簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突變體對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的研究姓名劉曉紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師朱明華20050501獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名劉曉紅＼蠕億J簽字日期2005年5月6日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名劉曉紅捌抗九導(dǎo)師簽名簽字日期2005年5月6日簽字日期

簡(jiǎn)介：‘巧81784丘洛立通大學(xué)屢學(xué)院博士學(xué)位論文題目兔頜面部鱗癌細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特。性研究作者姓名全武龍指導(dǎo)教師鄞焦數(shù)撞學(xué)科專業(yè)題畫窆I型學(xué)號(hào)旦衛(wèi)12QQ3Q壹論文提交日期2006315植成瘤率100％；無(wú)支原體污染。研究結(jié)論①NZW04831為一株惡性度高的兔頜面部鱗癌細(xì)胞系，保留了其來(lái)源細(xì)胞的生物學(xué)特性，可作為頜面部鱗癌研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停虎趧?dòng)物模型的病理類型、生物學(xué)行為與人口腔頜面部鱗癌相似，可發(fā)生區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)隔器官肺等轉(zhuǎn)移。關(guān)鍵詞新西蘭白兔，頜面部鱗狀細(xì)胞癌，動(dòng)物模型，細(xì)胞系

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠乳腺腫瘤病理學(xué)觀察與腫瘤細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性研究姓名趙磊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師程國(guó)富唐利軍20070601華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2007屆碩士學(xué)位論文ABSTRACTRATISONEOFTHEMOSTPOPULARLABORATORYANIMALINMEDICALRESEARCH．SPONTANEOUSTUMORSISALLIMPORTANTBIOLOGICALCHARACTERISTICSINRATS．THESTUDYTRIESTOCHARACTERIZETHEEPIDEMIOLOGICANDPATHOLOGICFEATURESOFSPONTANEOUSBREASTTUMORINSPFRATS．THEEPIDEMIOLOGYANDPATHOLOGYOFTHESPONTANEOUSBREASTTUMORMAYBEVALUABLEFORTHEANIMALMODELESTABLISHMENTANDPATHOGENESISOFTUMOR．HTHISSTUDYWEINVESTIGATEDTHETUMOREPIDEMIOLOGY,ANDOBSERVEDTHECLINICALPATHOLOGYINSPFRATS．THECASESWERETOCLASSIFYACCORDINGTOQUALITALIONBYMACROEXAMINATIONANDMICROSCOPICEXAMINATION．THEINCIDENCEOFSPONTANEOUSBREASTTUMORINSPRAGNEDAWLEYRATSISAPPROXIMATELY10．5％．INWHICHTHEINCIDENCEOFBENIGNTUMORISAPPROXIMATELY8．5％．ANDTHATOFMALIGNANTTUMOR2．0％；THEINCIDENCEOFWISTARRATIS2．0％，INWHICHINCIDENCEOFBENIGNTUMORIS1．5％．ANDTHEMALIGNANTTUMOR0．5％．THEINCIDENCEOFBENIGNTUMORISHIGHERTHANTHATOFMALIGNANTTUMORBOTHINSPRAGNEDAWLEYRATSANDWISTARRATS．INWHICHTHEADENOFIBROMAANDADENOMAARETHEMOST．THISRESEARCHENRICHEDTHECLOSEDCOLONYSPFRATSBIOLOGYBACKGROUNDDATA,ANDMAYPROVIDEONEMETHODFORESTABLISHINGANIMALTUMORMODELFORHUMANCORRESPONDINGDISEASE．TUMORDEVELOPMENTISACOMPLEXPROCESSWITHMULTIGENEPARTICIPATION，ANDISCORRELATEDNOTONLYWITHABNORMALACTIVATIONOFONCOGENESANDDEACTIVATIONOFTMNORSUPPRESSINGGENEBUTALSOWITHAPOPTOSIS．WILDTYPEP53GENEHASNEGATIVEREGULATIONTOMULTIPLICATIONANDDIFFERENTIATIONOFCELLS，MUTANTP53GENELOSTSNORMALFUNCTIONANDGAINSONCOGENECHARACTERISTICS．BCL2ISCONTROLGENEOFAPOPTOSISANDITSABNORMALITYMAYINTERRUPTIONAPOPTOSISTHATLEADSTOTUMORIGENESIS．SABCMETHODOFIMMUNOHISTOCHEMISTRYWASUSEDTODETECTPROTEINUMEXPRESSIONOFP53、BCL2INRATSBREASTTUMORSPECIMEN．RESULTSSHOWEDTHATTHEEXPRESSIONRATEOFP53INRATSBENIGNANDMALIGNANTTUMORWERE46．1％12／26AND85．7％6／7RESPECTIVELY．THEPOSITIVERATEOFP53PROTEINUMBECAMEHIGHERWITHTHEINCREASEOFTUMOREANCERIZATIONDEGREE．THEOVEREXPRESSIONOFP53PROTEINUMHINTEDTHETUMOREANCEFIZATIONDEGREEWHICHISSIMILARSENSEHUMANINMALIGNANTTUMOR．THEEXPRESSIONRATEOFBCL一2INBENIGNANDMALIGNANTTUMORWERE26．9％7／26AND57．1％4／7RESPECTIVELY．THEEXPRESSIONRATEOFBCL一2INCREASEDGRADUALLYWITHTHEDEVELOPMENTOFCANCERIZATION．THEMUTATIONRATEWAS81．8％缸11BCL2POSITIVEEXPRESSIONTUMORCASES．ANDWAS40．9％IN22BCL2NEGATIVEEXPRESSIONTULNORCASES．BOTHP53ANDBCL2PROTEINUMSHIGHPOSITIVEEXPRESSIONMAYSUGGESTTHETWOPROTEINSHADSYNERGISTICEFFECTINTHETUMORGENESISANDDEVELOPMENT．ASTRAINOFBREASTTNMORCELLLINEZHL2006WASESTABLISHEDANDBIOLOGICAILYIDENTIFIED．THEZHL2006CEILSGREWFASTINVITROANDTHEPOPULATIONDOUBLINGTIMEWASⅡ

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多去分化脂肪細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HS100A6對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用研究姓名陳英華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師周蘭20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1重組HSL00A6的制備用氯化鈣法將已經(jīng)構(gòu)建的PGSTMOLUC和PGSTMOLUCHS100A6質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主大腸桿菌BL21；用異丙基硫代半乳糖苷IPTG誘導(dǎo)其表達(dá)；冰上超聲裂解細(xì)菌后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B球珠GLUTATHIONESEPHAROSE4BBEADS從細(xì)菌裂解液中分離純化GST和GSTHS100A6，并通過十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS，SDSPAGE和QUANTITYONE軟件鑒定和分析純化效果，WESTERNBLOT法鑒定重組蛋白，BCA方法進(jìn)行蛋白定量，分裝后80℃保存?zhèn)溆谩?用不同濃度的GSTHSL00A6干預(yù)所選的各個(gè)細(xì)胞株，MTT法檢測(cè)HSL00A6對(duì)各細(xì)胞株增殖的影響。3根據(jù)上一部分試驗(yàn)結(jié)果，選取一個(gè)合適的蛋白濃度，用GSTHS100A6干預(yù)各細(xì)胞株，臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)HS100A6對(duì)細(xì)胞增殖作用的時(shí)間依賴性。4WESTERNBLOT、免疫細(xì)胞化學(xué)法及免疫熒光法檢測(cè)檢測(cè)HS100A6干預(yù)后各腫瘤細(xì)胞中13CATENIN的表達(dá)水平及分布變化。5PTOPLUC轉(zhuǎn)染各腫瘤細(xì)胞株后，用GSTHSL00A6處理細(xì)胞，通過熒光素酶活性分析探討HS100A6對(duì)WNT／13CATENIN信號(hào)途徑活性的影響。6用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)用GSTHSL00A6干預(yù)后各腫瘤細(xì)胞中

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多PTEN-MMAC-,1-基因與星形細(xì)胞瘤生物學(xué)特性相關(guān)性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文電化學(xué)對(duì)體外肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的作用及對(duì)肝癌患者免疫功能的影響姓名崔恒武申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)醫(yī)學(xué)影像學(xué)指導(dǎo)教師田建明200251組凋亡率0．05％，而治療組在電量為3C、5C、IOC、20C時(shí)凋亡率分別為0．56％、0，87％、1．09％、1．63％，治療組凋亡率增加不明顯，但兩組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異氏O．05。處于細(xì)胞周期中的各期細(xì)胞比例無(wú)顯著差異。治療后24H檢測(cè)結(jié)果對(duì)照組凋亡率2．91％，而治療組凋亡率明顯增高P0．05，各組分別為12．59％、22．19％、46．16％、56．68％；各期細(xì)胞比例以大電量組20C變化最大，隨電量的增加處于G0一G。期的細(xì)胞比例有逐漸增高趨勢(shì)，大電量20C治療組的G。一G。細(xì)胞比例達(dá)74．03％，而S期細(xì)胞比例有下降趨勢(shì)，20C治療組S期細(xì)胞僅占4．61％?！粢?，／、結(jié)論低毫安電化學(xué)治療在6小時(shí)內(nèi)治療組的凋亡率增加不明顯，但與對(duì)照組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異JDO．05；24小時(shí)后治療組的凋亡率增加明顯。低毫安電化學(xué)治療在6小時(shí)內(nèi)對(duì)細(xì)胞周期的影響不顯著；24小時(shí)后，隨電量的增加處于G。．G，期的細(xì)胞比例有逐漸增高趨勢(shì)，而S期細(xì)胞比例有下降趨勢(shì)。搖下面二∥蝴齜黼法，腓釉，蕊’繃肭挖醐／JU藻勁二高毫安30MA電化學(xué)療法對(duì)體外肝癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及對(duì)細(xì)胞周期的影響．目的探討高毫安30MA電化學(xué)療法對(duì)體外肝癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及對(duì)細(xì)胞周期的影響。備料和方法用電化學(xué)對(duì)培養(yǎng)的體外肝癌細(xì)胞S塒C772L進(jìn)行治療。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)B塑Z2UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RNAI沉默BMI一1基因表達(dá)對(duì)MCF7細(xì)胞生物學(xué)特性及論文題目阿霉素敏感性影響的研究作者姓名武向梅指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱宋方洲教授重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院重慶市渝中區(qū)醫(yī)學(xué)院路1號(hào)400016申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文答辯年月2010年5月2010年5月重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明幽ILL11ILJLI／／LLLI／FRJLLRLJILLY1731319本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名三送J啦日期J墮生幸魚坦學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬重慶醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文AML外周血CIK細(xì)胞體外誘導(dǎo)及其生物學(xué)作用姓名王文紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師繆競(jìng)誠(chéng)楊吉成20040401AML外周血CIK細(xì)胞體外誘導(dǎo)及其生物學(xué)作用英文摘要GENERATIONANDCHARACTERISTICSTUDYOILEYTOKINEINDUCEDKILLERCELLSFROMPERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLSOFPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEAMIAABSTRACTC”O(jiān)LINE。INDUCEDKILLERCIKCELLSCANMEDIATEHIGHLYEFFICIENTNON’MAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXMHC一RESTRICTEDKILLINGOFTUMORCELLTARGETSANDPROLIFERATERAPIDLYINVITROINCONTRASTTOTHELAKCELLSTHATAREACTIVATEDCD3。CD56NKCELLSANDTHETILTHATAREESSENTIALLYCD8CYTOTOXICTCELLS，CIKCELLSAREDISTINCTANDEXPRESSBOTHTHECD3ANDCD56CELLSURFACEMARKERSTHEHI曲LYTICACTIVITYOFCIKCELLSCORRELATESWITHAHIGHEXPANSIONOFCD3ANDCD56DOUBLEPOSITIVECELLSLINNREPORTEDTHEEXPANSIONOFCIKCELLSFROMTHEBONEMARROWSAMPLESOFPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEMIAA加已ANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAALLBUTITISDIFFICULTTOGAINBMSAMPLEENOUGHTOINDUCETHECIKCELLSHEREWEEXPLORETHEPOSSIBILITYOFGENERATIONOFCIKCELLSFROMTHEPERIPHERALBLOODMONONUCLEARPBMCCELLSOFPATIENTSWITHAMLFIRSTWECOMPAREDTHEEFFECTSOFEXOGENOUSIL一1、IL一2ORIL一12USEDFORGENERATIONOFCIKCELLSODPROLIFERATION、CYTOTOXICITYANDANTIGENPRESENTATIONTHENAOPTIMALPROTOCALWASSELECTEDTOAPPLYFORTHEGENERATIONOFCIKCEILSFROMPBMCOFPATIENTSTT

簡(jiǎn)介：第一章缺氧對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的影響及其機(jī)制目的探討缺氧對(duì)皮膚瘢痕成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的影響及其可能機(jī)制結(jié)論缺氧可促進(jìn)瘢痕成纖維細(xì)胞增殖及其Ⅰ型膠原合成減輕缺氧可能有助于預(yù)防瘢痕增生缺氧情況下HIF1Α可能具有調(diào)節(jié)瘢痕成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的作用第二章瘢痕組織內(nèi)缺氧環(huán)境的變化及其機(jī)制目的探討皮膚瘢痕從增生到萎縮成熟過程中組織內(nèi)微循環(huán)和缺氧環(huán)境的變化及其可能機(jī)制結(jié)論皮膚瘢痕從增生到萎縮成熟過程中組織內(nèi)微循環(huán)逐漸改善缺氧程度逐漸減輕組織內(nèi)高細(xì)胞密度、高細(xì)胞活性是形成瘢痕內(nèi)缺氧環(huán)境的主要原因HIF1Α可能一方面通過誘導(dǎo)VEGF、HO1表達(dá)促進(jìn)血管生成、成熟增加組織內(nèi)供氧另一方面通過協(xié)同P53作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡減少耗氧從而在減輕瘢痕組織內(nèi)缺氧促進(jìn)瘢痕萎縮成熟過程中發(fā)揮重要作用

簡(jiǎn)介：在職人員申請(qǐng)碩士學(xué)位學(xué)位論文Y933170聲U亳與細(xì)胞周期和生物掌特性研究研究生莊蠢型專業(yè)鹽疊鱟指導(dǎo)教師塹疊鑒煎燕單位堡盤塹盤生墊莊墮堂瞳學(xué)習(xí)期限二00二年九月至二00五年七月學(xué)位授予單位佳木斯大學(xué)中艾掬要砸T研，窺生學(xué)晦I￡文一、中文摘要目的探討P16和PCNA在人腦星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及與星形細(xì)胞瘤病理分級(jí)的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)了60例人腦星形細(xì)胞瘤石蠟標(biāo)本中P16和PCNA的表達(dá)。結(jié)果隨著病理級(jí)別的升高，P16陽(yáng)性率逐漸下降，I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)、IV級(jí)中P16的陽(yáng)性率分別為6470％、43，75％、2667％、1667％，二者之間呈負(fù)相關(guān)JO369，PO，05，I、II、III、Ⅳ級(jí)比較“二825L，P005。隨著病理級(jí)別的升高，PCNA陽(yáng)性率逐漸升高，I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)、IV級(jí)中PCNA的陽(yáng)性率分別為11，6％、3L_25％、4000％、66，67％，二者之間呈正相關(guān)，O390，JPO叭，I、II、III、Ⅳ級(jí)比較有顯著差異F9587，PO05。在60例石蠟標(biāo)本中P16和PCNA陽(yáng)性率相關(guān)性比較呈負(fù)相關(guān)嚴(yán)一O954P005。結(jié)論P(yáng)16和PCNA的聯(lián)合檢測(cè)可作為判斷星形細(xì)胞瘤分化程度及惡性程度重要的參考指標(biāo)，為臨床上對(duì)該腫瘤的診斷、鑒別診斷、治療及預(yù)后判定提供了重要的參考指標(biāo)。關(guān)鍵詞P16PCNA星形細(xì)胞瘤細(xì)胞周期

簡(jiǎn)介：J18278南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名啄洳J葉年明了≯日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀碩士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究?jī)?nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家或湖南省’有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并按中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國(guó)科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簍≥0囂叫年明坊日墨；乞唧年明Y日縮寫詞RPⅡ1640PBSHESPDABPISCDECMBMCAMECADTN僵PSNDPKFITANLPSVEJF主要縮略語(yǔ)英文索引全稱中文名稱∞SWEUP破MEM嘶ALINSTIMTE1640I心Ⅻ1640培養(yǎng)基MEDIUMPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONHEMAMXYLMANDEOSINSTAININGSTREPTAVIDIN／PEROXIDASE33DIAMINOBENZIDINEPROLIFERATINGINDEXSEVERECONLBINEDIMMUNODEFICIENCYEXTRACELLULARMATRIXBASEMENTMEMBRANECELLADHESIONMOLECULESECADHERINTISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASESNUCLEOSIDEDIPHOSPHATEKINASEFMSLIKETYROSINEKINASEMATRIXMETALLOPROTEINASESVASCULARENDOTHELIAL伊OWTHFACTOR3磷酸鹽緩沖液蘇木精伊紅染劑過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素3，3’二氨基聯(lián)苯胺細(xì)胞增殖指數(shù)嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷細(xì)胞外基質(zhì)基底膜細(xì)胞黏附分子B上皮型鈣粘蛋白金屬蛋白酶組織抑制劑核苷二磷酸激酶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體基質(zhì)金屬蛋白酶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文NK細(xì)胞對(duì)顆粒酶B的繼發(fā)性胞吞及其生物學(xué)意義IL33與EAE發(fā)病的相關(guān)性及其機(jī)制姓名李盼申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師龔非力鄭芳201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文4討NK92細(xì)胞所釋放GZMB的轉(zhuǎn)歸。一、一、NK92細(xì)胞在靶細(xì)胞刺激下出現(xiàn)繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象細(xì)胞在靶細(xì)胞刺激下出現(xiàn)繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象1應(yīng)用苯乙烯染料應(yīng)用苯乙烯染料FM143觀察觀察NK92細(xì)胞繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象細(xì)胞繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象苯乙烯染料FM143可與細(xì)胞膜磷脂雙分子層可逆性結(jié)合，發(fā)出熒光，而其在溶液中則幾乎不能檢出熒光。細(xì)胞發(fā)生內(nèi)吞后，苯乙烯染料內(nèi)吞入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞膜上熒光可用磷酸鹽緩沖液洗掉。借此原理，本實(shí)驗(yàn)首先將NK92細(xì)胞用FM143預(yù)染，然后用豬內(nèi)皮細(xì)胞（PEC）刺激1H，激光共聚焦顯微鏡（LCM）觀察NK92細(xì)胞內(nèi)吞情況。結(jié)果顯示，未用PEC刺激的NK92細(xì)胞膜上顯示熒光，PEC刺激的NK92細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細(xì)胞膜后，細(xì)胞內(nèi)顯示熒光，提示NK92細(xì)胞在胞吐后細(xì)胞膜發(fā)生內(nèi)化。2靶細(xì)胞刺激的細(xì)胞膜內(nèi)吞過程依賴于靶細(xì)胞刺激的細(xì)胞膜內(nèi)吞過程依賴于CLATHRIN細(xì)胞膜的內(nèi)吞常見形式為依賴于CLATHRIN的經(jīng)典途徑，也可依賴于巨胞飲（MACROPINOCYTOSIS）、小窩蛋白（CAVEOLA）和脂筏（LIPIDRAFT）等途徑。我們采用CLATHRIN特異性抑制劑CPZ預(yù)處理NK92細(xì)胞，再用FM143標(biāo)記細(xì)胞膜，使用靶細(xì)胞刺激后激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CPZ處理后NK92細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度顯著降低，提示NK92細(xì)胞膜內(nèi)吞依賴于CLATHRIN途徑。同時(shí)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度，結(jié)果顯示使用CPZ后細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度約為對(duì)照組的48。我們將NK92細(xì)胞用FM143標(biāo)記，分為兩組，分別用PEC在4℃和37℃刺激1H，結(jié)果顯示4℃條件下細(xì)胞并不發(fā)生內(nèi)吞，提示NK92細(xì)胞內(nèi)吞作用與溫度相關(guān)，是一種主動(dòng)內(nèi)吞。二、靶細(xì)胞刺激二、靶細(xì)胞刺激NK92細(xì)胞繼發(fā)性胞吞伴隨細(xì)胞繼發(fā)性胞吞伴隨GZMB回收回收1NK92細(xì)胞內(nèi)吞的細(xì)胞內(nèi)吞的GZMB進(jìn)入早期內(nèi)體進(jìn)入早期內(nèi)體NK92細(xì)胞膜內(nèi)吞過程為經(jīng)典的CLATHRIN依賴途徑，CPZ預(yù)處理的NK92細(xì)胞經(jīng)靶細(xì)胞（PEC）刺激，收集未刺激組、刺激15MIN、30MIN的細(xì)胞，免疫熒光檢測(cè)GZMB和早期內(nèi)體EEA1在胞內(nèi)共定位情況，結(jié)果顯示未刺激組EEA1

簡(jiǎn)介：1背景和目的流感急性腦?。↖NFLUENZAACUTEENCEPHALOPATHY，IAE）是流感病毒感染的重要并發(fā)癥之一，患者在病毒感染后在呼吸道癥狀出現(xiàn)12天內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)為快速發(fā)展的認(rèn)知障礙、精神狀態(tài)改變、意識(shí)消退、昏迷等，嚴(yán)重時(shí)引起神經(jīng)后遺癥或死亡。目前，IAE的發(fā)病機(jī)制依然不明。在流感急性腦病病人的腦脊液CSF和血漿中，發(fā)現(xiàn)TNFΑ、IL1等促炎癥細(xì)胞因子的濃度升高。認(rèn)為流感急性腦病可能是因機(jī)體在感染流感病毒后釋放促炎癥因子，進(jìn)而誘導(dǎo)了細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)CNS發(fā)生以促炎癥因子和趨化因子過度釋放為特征的細(xì)胞因子風(fēng)暴（CYTOKINNESTM），引發(fā)神經(jīng)及免疫系統(tǒng)功能紊亂和CNS的免疫病理?yè)p傷13。我們前期研究發(fā)現(xiàn)流感病毒可以感染星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，并造成大量促炎細(xì)胞因子和趨化因子釋放。而由流感病毒感染膠質(zhì)細(xì)胞所釋放的大量細(xì)胞因子對(duì)正常膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能有何影響尚未見報(bào)道。因此，本研究利用人流感病毒H1N1和H3N2感染小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞獲得條件上清，利用條件上清刺激正常星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，檢測(cè)相關(guān)促炎細(xì)胞因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平變化，及TNFΑIL6IL1Β的蛋白表達(dá)水平變化，為研究IAE所伴隨的細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)放大及細(xì)胞因子風(fēng)暴提供依據(jù)。2方法21APUERTORICO834H1N1和ASHANTOU6022006H3N2流感病毒株在MDCK細(xì)胞系中的增殖、保存及病毒滴度的測(cè)定。22原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)，利用間接免疫熒光法鑒定細(xì)胞純度。23不同亞型流感病毒株H1N1H3N2感染星型膠質(zhì)細(xì)胞MOI2，感染6H、24H后，收獲細(xì)胞上清液。24利用超濾分子截留技術(shù)截留分子量為300KD，對(duì)細(xì)胞上清液進(jìn)行超濾，獲得條件上清液。25流感病毒血凝實(shí)驗(yàn)檢測(cè)處理后的條件上清液中流感病毒顆粒。26CCK8法檢測(cè)條件上清液對(duì)原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞活性的影響。27條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，24H后提取RNA，并反轉(zhuǎn)錄成CDNA。REALTIMEPCR法檢測(cè)促炎細(xì)胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6，趨化因子IP10、MCP1、MIP1轉(zhuǎn)錄水平的變化。28條件上清刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞上清液中促炎細(xì)胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白含量，WESTERNBLOTTING法檢測(cè)GFAP蛋白的表達(dá)情況。29條件上清液刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，TRANSWELL法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞遷移情況。3結(jié)果31通過間接免疫熒光鑒定，成功完成對(duì)原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞純度達(dá)95％以上。32利用空斑法檢測(cè)，H1N1和H3N2流感病毒滴度為1107PFUML。33通過血凝實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，條件上清液中無(wú)法檢測(cè)到流感病毒顆粒。34REALTIMEPCR結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞24H后皆可誘導(dǎo)正常膠質(zhì)細(xì)胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)。35CCK8檢測(cè)結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞24H后，與對(duì)照組比較，刺激組細(xì)胞活性被抑制。36WESTERNBLOTTING法檢測(cè)結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后，GFAP蛋白表達(dá)水平發(fā)生上調(diào)。37ELISA法檢測(cè)結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后，促炎細(xì)胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6在不同時(shí)間點(diǎn)的蛋白表達(dá)水平發(fā)生不同程度改變總體呈下降趨勢(shì)。38TRANSWELL法檢測(cè)結(jié)果表明，條件上清刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞24H后，小膠質(zhì)細(xì)胞遷移率未發(fā)生上調(diào)。4結(jié)論41流感病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞后皆可誘導(dǎo)正常膠質(zhì)細(xì)胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)，產(chǎn)生細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)效應(yīng)。42流感病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞后皆可抑制細(xì)胞活性。43流感病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后，促炎細(xì)胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白表達(dá)水平在不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)生不同程度改變，總體呈下降趨勢(shì)。蛋白質(zhì)水平上，未能檢測(cè)出細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，可能與星形膠質(zhì)細(xì)胞促炎抗炎雙向細(xì)胞生物學(xué)功能有關(guān)

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)公開國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較王欣培養(yǎng)類別學(xué)歷研究生申請(qǐng)學(xué)位類型專業(yè)學(xué)位學(xué)科領(lǐng)域?qū)I(yè)口腔醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王勤濤教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位口腔醫(yī)院牙周科二O一二年五月頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較頜骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較研究生王欣學(xué)科專業(yè)牙周病學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙周黏膜病科導(dǎo)師王勤濤教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師董廣英副教授（副主任醫(yī)師）王新文講師（主治醫(yī)師）資助基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金資助81070842關(guān)鍵詞頜骨；人骨髓基質(zhì)細(xì)胞；人牙周膜干細(xì)胞；潛能；分化中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2012年05月