申請學(xué)位級別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師房殿春20080501第二軍醫(yī)大學(xué)L尊十學(xué)位論文度明顯減慢。PADEASY一卜RUNX3A、PADEASY一1一RUNX3B組PI值分別明顯低于MKN28、PADEASY一1組。PADEASY一卜RUNX3A和PADEASY一卜RUNX3B組細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)較MKN28細(xì)胞和PADEASY一1組顯著降低83．1±9．7，87．6±10．4VS192．8±9．7，193．6±9．3，P0．05。6RUNX3可導(dǎo)致胃癌細(xì)胞VEGFCMRNA表達(dá)水平明顯下降，ENDOSTATINMRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)。7RUNX3可導(dǎo)致胃癌細(xì)胞ECADHERIN、TIMP一1MRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，MMP7MRNA表達(dá)水平明顯下降。8RUNX3可導(dǎo)致胃癌細(xì)胞突變型P53和MRPLMRNA表達(dá)水平明顯下降。結(jié)論1RUNX3可能導(dǎo)致VEGFC表達(dá)下降、ENDOSTAIN表達(dá)增加、血管生成減少。2RUNX3可能導(dǎo)致ECAD、TIMP一1表達(dá)增加、MMP一7表達(dá)減少。胃癌細(xì)胞侵襲能力減弱。3RUNX3可能導(dǎo)致突變型P53和MPRL表達(dá)減少，導(dǎo)致胃癌細(xì)胞增殖減慢、凋亡加速，耐藥性減弱。4RUNX3會導(dǎo)致胃癌細(xì)胞增殖減慢，凋亡增加，侵襲和轉(zhuǎn)移能力減弱。關(guān)鍵詞胃癌；RUNX3；VEGFC；ENDOSTATIRL；CD34；ECAD；MMP一7；TIMP一1；MTP53；MRPL；PADEASY一17

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文食管腫瘤干細(xì)胞分離及生物學(xué)性狀的初步研究姓名孫志剛申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（胸心外科）指導(dǎo)教師張寶仁徐志云20070501

簡介：分類號密級UDC學(xué)號南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文紫外線輻射誘導(dǎo)紫外線輻射誘導(dǎo)DNA損傷時(shí)損傷時(shí)ROCK2磷酸化位點(diǎn)的鑒定及對肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性影響的研究磷酸化位點(diǎn)的鑒定及對肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性影響的研究THERESEARCHONTHEIDENTIFICATIONOFROCK2PHOSPHYLATIONSITESITSEFFECTONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFHEPATOMACELLSINUVRADIATIONINDUCEDDNADAMAGE黃子曦黃子曦培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱邵江華教授申請學(xué)位的學(xué)科門類醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱外科學(xué)（普通外科）論文答辯日期2014年6月6日答辯委員會主席評閱人2014年6月摘要II摘要目的目的通過鑒定ROCK2磷酸化位點(diǎn)來研究其對肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，并明確ROCK2在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法方法1通過磷酸化位點(diǎn)預(yù)測軟件以及生物信息學(xué)分析ROCK2結(jié)構(gòu)，并設(shè)計(jì)可能發(fā)生磷酸化位點(diǎn)的磷酸化多肽。2分別對HEPG2細(xì)胞和MHCC97H細(xì)胞進(jìn)行UV照射，通過WESTERNBLOT分析ROCK2可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)。3應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)，觀察UV輻射誘導(dǎo)DNA損傷時(shí)，ROCK2磷酸化位點(diǎn)對肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。結(jié)果結(jié)果1ROCK2可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有1S4422S7713T814。2UV照射后，ROCK2的T814位點(diǎn)發(fā)生磷酸化。3UV照射后，MTROCK2組的克隆形成率比WTROCK2組低。4UV照射后，MTROCK2組的細(xì)胞凋亡率比WTROCK2組高。結(jié)論結(jié)論1UV輻射誘導(dǎo)DNA損傷時(shí)，ROCK2的T814位點(diǎn)發(fā)生磷酸化。2ROCK2的T814位點(diǎn)磷酸化對UV造成的DNA損傷具有修復(fù)作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞原發(fā)性肝細(xì)胞癌；ROCK2；DNA損傷；磷酸化；UV

簡介：背景作為最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤，星形細(xì)胞瘤通常具有無限增殖和侵襲性生長的特點(diǎn)，盡管目前已有多種治療手段，但該病的整體預(yù)后仍欠佳，因而仍有必要深入研究其腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制以尋找新的有效治療靶點(diǎn)。P38Γ是P38MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）的四個(gè)亞型之一，正常情況下僅表達(dá)于骨骼肌組織。近年來的一些研究發(fā)現(xiàn)P38?？赡軈⑴c一些潛在的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的調(diào)節(jié)過程，表明其在腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展過程中潛在的致瘤性，但具體作用機(jī)制仍然不明。目前國內(nèi)外尚未有研究揭示P38Γ在人腦星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)情況及其對腫瘤生物學(xué)行為的影響。目的探討P38Γ在人腦星形細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)情況及與各項(xiàng)臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。構(gòu)建沉默人P38?；虮磉_(dá)的SIRNA序列并篩選出有效SIRNA序列，為后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)研究P38Γ的生物學(xué)功能提供基礎(chǔ)。探討P38Γ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等多種生物學(xué)特性的影響及相關(guān)的作用機(jī)制。方法標(biāo)準(zhǔn)化采集61例人星形細(xì)胞瘤和5例非腫瘤性腦組織標(biāo)本，分別用WESTERNBLOT及免疫組化法檢測前述標(biāo)本中P38Γ和HTERT蛋白的表達(dá)差異，分析P38Γ表達(dá)水平與星形細(xì)胞瘤患者各項(xiàng)臨床病理指標(biāo)的關(guān)系。設(shè)計(jì)針對P38Γ的SIRNA片段（3對），借助LIPOFECTAMINETM2000轉(zhuǎn)染入人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，使用熒光定量REALTIMEPCR及WESTERNBLOT評價(jià)沉默效率，篩選出最有效的干擾序列用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。運(yùn)用CCK8、流式細(xì)胞術(shù)、TRANSWELL實(shí)驗(yàn)等技術(shù)觀察SIRNA沉默P38Γ后U251細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的變化。同時(shí)為研究前述變化的具體作用機(jī)制，檢測HTERT、MMP2及MMP9蛋白含量WESTERNBLOT，端粒酶活性（TRAPPCR銀染法），CASPASE39酶活性（分光光度法）及細(xì)胞骨架形態(tài)（免疫熒光染色）。結(jié)果1與非腫瘤性腦組織相比，星形細(xì)胞瘤中P38Γ蛋白的表達(dá)明顯升高，且在高級別星形細(xì)胞瘤中表達(dá)量高于低級別星形細(xì)胞瘤P＜005。HTERT蛋白的表達(dá)規(guī)律亦如此，且與P38Γ蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān)P＜001。但P38Γ表達(dá)水平與患者年齡、性別及腫瘤直徑不相關(guān)P＞005。2REALTIMEPCR和WESTERNBLOT分析顯示，三組P38ΓSIRNA干擾序列轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后，P38ΓMRNA和蛋白表達(dá)均受到抑制P＜005。其中SIRNA3片段（針對1168位點(diǎn)）沉默效率最高，與空白及陰性干預(yù)對照組相比，其P38ΓMRNA抑制率達(dá)（927±112）％，P38Γ蛋白表達(dá)下降達(dá)（622±129）％P＜001。3U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染P38ΓSIRNA后，其細(xì)胞增殖率為（470±23）％凋亡率為（1197±041）％，與空白及陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。SIRNA沉默P38Γ基因的U251細(xì)胞中HTERT蛋白表達(dá)受到明顯抑制，端粒酶活性顯著下降，CASPASE39酶活性顯著上升，與另外兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。4U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染P38ΓSIRNA后，遷移穿膜細(xì)胞數(shù)為440±10，侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)為306±09，與空白及陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。免疫熒光顯微鏡下可見，抑制P38Γ表達(dá)的U251細(xì)胞中肌動蛋白細(xì)胞骨架明顯紊亂，稀疏，成束性結(jié)構(gòu)減少。侵襲相關(guān)蛋白MMP2和MMP9蛋白的表達(dá)相比另外兩組均下降P＜001。結(jié)論1P38Γ蛋白在人腦星形細(xì)胞瘤中異常高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。2U251細(xì)胞中的P38Γ因SIRNA干擾而下調(diào)后，可能經(jīng)由抑制HTERT表達(dá)進(jìn)而降低端粒酶活性，從而起到抑制U251細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡的作用。3U251細(xì)胞中的P38Γ被SIRNA沉默后，可能通過紊亂肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，下調(diào)侵襲相關(guān)蛋白MMP2和MMP9的表達(dá)來降低U251細(xì)胞的遷移侵襲能力。4P38Γ在人腦星形細(xì)胞瘤中扮演瘤基因的角色，可能是潛在的膠質(zhì)瘤診斷和治療靶點(diǎn)。

簡介：目的通過研究不同代次人髓核細(xì)胞的形態(tài)、增殖活性和表型表達(dá)變化，篩選出組織工程椎間盤研究適宜的種子細(xì)胞，并研究轉(zhuǎn)化生長因子Β1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，TGFΒ1和胰島素樣生長因子1INSULINLIKEGROWTHFACT1，IGF1對髓核細(xì)胞增殖和表型表達(dá)的影響，探討TGFΒ1和IGF1在組織工程椎間盤研究中的應(yīng)用價(jià)值，通過制備聚乳酸羥基乙酸PLGA三維框架，將種子細(xì)胞與框架結(jié)合，體外構(gòu)建組織工程椎間盤。方法1從人正常和退變髓核組織分離培養(yǎng)髓核細(xì)胞，分別取不同代次細(xì)胞作為研究對象，通過光鏡和電鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，對生長曲線、MTT攝取等進(jìn)行測定，RTPCR方法測定細(xì)胞的聚集蛋白聚糖AGGRECAN、Ⅰ型和Ⅱ型膠原蛋白MRNA的表達(dá)，來確定組織工程椎間盤的種子細(xì)胞。2將人正常傳2代髓核細(xì)胞作為研究對象，采用MTT二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽法和RTPCR技術(shù)，探索TGFΒ1和IGF1對細(xì)胞的形態(tài)、增殖以及Ⅱ型膠原和AGGRECAN的調(diào)節(jié)作用，及其時(shí)效與量效的關(guān)系。3將人正常髓核細(xì)胞種植于聚乳酸羥基乙酸PLGA三維多孔框架，構(gòu)建了組織工程椎間盤，通過MTT攝取、激光共聚焦熒光顯微鏡及掃描電鏡的方法進(jìn)行體外觀察。結(jié)果1體外培養(yǎng)條件下，可見退變髓核細(xì)胞排列較紊亂，粗面內(nèi)織網(wǎng)輕度擴(kuò)張。在接種相同的細(xì)胞密度和相同的培養(yǎng)條件下，成人正常和退變髓核細(xì)胞的生長曲線存在差異；二者的MTT攝取在傳1代時(shí)差異均無顯著性P＞005，傳3、5代時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。不同代次正常髓核細(xì)胞比較，傳3代之前細(xì)胞形態(tài)良好，從傳4代起，部分細(xì)胞向長梭形演化，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。生長曲線和MTT試驗(yàn)提示傳3代之前的細(xì)胞增殖能力強(qiáng)。RTPCR實(shí)驗(yàn)提示，正常髓核細(xì)胞前3代表達(dá)Ⅱ型膠原和AGGRECAN旺盛，從傳4代起開始減少，其中AGGRECAN減少更明顯；退變髓核細(xì)胞不僅表達(dá)Ⅱ型膠原和AGGRECAN，而且表達(dá)少量Ⅰ型膠原。2在1％血清條件下，TGFΒ1具有促增殖作用。在10％血清條件下，TGFΒ1和IGF1均能提高細(xì)胞的增殖活性，并且在各自一定的濃度范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。二者聯(lián)合應(yīng)用作用效果更顯著。10UGL、100UGLTGFΒ1組和100UGLIGF1在促進(jìn)AGGRECAN和Ⅱ型膠原基因表達(dá)方面也作用顯著，其中，10UGL組TGFΒ1作用最明顯。3細(xì)胞種植于PLGA框架后，行MTT攝取實(shí)驗(yàn)提示細(xì)胞框架復(fù)合體呈深藍(lán)著色，縱行剖開，可見藍(lán)色晶體均勻分布于整個(gè)材料支架內(nèi)部。激光共聚焦熒光顯微鏡觀察可見大量紅色熒光著色的細(xì)胞貼附于支架結(jié)構(gòu)內(nèi)，掃描電鏡可見大量細(xì)胞貼附于支架內(nèi)，并可見少量細(xì)胞外基質(zhì)分泌。結(jié)論1本研究提示成人正常髓核細(xì)胞傳代后前3代細(xì)胞形態(tài)良好，增殖能力強(qiáng)，AGGRECAN和Ⅱ型膠原MRNA表達(dá)良好，適合作為組織工程椎間盤的種子細(xì)胞，而退變髓核細(xì)胞由于細(xì)胞活性較低，表型表達(dá)發(fā)生改變，不宜作為種子細(xì)胞。2TGFΒ1和IGF1對人正常髓核細(xì)胞具有維持形態(tài)、促進(jìn)增殖和正常表型表達(dá)的作用，其中10UGLTGFΒ1和100UGLIGF1作用最顯著。3以人正常髓核細(xì)胞作為種子細(xì)胞，以PLGA作為三維框架，二者復(fù)合后細(xì)胞能夠在支架材料內(nèi)貼附、生長，為進(jìn)一步體內(nèi)修復(fù)研究奠定良好的基礎(chǔ)。