hS100A6對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文hS100A6對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用研究姓名：陳英華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：周蘭20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1重組hSl00A6的制備：用氯化鈣法將已經(jīng)構(gòu)建的pGSTmoluc和pGSTmoluchS100A6質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主大腸桿菌BL21；用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)其表達(dá)；冰上超聲裂解細(xì)菌后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B球珠(GlutathioneSep

2、harose4Bbeads)從細(xì)菌裂解液中分離純化GST和GSThS100A6，并通過十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodiumdodecylsulfate—polyacrylamidegelelectrophoresis，SDSPAGE)和QuantityOne軟件鑒定和分析純化效果，Western—blot法鑒定重組蛋白，BCA方法進(jìn)行蛋白定量，分裝后80℃保存?zhèn)溆谩?用不同濃度的GSThSl00A6干預(yù)所選的各個(gè)細(xì)胞株，MT

3、T法檢測(cè)hSl00A6對(duì)各細(xì)胞株增殖的影響。3根據(jù)上一部分試驗(yàn)結(jié)果，選取一個(gè)合適的蛋白濃度，用GSThS100A6干預(yù)各細(xì)胞株，臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)hS100A6對(duì)細(xì)胞增殖作用的時(shí)間依賴性。4Westernblot、免疫細(xì)胞化學(xué)法及免疫熒光法檢測(cè)檢測(cè)hS100A6干預(yù)后各腫瘤細(xì)胞中13catenin的表達(dá)水平及分布變化。5pTOPLUC轉(zhuǎn)染各腫瘤細(xì)胞株后，用GSThSl00A6處理細(xì)胞，通過熒光素酶活性分析探討hS100A6對(duì)Wn