簡(jiǎn)介：南華大學(xué)碩士學(xué)位論文人胃癌細(xì)胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究姓名周志姣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師朱建思200705014人胃癌細(xì)胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究人胃癌細(xì)胞高侵襲亞系的篩選及其生物學(xué)特性的研究碩士研究生周志姣導(dǎo)師朱建思教授中文摘要目的目的采用TRANSWELL小室篩選胃癌細(xì)胞高侵襲亞系并研究其生物學(xué)特性。旨在進(jìn)一步探討胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制。方法方法利用TRANSWELL小室篩選高侵襲力胃癌細(xì)胞亞系。并通過HE染色觀察母亞兩系細(xì)胞形態(tài)；WESTERNBLOT檢測(cè)兩系細(xì)胞ECADHERIN和TIMP1蛋白變化并對(duì)各條帶進(jìn)行灰度分析；TRANSWELL檢測(cè)細(xì)胞遷移能力變化；用免疫組化SABC法觀察母亞兩系細(xì)胞NM23H1蛋白表達(dá)情況并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行定性、定位及圖象分析；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期以及繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。結(jié)果結(jié)果利用TRANSWELL小室反復(fù)篩選十次，從MKN28細(xì)胞中篩選出高侵襲力胃癌細(xì)胞亞系MKN28S10。母亞兩系細(xì)胞形態(tài)上無明顯差異，細(xì)胞均呈多邊形，大小不均，核漿比大，核圓形、橢圓形；但亞系中ECADHERIN、TIMP1蛋白表達(dá)同母系相比顯著降低MKN28S10中E–CADHERIN蛋白表達(dá)的相對(duì)灰度值為042003，較MKN28細(xì)胞（相對(duì)灰度值為090004）明顯降低（P＜005）而MKN28S10的TIMP1蛋白表達(dá)的相對(duì)灰度值（052006）較MKN28的TIMP1蛋白表達(dá)089005）明顯降低（P＜005）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示亞系中NM23H1的表達(dá)明顯低于母系P005亞系NM23H1的平均光密度（71811881）較母系（127121568）明顯降低（P005）；顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)示亞系遷移至膜背面的數(shù)量10025050視野較母系6175206視野明顯增多P005，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng)；細(xì)胞周期檢測(cè)表明MKN28S10細(xì)胞S期細(xì)胞比例為667，高于MKN28細(xì)胞在此期的DNA相對(duì)含量。而且，亞系細(xì)胞增殖指數(shù)PI（746）明顯高于母系（648）；亞系體外生長(zhǎng)速度快于母系。

簡(jiǎn)介：論文題EI￡BL二呈基圈皇厶前到腿疸L叢Q壘￡細(xì)胞生物堂紅盤相差眭砑窒答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員王忠論文答辯日期2Q壘生5月28目溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1

簡(jiǎn)介：類號(hào)分級(jí)密國(guó)際進(jìn)類號(hào)十分（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文伊班膦酸鈉對(duì)口腔內(nèi)有成骨潛能細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及MICRNA相關(guān)機(jī)制初探題題（名和副名）周強(qiáng)（作者姓名）導(dǎo)教師指姓名陳永進(jìn)教授導(dǎo)教師單指位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院請(qǐng)學(xué)級(jí)別申位博士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學(xué)論文提交日期201104答辯日期201105論時(shí)間文起止2008年9月至2011年4月學(xué)單位授予位第四軍醫(yī)大學(xué)伊班膦酸鈉對(duì)口腔內(nèi)有成骨潛能細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及MICRNA相關(guān)機(jī)制初探研究生周強(qiáng)學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院導(dǎo)師陳永進(jìn)教授關(guān)鍵詞伊班膦酸鈉牙周膜干細(xì)胞增殖成骨分化中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年4月

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文論文題目生長(zhǎng)抑制特異蛋白GAS2在慢性粒細(xì)胞白血病中異常高表達(dá)的生物學(xué)意義研究研究生姓名周海俠指導(dǎo)教師姓名吳德沛教授專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（血液?。┭芯糠较虬籽》肿又虏C(jī)制論文提交日期2014年3月

簡(jiǎn)介：目的觀察羅格列酮對(duì)體外培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖、凋亡、細(xì)胞周期及超微結(jié)構(gòu)的影響；觀察羅格列酮對(duì)普通培養(yǎng)的HSC和經(jīng)肝癌條件培養(yǎng)基作用后的HSC表達(dá)ASMA、PDGFB的影響，初步探討羅格列酮影響HSC生物學(xué)特性的作用機(jī)制。方法⑴MTT檢測(cè)不同濃度羅格列酮（0、10、125、15、175、20ΜMOLL）無血清培養(yǎng)基對(duì)HSC增殖的影響。⑵流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)不同濃度羅格列酮（0、10、125、15、175、20ΜMOLL）無血清培養(yǎng)基對(duì)HSC細(xì)胞周期和凋亡率的影響。⑶電鏡（TEM）觀察15ΜMOLL的羅格列酮無血清培養(yǎng)基對(duì)HSC超微結(jié)構(gòu)的影響。⑷免疫組化（IHC）半定量檢測(cè)1）不同濃度羅格列酮（濃度組別與前者相同）無血清培養(yǎng)基對(duì)HSC表達(dá)ASMA、PDGFB的影響；2）HSC經(jīng)24H肝癌細(xì)胞（HCC）條件培養(yǎng)基（按1∶1、1∶2的比例稀釋）處理，再用15ΜMOLL羅格列酮作用于HSC（另設(shè)空白對(duì)照組、單純羅格列酮組和單純24H肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基組），觀察HSC的ASMA、PDGFB表達(dá)變化。上述免疫組化結(jié)果用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)進(jìn)行半定量分析。結(jié)果①M(fèi)TT結(jié)果顯示羅格列酮對(duì)HSC的增殖具有抑制作用，抑制率隨著羅格列酮濃度的增加而增加，兩者呈量效依賴關(guān)系。②FCM結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度羅格列酮作用后，HSC的凋亡率、G0G1期細(xì)胞比例均隨著濃度的增加而增加，各濃度組凋亡率的增加均具有非常顯著意義（P＜001），羅格列酮濃度高于15ΜMOLL時(shí)，G0G1期細(xì)胞比例增加具有顯著意義（P＜005）。③透射電鏡觀察，經(jīng)羅格列酮作用后，HSC的生長(zhǎng)狀態(tài)受到抑制，部分細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡相關(guān)的超微結(jié)構(gòu)改變，如細(xì)胞體積變小，表面絨毛結(jié)構(gòu)減少或消失，核染色質(zhì)凝集并邊集，核固縮，并可見凋亡小體。④免疫組化結(jié)果顯示羅格列酮作用于HSC后，其ASMA、PDGFB的表達(dá)水平隨羅格列酮濃度的增加而減少，且兩者的表達(dá)具有緊密相關(guān)性（R0971）；羅格列酮作用于經(jīng)肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理后的HSC，其ASMA、PDGFB的表達(dá)與空白對(duì)照組和單純肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理組相比，均有顯著下降（P＜005）。結(jié)論羅格列酮能抑制HSC的增殖、活化。其作用機(jī)制可能與阻滯HSC于G0G1期、誘導(dǎo)HSC凋亡及降低HSC的PDGF表達(dá)有關(guān)。同時(shí)羅格列酮也可抑制癌性條件下的HSC活化和PDGF表達(dá)。

簡(jiǎn)介：背景介紹與研究目的炎癥反應(yīng)在機(jī)體內(nèi)的部分心血管疾病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮著重要作用，包括T細(xì)胞，B細(xì)胞及大多數(shù)巨噬細(xì)胞在內(nèi)的白細(xì)胞均可遷移到病變部位并聚集。通常評(píng)價(jià)這些疾病的炎癥反應(yīng)需要組織學(xué)檢查，但這種檢查只能觀察到病變部位炎癥存在的靜止情況，不能動(dòng)態(tài)的觀察炎癥細(xì)胞遷移到病變部位的過程，而且具有創(chuàng)傷性。如果能實(shí)時(shí)并非創(chuàng)性觀察這些疾病的炎癥反應(yīng)，則對(duì)疾病的治療及預(yù)后有重要意義。近年來分子影像的迅速發(fā)展使其成為可能。通過超順磁性氧化鐵SPIO對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，從而示蹤其在體內(nèi)的遷移及分布，能夠動(dòng)態(tài)非創(chuàng)性的評(píng)價(jià)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。當(dāng)SPIO通過靜脈注入體內(nèi)后，隨血液在人體內(nèi)循環(huán)。在體內(nèi)SPIO主要通過肝臟的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和血液中的吞噬細(xì)胞攝取清除，當(dāng)SPIO被血液中的吞噬細(xì)胞攝取后，并不能再?gòu)募?xì)胞內(nèi)排出，這樣便對(duì)吞噬細(xì)胞進(jìn)行了標(biāo)記，而標(biāo)記的吞噬細(xì)胞可以游走到炎癥所在部位并聚集，在磁共振掃描時(shí)，會(huì)造成炎癥所在部位的T2弛豫時(shí)間縮短，從而在磁共振圖像上顯示為信號(hào)降低。一般來講，SPIO主要是由內(nèi)核及包被材料兩部分構(gòu)成，納米顆粒內(nèi)徑從十幾納米到幾百納米。內(nèi)核由FE3O4和或ΓFE2O3構(gòu)成，包被材料的種類很多，包被材料的存在提高了SPIO的穩(wěn)定性及生物相容性，而且有包被材料的存在，還可以便于對(duì)SPIO進(jìn)行進(jìn)一步的修飾，從而能夠使SPIO具有靶向性或特異性。到目前為止，已有很多學(xué)者利用SPIO來標(biāo)記被活化的或沒有被活化的巨噬細(xì)胞，并對(duì)體內(nèi)炎癥反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。這些研究都充分說明利用SPIO標(biāo)記巨噬細(xì)胞對(duì)體內(nèi)炎癥反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)具有很大優(yōu)勢(shì)。雖然如此，由于SPIO包被材料和內(nèi)徑存在很大差異性，在這些研究中所利用的SPIO的包被材料及內(nèi)徑大小均不相同，所以得到的結(jié)果可比性較差。如果能定義一種最佳的SPIO用來標(biāo)記巨噬細(xì)胞，不僅標(biāo)記效率高，而且生物相容性高，則對(duì)進(jìn)一步的研究有重要意義。但這方面的研究還很少。在本研究中，我們?cè)隗w外比較了檸檬酸和葡聚糖包被的SPIO對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的標(biāo)記效率的不同，并對(duì)標(biāo)記后細(xì)胞功能的變化及磁共振成像效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。從而嘗試了解哪種SPIO更適于標(biāo)記巨噬細(xì)胞，為進(jìn)一步的生物應(yīng)用提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。材料和方法按照共沉淀法合成檸檬酸及葡聚糖包被的SPIO。分離6周齡左右的雌性ICR小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。在巨噬細(xì)胞與濃度為025MGMLSPIO共同孵育1小時(shí)后，通過普魯士藍(lán)染色對(duì)兩種材料包被的SPIO標(biāo)記巨噬細(xì)胞的效率進(jìn)行觀察。濃度分別為01、025、05、075、10MGML的SPIO對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記后，采用CALCEINAM法對(duì)不同濃度的SPIO標(biāo)記后的巨噬細(xì)胞活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。巨噬細(xì)胞與濃度為05MGML的SPIO共同孵育1小時(shí)后，通過細(xì)胞劃痕試驗(yàn)對(duì)細(xì)胞的遷移能力的變化進(jìn)行觀察，用IMAGEJ進(jìn)行像素分析來評(píng)價(jià)細(xì)胞遷移能力的變化。巨噬細(xì)胞與濃度為05MGML的SPIO共同孵育1小時(shí)后，通過酶聯(lián)標(biāo)記法測(cè)定標(biāo)記細(xì)胞促炎癥因子IL6的24小時(shí)分泌量。01、025、05、075、10MGML四種濃度的SPIO與巨噬細(xì)胞共同孵育1小時(shí)后，用05％瓊脂凝膠固定于96孔板，在PHILIPS30T磁共振全身掃描儀上進(jìn)行掃描，對(duì)不同孵育濃度時(shí)弛豫時(shí)間的變化進(jìn)行評(píng)價(jià)。SPIO孵育濃度對(duì)細(xì)胞弛豫時(shí)間及細(xì)胞活性的影響用雙向方差分析，然后進(jìn)行多重比較分析。SPIO對(duì)細(xì)胞遷移能力及促炎癥因子的分泌量的影響通過STUDENTT檢驗(yàn)進(jìn)行。結(jié)果利用經(jīng)典共沉淀法合成的SPIO為棕黑色膠狀液體，檸檬酸包被的SPIO水合內(nèi)徑約100NM，檸檬酸包被的SPIO水合內(nèi)徑約150NM，納米粒度分布較好4℃保存SPIO穩(wěn)定性好。普魯士藍(lán)染色結(jié)果顯示未與SPIO共同孵育的巨噬細(xì)胞被染成均質(zhì)紅色，而與SPIO共同孵育1小時(shí)后的巨噬細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒，檸檬酸包被的SPIO明顯比葡聚糖包被的SPIO更易進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)，即標(biāo)記效率高。細(xì)胞的活性測(cè)定結(jié)果顯示細(xì)胞活性隨SPIO孵育濃度的增加而降低，當(dāng)SPIO孵育濃度為025MGML起，兩種材料包被的SPIO對(duì)細(xì)胞均存在毒性作用。另外通過比較同種孵育濃度兩種包被材料的SPIO細(xì)胞活性，發(fā)現(xiàn)兩種包被材料的SPIO在相同的濃度時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞遷移能力測(cè)定結(jié)果顯示兩種包被材料的SPIO標(biāo)記的細(xì)胞的遷移能力無明顯變化，這便說明SPIO不會(huì)影響細(xì)胞的遷移能力。促炎癥因子分泌量測(cè)定結(jié)果顯示檸檬酸包被的SPIO標(biāo)記的巨噬細(xì)胞促炎癥因子的分泌量增大而葡聚糖包被的SPIO標(biāo)記的細(xì)胞則無增大。在磁共振掃描的結(jié)果中顯示檸檬酸包被的SPIO標(biāo)記的巨噬細(xì)胞可以明顯引起T2弛豫時(shí)間的降低，而葡聚糖包被的SPIO在最高孵育濃度時(shí)才會(huì)引起T2弛豫時(shí)間的降低。結(jié)論體外試驗(yàn)證實(shí)，檸檬酸包被的SPIO更適于標(biāo)記巨噬細(xì)胞。檸檬酸包被的SPIO相對(duì)于葡聚糖包被的SPIO具有更高的巨噬細(xì)胞標(biāo)記效率，更易引起磁共振信號(hào)的變化在對(duì)細(xì)胞功能影響方面，檸檬酸包被的SPIO標(biāo)記的巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性及細(xì)胞遷移能力的變化與葡聚糖包被的SPIO標(biāo)記的巨噬細(xì)胞相同但促炎癥因子分泌量會(huì)增大。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IL8基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)OVCAR3細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制的研究姓名趙娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師程建新李萬勝20080301河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名磊嘲導(dǎo)師簽名榴學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名誘幸弓月形日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)。F進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生躲參晴導(dǎo)師躲徽D8年弓。月彩日

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文綠膿桿菌制劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究姓名劉哲斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師邵志敏20100408綠膿桿菌制劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究復(fù)旦大學(xué)博士論文同作用于乳腺癌細(xì)胞，作為競(jìng)爭(zhēng)性作用試劑，來檢測(cè)其對(duì)PAMSHA作用效應(yīng)的影響。主要采用WST法、ANNEXINVFITC和PI染色流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法、HOECHST33258染色、掃描電鏡、WESTERNBLOT等方法檢測(cè)甘露糖共培育對(duì)PAMSHA引起的抗增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯等的影響。2、通過WESTERNBLOT檢測(cè)PAMSHA作用于乳腺癌細(xì)胞后EGFR通路下游主要分子總EGFR、磷酸化EGFR、總AKT、磷酸化AKT、總ERK和磷酸化ERK的表達(dá)水平。3、設(shè)計(jì)并合成針對(duì)人EGFR基因的RNA干擾片段，將SIRNA片段瞬轉(zhuǎn)入乳腺癌細(xì)胞中，WESTERNBLOT法驗(yàn)證片段下調(diào)EGFR表達(dá)的有效性。主要觀察EGFR下調(diào)后PAMSHA對(duì)EGFR下游通路蛋白表達(dá)水平以及細(xì)胞增殖水平的影響，以驗(yàn)證EGFR是否為PAMSHA作用靶點(diǎn)。4、通過WESTERNBLOT以及ELISA方法檢測(cè)PAMSHA作用于乳腺癌細(xì)胞后侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響。5、裸鼠乳房脂肪墊MAMMARYFATPAD，MFP接種人乳腺癌細(xì)胞，探討PAMSHA對(duì)裸鼠原位腫瘤生長(zhǎng)及肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果第一部分1、乳腺癌細(xì)胞株MDAMB21HM以及MDAMB468細(xì)胞體外培養(yǎng)，PAMSHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞有直接殺傷作用，且有劑量依賴性以及時(shí)間依賴性，而對(duì)MCF7細(xì)胞以及正常乳腺上皮MCF10A相對(duì)耐藥。而PA對(duì)乳腺癌細(xì)胞沒有明顯的殺傷作用。2、PAMSHA在體外能引起GOGL期的細(xì)胞比例增高，而S期細(xì)胞比例顯著降低。3、PAMSHA作用后能使乳腺癌細(xì)胞呈現(xiàn)出大量的圓形漂浮凋亡細(xì)胞形態(tài)，產(chǎn)生大量的吞噬體以及自噬體樣空泡，體現(xiàn)為凋亡表現(xiàn)形態(tài)；細(xì)胞胞核呈現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)特征。4、PAMSHA作用于乳腺癌細(xì)胞后凋亡細(xì)胞的比率顯著升高。5、PAMSHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞有殺傷作用以凋亡為主，并依賴于CASPASE通路，

簡(jiǎn)介：白癜風(fēng)是一種色素脫失性皮膚病以表皮、粘膜和毛發(fā)的黑素細(xì)胞脫失形成的白斑、灰白發(fā)為主要癥狀其發(fā)病機(jī)制存在自身免疫學(xué)、氧化應(yīng)激學(xué)、神經(jīng)學(xué)以及遺傳學(xué)等多種假說。近年來國(guó)內(nèi)外大量研究表明白癜風(fēng)的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān)可能是一種多基因遺傳病。據(jù)報(bào)道INNVIT基因是與白癜風(fēng)患者的黑素細(xì)胞表達(dá)下調(diào)相關(guān)的新基因。通過序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)INNVIT基因?yàn)槿鄙?1BP內(nèi)含子的FBXO11基因。為了探討INNVIT基因在黑素細(xì)胞中的生物學(xué)功能明確INNVIT基因在白癜風(fēng)中的作用本論文構(gòu)建了沉默INNVIT基因的SIRNA及INNVIT基因過表達(dá)載體P3XFP120研究INNVIT基因的抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)活性及酪氨酸酶輸出的影響。論文通過設(shè)計(jì)構(gòu)建了人工合成的特異性SIRNA同時(shí)構(gòu)建了該基因的過表達(dá)質(zhì)粒同時(shí)分別轉(zhuǎn)染黑素細(xì)胞從而研究INNVIT基因抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)功能及黑素細(xì)胞酪氨酸酶表達(dá)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出的的影響。首先檢測(cè)了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達(dá)SIRNA的抑制作用顯著降低了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達(dá)量P3XFP120質(zhì)粒的過表達(dá)顯著增加了INNVIT基因MRNA和蛋白的表達(dá)量。其次INNVIT基因抑制和過表達(dá)對(duì)黑素細(xì)胞增殖、凋亡及遷移相關(guān)生物學(xué)功能的影響。采用SIRNA抑制和質(zhì)粒載體過表達(dá)后INNVIT基因的過表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞增殖抑制細(xì)胞凋亡INNVIT基因的抑制使黑素細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)從G0G1期到S期的細(xì)胞周期停滯現(xiàn)象極大地降低了細(xì)胞增殖和存活的能力同時(shí)顯著增加黑素細(xì)胞的早期凋亡水平。細(xì)胞遷移能力及酶活性檢測(cè)表明SIRNA抑制和過表達(dá)INNVIT基因?qū)?xì)胞遷移力及2金屬蛋白酶MMP9和MMP的表達(dá)沒有影響。推測(cè)INNVIT基因的抑制主要通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯而降低黑素細(xì)胞的存活和增殖能力。最后研究了INNVIT基因?qū)谒丶?xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹與酪氨酸酶的相關(guān)性。掃描電鏡觀察表明SIRNA抑制的黑素細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有明顯的膨脹擴(kuò)大現(xiàn)象其酪氨酸酶蛋白表達(dá)存在極顯著的增加。細(xì)胞免疫熒光共定位了酪氨酸酶和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記鈣網(wǎng)蛋白發(fā)現(xiàn)抑制組細(xì)胞的酪氨酸酶大部分停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中表明其酪氨酸酶的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出發(fā)生阻滯可見抑制INNVIT基因表達(dá)影響了黑素細(xì)胞的酪氨酸酶從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹從而導(dǎo)致細(xì)胞生物學(xué)活性異常。以上研究表明本研究為INNVIT基因影響黑素細(xì)胞的增殖和凋亡能力提供了有力的證據(jù)并揭示了白癜風(fēng)黑素細(xì)胞酪氨酸酶的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能性輸出障礙的可能機(jī)制。

簡(jiǎn)介：廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范試行?！硗?，該學(xué)位論文為課題組的研究成果，獲得課題組經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在實(shí)驗(yàn)室完成。請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。VNA簽孫剖略／JT游S只叫ET廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明MITILLLLLLIILLIJIIIIIIITL吣Y2074214本人同意廈門大學(xué)根據(jù)中華人民共和國(guó)學(xué)位條例暫行實(shí)施辦法等規(guī)定保留和使用此學(xué)位論文，并向主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文包括紙質(zhì)版和電子版，允許學(xué)位論文進(jìn)入廈門大學(xué)圖書館及其數(shù)據(jù)庫被查閱、借閱。本人同意廈門大學(xué)將學(xué)位論文加入全國(guó)博士、碩士學(xué)位論文共建單位數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版，采用影印、縮印或者其它方式合理復(fù)制學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于。1經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審查核定的保密學(xué)位論文，于年月日解密，解密后適用上述授權(quán)。2不保密，適用上述授權(quán)。請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)括號(hào)內(nèi)打段√”或填上相應(yīng)內(nèi)容。保密學(xué)位論文應(yīng)是已經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定過的學(xué)位論文，未經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定的學(xué)位論文均為公開學(xué)位論文。此聲明欄不填寫的，默認(rèn)為公開學(xué)位論文，均適用上述授權(quán)。聲明人簽名杏＼褂移矽L硨5月卅日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7352密級(jí)公開HEDGEHOGGLIL信號(hào)通路在胃癌干樣細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用及機(jī)制研究THFUNCTIONANDMECHANISMOFEUNCTIONANECANIL。NHEDGEHOGGLILSIGNALINGPATHWAYINBIOLOGICALBEHAVIOROFSTEMCELLLIKEGASTRICCANCERCELLS赫￡凌腑答辯委員會(huì)主席易孫7％論文答辯日期二V一五年五月彩日解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文目錄英文縮略詞匯對(duì)照7中文摘要9ABSTRACT11前言。15日U舌第一部分胃癌干細(xì)胞的分離和鑒定21一引言2～1號(hào)I舌二材料與方法22三結(jié)果24四討論27第二部分SHRNA下調(diào)胃癌干樣細(xì)胞GLIL基因表達(dá)對(duì)其克隆形成、細(xì)胞增殖、遷徙能力、化療耐受性的影響32一引言32號(hào)I舌TJ2二材料與方法33三結(jié)果42四討論50第三部分ZNRF3對(duì)HEDGEHOGGLIL信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用55一引言55二材料與方法55三結(jié)果62四討論65結(jié)論68文獻(xiàn)綜述69攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況81致謝83

簡(jiǎn)介：背景和目的慢性疼痛的治療是目前人類尚未解決的難題之一，嚴(yán)重地影響了人類的生活質(zhì)量，由于目前臨床使用的鎮(zhèn)痛藥物存在的缺陷，療效不能令人滿意。生物鎮(zhèn)痛由于其模擬人體生理分泌的獨(dú)有的特點(diǎn)，具有明顯的優(yōu)勢(shì)，是未來疼痛治療的新方向，而轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛（TRANSPLANTATIONOFTRANSGENEICCELLSFANALGESIA）則是其中的最具有的發(fā)展?jié)摿Φ姆较?。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCS）來源豐富，組織相容性好，免疫原性低，具有多向分化潛能，是較為理想的移植細(xì)胞。內(nèi)源性阿片肽腦啡肽，廣泛分布于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)CENTRALNERVOUSSYSTEMCNS，是一種重要的鎮(zhèn)痛介質(zhì)。本研究擬利用RTPCR法構(gòu)建人前腦啡肽基因（PROENKEPHALINPENK）的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，建立能表達(dá)前腦啡肽基因及分泌腦啡肽蛋白的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定，為疼痛的基因治療的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。材料和方法1攜帶人前腦啡肽基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建從人腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤組織中提取總RNA，RTPCR法擴(kuò)增出前腦啡肽基因全長(zhǎng)CDNA，經(jīng)測(cè)序正確后，核酸內(nèi)切酶ECI、SALI酶切PCR產(chǎn)物，定向克隆入PBABEPURO載體，重組質(zhì)粒PBABEPENK經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定。2人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究采用直接貼壁法從人骨髓標(biāo)本中分離HMSCS。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒PBABEPENK轉(zhuǎn)染包裝病毒細(xì)胞株P(guān)HOENIX293T細(xì)胞，收集病毒上清，將其感染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過嘌呤霉素篩選得穩(wěn)定表達(dá)PENK的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞系。選用連續(xù)傳代培養(yǎng)人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系的和未轉(zhuǎn)化的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察傳代、凍存和復(fù)蘇對(duì)細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)的影響；比較兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和繪制生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染兩組細(xì)胞的表面標(biāo)志CD44，CD29，CD34，CD45的表達(dá)。將轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞分別行成脂誘導(dǎo)及成骨誘導(dǎo)，誘導(dǎo)后脂肪細(xì)胞油紅染色，成骨細(xì)胞茜素紅染色觀察。分別用RTPCR方法檢測(cè)PENK基因的表達(dá)、免疫熒光法及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA法測(cè)定亮氨酸腦啡肽LEUENKEPHALINLEK）的表達(dá)。3統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（SDX±或均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（XSX±表示。定量資料經(jīng)正態(tài)和方差齊性檢驗(yàn)后，組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析及雙因素析因分析，組間兩兩比較采用LSD方法分析，以P結(jié)果1重組質(zhì)粒PBABEPENK經(jīng)ECI、SALI酶切及測(cè)序鑒定正確，重組質(zhì)粒包含人PENK基因完整編碼區(qū)。2轉(zhuǎn)染后細(xì)胞系可在體外連續(xù)傳代至20代以上；傳代、凍存和復(fù)蘇對(duì)細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)無影響（P0386）。與第4代HMSCS相比，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況沒有明顯差異（P0873）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞表明標(biāo)志沒有明顯差異CD29（P0136）、CD44（P0352）表達(dá)均（），而CD34（P0466）、CD45（P0474）表達(dá)均（）；轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞均可在體外培養(yǎng)條件上誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞及成骨細(xì)胞，與第4代HMSCS相比，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞成脂分化能力沒有明顯差異（P0944）。RTPCR及免疫熒光法證實(shí)HMSCPENK中PENK基因表達(dá)水平升高且細(xì)胞內(nèi)LEK含量升高，ELISA法檢測(cè)到細(xì)胞培養(yǎng)液上清中LEK表達(dá)量增高（P結(jié)論1成功構(gòu)建了含人前腦啡肽原基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。2成功構(gòu)建了人前腦啡肽原基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系，可在體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)并維持分裂增殖能力，保留了原始人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特征性的分化表型及多向分化能力，該細(xì)胞系可在體外穩(wěn)定表達(dá)和分泌腦啡肽，可將其作為轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛的種子細(xì)胞做更進(jìn)一步的研究。

簡(jiǎn)介：答辯委員會(huì)主席工查明塾援答辯委員會(huì)成員由圭筮數(shù)援奎焦麴援醫(yī)瞳明數(shù)援溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中英文縮略詞表縮略語英文全稱中文全稱ACRBISAGA～心KANOVAAPLBACTINBCABCL2C越P雒EDMSODNAEDTAERFBSGLOHER2幾JNKM魄PKMGN咖S～ⅡTODPBSPKCPMSFPRROSSDSDSPAGETBSTACRYLAMIDEBISACRYLAMIDE丙烯酰胺AMINOGUANIDINE氨基胍AMPACTIVATEDPROTEINKIN笛EAMP依賴性蛋白激酶ANALYSISOFVARIANCE方差分析AMMONIUMPERSULFATE過硫酸銨PACTIN肌動(dòng)蛋白BICINCHONININCACID聚氰基丙烯酸正丁酯BCELLLYMPHOMA／LEUKEMIA2B細(xì)胞淋巴瘤／白血病2CASP越E半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶DIMETHYLSULPHOXIDE二甲基亞砜DEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸ETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸ESTROGENRECEPTOR雌激素受體FETALBOVINESELTLM胎牛血清GLYOXALASE乙二醛酶HUMANEPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR2人表皮生長(zhǎng)因子受體INTERLEUKIN白介素CJUNNTERMINALKINASE氨基末端激酶MITOGENACTIVATEDPROTEINKIN硒E絲裂原活化蛋白激酶METHYLGLYOXAL丙酮醛MATRIXMETALLOPROTEINASES基質(zhì)金屬蛋白酶MTHYLTHIAZOLYLDIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDE噻唑藍(lán)OPTICALDENSITY吸光度PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PROTEINKINASEC蛋白激酶CPHEYLMETHYLSULOLHYLFLUORIDE苯甲基磺酞胺PROGESTERONERECEPTOR孕激素受體REACTIVEOXYGENSPECIES活性氧STANDARDDEVIATION標(biāo)準(zhǔn)差SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAMIDEGEL十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰ELECTROPHORESIS胺凝膠電泳TRISBUFFEREDSALINEANDTWEEN三羥甲基氨基甲烷鹽緩沖液1

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)B2012003040肝細(xì)胞癌的早期臨床結(jié)局和遠(yuǎn)期預(yù)后相關(guān)分子生物學(xué)因素研究RESEARCHOFEARLYCLINICALOUTCOMEANDLONGTERMPROGNOSTICMOLECULARFACTORINHEPATOCEL1ULARCARCINOMA所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院劉發(fā)強(qiáng)吳健雄教授林東昕教授、譚文教授腫瘤學(xué)肝臟腫瘤的外科治療二零一五年五月一令一血，牛血月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士研究生學(xué)位論文圖索弓圖索引圖1研究技術(shù)路線圖14圖2健康狀況轉(zhuǎn)歸示意圖18圖3決策模型結(jié)構(gòu)示意圖19圖4決策模型分析路線圖21圖5術(shù)后指標(biāo)變化2328圖6住院天數(shù)和住院費(fèi)用2829圖7決策模型30圖8決策模型的回乘分析結(jié)果31圖9CEA曲線32圖10單因素敏感性分析的參數(shù)錄入33圖11單因素敏感性分析的TORNADO圖形分析結(jié)果35圖12EENPN組的術(shù)后有并發(fā)癥單因素敏感性分析的最大支付意愿36圖13按WHO的WTP繪制的成本一效果可接受曲線37圖14按本研究確定的WTP繪制的成本一效果可接受曲線38圖15按本研究與WHO的WTP之間的成本一效果可接受曲線39圖16EN保護(hù)肝臟、改善肝功能的作用機(jī)理41圖17EN縮短住院天數(shù)和降低住院費(fèi)用效應(yīng)42圖18RNA的分類56圖19MIRNA的生物合成過程與功能57圖20研究流程圖60圖21MIRNA相關(guān)SNP的文獻(xiàn)分析61圖22SEQUENOMSNP位點(diǎn)分型檢測(cè)法具體技術(shù)路線圖65圖23KAPLANMEIER生存曲線7072圖24KAPLANMEIER生存曲線SNP74圖25成熟MIRNAL95序列圖77圖26HASMIR195相關(guān)SNP位點(diǎn)圖78

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)B2009394W丁7基因表達(dá)改變對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)特征的影響及相關(guān)機(jī)制研究所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所李艷秘營(yíng)昌教授王建祥王敏饒青教授內(nèi)科血液學(xué)白血病臨床與基礎(chǔ)2011年5月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部博士學(xué)位論文中文摘要研究目的觀察WTL基因及蛋白在白血病細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位情況，研究WTL蛋白抑制劑一姜黃素，對(duì)白血病細(xì)胞尤其是慢粒急變細(xì)胞系一K562增殖能力的影響，并探討相關(guān)機(jī)制。采用RNA干擾技術(shù)，以WTL特異性SM礬A下調(diào)WTL的表達(dá)，觀察細(xì)胞的增殖能力、自我更新能力、細(xì)胞周期、凋亡及分化等生物學(xué)效應(yīng)，進(jìn)一步探究WTL與白血病細(xì)胞生物學(xué)特征改變相關(guān)的機(jī)制。研究方法采用REALTIMEPCR和W色ST咖BLOT方法觀察WTLMI礬A及蛋白在不同白血病細(xì)胞系中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位，同時(shí)采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察WTL的亞細(xì)胞定位。CLUDMATINIILLMUNOPRECIPITA【TIONDNASELECTIONANDLIGATIONCHIPDSL方法用于尋找WTL可能的轉(zhuǎn)錄調(diào)控靶基因。MTT方法觀察細(xì)胞的增殖并繪制增殖曲線、觀察姜黃素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及與格列衛(wèi)、依托泊甙VP16的協(xié)同作用，計(jì)算增殖抑制率。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡及分化等相關(guān)指標(biāo)。設(shè)計(jì)WTL特異的短發(fā)夾RNA即WTLSILRNA片段，構(gòu)建PLKO1PURO載體，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝慢病毒，感染K562細(xì)胞，進(jìn)而檢測(cè)WTL基因下調(diào)后細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的改變，同時(shí)分析WTL可能的靶基因一W州BCATELLIN信號(hào)通路相關(guān)基因的變化。結(jié)果WTL基因在多種白血病細(xì)胞系中表達(dá)Ⅳ937細(xì)胞除外，尤其以K562細(xì)胞高表達(dá)；WESTEMBLOT及細(xì)胞免疫熒光均提示W(wǎng)TL蛋白在細(xì)胞核及胞漿中均有分布，以胞漿中為主。因K562細(xì)胞高表達(dá)WTL，且為慢粒急變細(xì)胞系，對(duì)多種常規(guī)化療藥物不敏感，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究集中在K562細(xì)胞進(jìn)行1、采用WTL蛋白抑制劑一姜黃素處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其明顯抑制細(xì)胞的增殖，呈劑量、時(shí)間依賴性，其IC50值在24、48及72小時(shí)分別為2815PM、3379“M及3812PM。姜黃素聯(lián)合慢粒治療的靶向藥物一酪氨酸激酶抑制劑格列衛(wèi)，二者具有協(xié)同抗白血病細(xì)胞增殖的作用。檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原發(fā)現(xiàn)，姜黃素處理后CDL3表達(dá)明顯增加，CDLLB稍有增加，提示姜黃素有促使細(xì)胞向成熟階段分化的潛能；細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，姜黃素使G2／M期細(xì)胞比例較對(duì)照組明顯增高711246VS2850349，而GO／GL期及S期細(xì)胞比例減低。2、設(shè)計(jì)針對(duì)WTL基因的特異SM礬A，下調(diào)K562細(xì)胞中WTL基因的內(nèi)源表達(dá)，發(fā)現(xiàn)WTLSI刪A干擾組細(xì)胞增殖能力減弱、集落形成能力明顯減低，但無明顯細(xì)胞凋亡及分化趨勢(shì)；細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，干擾組G0／GL期細(xì)胞比例明顯增加，而S期比例減低；聯(lián)合藥物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，WTLSHRNA干擾組細(xì)胞對(duì)VP16更敏感，其增殖抑制作用強(qiáng)于對(duì)照組。3、進(jìn)一步探討WTL在白血病發(fā)生中的相關(guān)作用機(jī)制，CLLIPDSL啟動(dòng)子芯片分析結(jié)果顯示，WTL參與多種信號(hào)通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，其中主要包括WNT／3