簡介：研究背景帕金森病PD是以中腦黑質(zhì)紋狀體區(qū)多巴胺DA能神經(jīng)元進(jìn)行性變性為主要病理特征的一類中樞慢性退行性疾病。統(tǒng)計學(xué)資料顯示，在65歲以上老年人群中，PD的發(fā)病率以超過1％，已躍居為僅次子阿爾茨海默病嚴(yán)重威脅老年人健康的第二大殺手。臨床上主要表現(xiàn)為靜止性震顫、僵直、運(yùn)動遲緩和姿勢異常，晚期也將出現(xiàn)自主神經(jīng)功能紊亂、感覺障礙、精神異常和認(rèn)知障礙等非運(yùn)動性癥狀，給患者身心健康、家庭和社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。PD臨床運(yùn)動功能障礙主要是由黑質(zhì)紋狀體通路中多巴胺的嚴(yán)重缺失而造成。目前藥物治療（左旋多巴）能有效恢復(fù)多巴胺水平，仍然是早期臨床治療的主旋律，但長期服用會造成嚴(yán)重的異動和精神障礙。外科手術(shù)（腦深部電刺激術(shù)）是晚期PD患者的主要治療選擇，雖然同樣能有效的控制癥狀，但手術(shù)費(fèi)用昂貴，在緩解疾病進(jìn)展方面也并沒有定論。近年來，細(xì)胞替代治療在退行性疾病（如PD）治療逐漸展現(xiàn)出廣闊的前景。許多實驗室和臨床研究也表明替代缺失的DA神經(jīng)元能改善PD運(yùn)動癥狀，而干細(xì)胞由于其獨(dú)特的生物學(xué)特性逐漸成為了主要的細(xì)胞來源。干細(xì)胞體外可被誘導(dǎo)分化為DA神經(jīng)元的研究結(jié)果是細(xì)胞移植治療PD的理論基礎(chǔ)。胚胎干細(xì)胞ESCS是從發(fā)育早期胚囊內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出來的一種未分化細(xì)胞，具有利于移植的各種優(yōu)勢，也能被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)干細(xì)胞NSCS或神經(jīng)前體細(xì)胞NPCS，隨后進(jìn)一步分化為DA神經(jīng)元。盡管如此，ESC在細(xì)胞移植方面的應(yīng)用面臨了巨大的限制，比如倫理束縛、易形成畸胎瘤。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞IPSCS的發(fā)現(xiàn)雖曾一度帶來了新的希望，但是有研究表明IPSCS比其他類型多能干細(xì)胞有更高的基因畸變頻率，意味著更容易誘發(fā)腫瘤。因此，成體干細(xì)胞又重新成為了眾多研究者們的焦點(diǎn)。間充質(zhì)干細(xì)胞MSCS可以自我更新，并可分化為不同的細(xì)胞譜系，這些均是干細(xì)胞移植治療的重要特征和先決條件，在生物醫(yī)學(xué)和組織工程中具有巨大的科研價值。迄今為止，盡管在許多不同的成體組織中發(fā)現(xiàn)了MSCS的存在，但大多數(shù)實驗室和臨床研究都是在闡述明確且充分的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS引導(dǎo)下進(jìn)行的。然而，由于骨髓的獲取過程有創(chuàng)易出現(xiàn)感染，以及其數(shù)量、分化能力和基因穩(wěn)定性均隨年齡的增大而下降。因此，在過去的幾十年，探索新干細(xì)胞來源的研究從未停止過。人類胎盤是在妊娠過程中的一個暫時性器官，由分別來自于胎兒和母體的胎膜層和底蛻膜層組成。在哺乳動物妊娠過程中，胎兒被作為半異體移植體，在妊娠期并不會受到母體免疫細(xì)胞的攻擊和排斥。胎盤在這個免疫耐受過程中起到重要作用，而發(fā)揮此作用的核心部位是構(gòu)成母胎界面的母體蛻膜組織。有趣的是，越來越多的研究表明在足月胎盤的兩個組成部分里均含有大量的MSCS。其中，胎膜來源的MSCSFMMSCS由于來自胎兒而被推測具有多向分化潛能。確實，先前研究表明FMMSCS體外可被誘導(dǎo)分化為中胚層的心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞，內(nèi)胚層的胰島細(xì)胞、肝細(xì)胞以及外胚層的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞。而且這些結(jié)果同樣在體內(nèi)模型（心肌梗死和PD大鼠模型、糖尿病小鼠模型和脊髓損傷靈長類動物模型）中得到了證實，進(jìn)一步說明了FMMSCS移植可產(chǎn)生功能性效用。相反，底蛻膜來源的MSCSDECIDUABASALISDERIVEDMSCS，DBMSCS很可能由于其母體來源而極少受到關(guān)注。INTANKER等首先描述了DBMSCS的分離和擴(kuò)增潛能。此外，另有研究表明DBMSCS的生長對缺氧和血清剝奪環(huán)境具有抵抗作用，可能為因局部缺血所造成的細(xì)胞凋亡提供更好的替代治療。但迄今為止，對于DBMSCS在遺傳穩(wěn)定性和增殖能力等方面的研究卻鮮有，而這些特性與其移植潛能密切相關(guān)。與移植潛能相關(guān)的另一重要課題乃是移植后免疫排斥問題。免疫調(diào)節(jié)功能是MSCS用作細(xì)胞治療的一個極具吸引力的特征。重要的是，中樞神經(jīng)慢性炎性反應(yīng)是PD發(fā)生和發(fā)展的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，許多動物實驗表明緩解黑質(zhì)紋狀體區(qū)的炎癥反應(yīng)是減緩DA神經(jīng)元退化的有效手段。值得注意的是，炎癥雖然長期被認(rèn)為是大腦修復(fù)的阻礙，但同時也可通過分泌趨化因子促使干祖細(xì)胞募集和遷移，這也恰巧構(gòu)成了干細(xì)胞移植治療PD的良好微環(huán)境。相反，一氧化氮NO和活性氧ROS等炎癥介質(zhì)可促使蛋白異常修飾而導(dǎo)致錯折疊和功能缺失，進(jìn)一步加劇神經(jīng)退變。MSCS借助于其特有的免疫調(diào)節(jié)功能，通過細(xì)胞接觸或分泌可溶性細(xì)胞因子對有害免疫炎性組分的調(diào)控抑制黑質(zhì)區(qū)微環(huán)境中的免疫活性，進(jìn)而對DA神經(jīng)元起到保護(hù)作用，為PD細(xì)胞移植治療打開了一扇新的窗戶。近年來，F(xiàn)MMSCS由于其低免疫原性（高表達(dá)HLAG抗原、低表達(dá)HLAⅡ抗原）吸引了眾多學(xué)者的目光。另外，通過分裂素或同種異體細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)試驗證實FMMSCS具有免疫抑制作用。然而，在母胎免疫中發(fā)揮更重要作用的母體側(cè)蛻膜組織中的DBMSCS的免疫學(xué)特性尚未見報道?；谏鲜鲅芯勘尘?，試圖從胎盤母體側(cè)底蛻膜組織中分離并鑒定DBMSCS從基因穩(wěn)定性、增殖能力和免疫學(xué)特性等角度分析其移植潛能并進(jìn)一步研究其體外分化為DA神經(jīng)元的能力，評價其在將來PD治療方面的應(yīng)用前景。第一章人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離及鑒定目的探索有效的DBMSCS體外分離、純化方法，建立穩(wěn)定的培養(yǎng)體系，并從表型和功能方面進(jìn)行鑒定。方法通過酶消化法和密度梯度離心法從人足月胎盤（3741孕周，男性胎兒）底蛻膜中獲取間充質(zhì)干細(xì)胞，采用限制性稀釋法純化獲取單細(xì)胞來源的克隆團(tuán)，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)變化和生長特點(diǎn)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及表面抗原CD14，CD29，CD31，CD34，CD44，CD45，CD73，CD90，CD105，CD106的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記血管性血友病因子VWF、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記波形蛋白VIMENTIN、成纖維細(xì)胞標(biāo)記D7FIB、成骨細(xì)胞標(biāo)記堿性磷酸酶ALP、成軟骨細(xì)胞標(biāo)記Ⅱ型膠原蛋白COLLAGENⅡ和脂肪細(xì)胞標(biāo)記周脂素PERILIPIN的表達(dá)，顯微鏡下隨機(jī)選取10個視野200計算陽性率。在特定的誘導(dǎo)條件下，使其向成骨、成脂、成軟骨方向分化，鑒定其多向分化潛能。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）方式進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)描述。結(jié)果人足月胎盤底蛻膜中分離的間充質(zhì)干細(xì)胞起初呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，僅少量貼壁生長，7天后主要呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣長梭形，細(xì)胞生長緩慢，約在第14天形成克隆團(tuán)，每個克隆團(tuán)約100200個細(xì)胞組成，大約3周后可達(dá)融合狀態(tài)傳代后細(xì)胞生長速度明顯加快，呈旋渦狀生長經(jīng)限制性稀釋培養(yǎng)后，單細(xì)胞來源的DBMSCS克隆團(tuán)表現(xiàn)為均一的長梭形。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示＞70％的細(xì)胞處于靜止期（G0G1期），且這些細(xì)胞不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)記CD14，CD34，CD45和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記CD31，CD106，而典型的間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記CD29，CD44，CD73，CD90，CD105呈陽性表達(dá)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示僅少量DBMSCS表達(dá)公認(rèn)的內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記VWF40±12％，而大多數(shù)細(xì)胞表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記VIMENTIN（982±24％）和成纖維細(xì)胞D7FIB（991±16％），在經(jīng)誘導(dǎo)前成骨細(xì)胞標(biāo)記ALP、成軟骨細(xì)胞標(biāo)記COLLAGENⅡ和脂肪細(xì)胞標(biāo)記PERILIPIN均未見表達(dá)，而經(jīng)誘導(dǎo)后茜素紅染色、油紅O染色和ALCIANBLUE染色均呈陽性表現(xiàn)。結(jié)論人胎盤底蛻膜雖然來源于母體，同樣含有豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞，這種細(xì)胞具備一般MSCS基本特性，包括呈克隆樣貼壁生長、表達(dá)典型的MSCS表面標(biāo)記以及具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等中胚層分化潛能。第二章人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植潛能相關(guān)生物學(xué)特性目的通過對DBMSCS基因穩(wěn)定性、增殖能力、免疫調(diào)節(jié)功能等生物學(xué)特性的深入探索，評價其在于細(xì)胞移植治療方面的應(yīng)用潛能。方法將單細(xì)胞來源的DBMSCS分兩組，一組連續(xù)培養(yǎng)3周，血球計每周計數(shù)兩次，繪制生長曲線另一組連續(xù)長期培養(yǎng)3月，獲取晚期代數(shù)細(xì)胞。染色體核型分析早、晚期代數(shù)DBMSCS的染色體核型變化。原子力顯微鏡AFM、透射電鏡TEM觀察晚期代數(shù)DBMSCS細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。密度梯度離心法體外分離人外周血單核細(xì)胞PBMCS，聯(lián)合DBMSCS建立混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)MLCS體系，在PBMCS經(jīng)植物凝血素PHA或同種異體PBMCS刺激后，CCK8法分析DBMSCS對PBMCS增殖抑制作用流失細(xì)胞儀分析MLCS中淋巴細(xì)胞的凋亡情況及TREG細(xì)胞CD4CD25HIGH比例實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)QPCR檢測MLCS中DBMSCS可溶性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長因子ΒTGFΒ、白介素10（IL10）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶INOS、環(huán)氧化酶2COX2、吲哚胺2，3雙加氧酶IDO和人類白細(xì)胞抗原GHLAG的表達(dá)情況。FMMSCS作為對照。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）方式進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)描述多組間比較采用單向方差分析，DBMSCS體外生長動力學(xué)分析采用析因設(shè)計資料的方差分析，兩個獨(dú)立樣本的均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本的T檢驗，可溶性細(xì)胞因子表達(dá)部分采用兩獨(dú)立樣本非參數(shù)秩和檢驗，P＜005認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果通過描繪早期代數(shù)DBMSCS生長曲線圖，結(jié)果提示DBMSCS在經(jīng)過11天的潛伏期后進(jìn)入對數(shù)生長期，且自此往后的檢測點(diǎn)D11、D14、D18、D20，其細(xì)胞數(shù)量明顯高于FMMSCSP＜005整個過程中DBMSCS始終保持上升的生長勢頭，而FMMSCS在末期生長表現(xiàn)為下降的趨勢。經(jīng)過3個月的長期連續(xù)培養(yǎng)，我們獲取了第1624代晚期DBMSCS。原子力顯微鏡觀察下DBMSCS呈長梭型，部分可見大的扁平狀細(xì)胞，可見與細(xì)胞長軸平行的微絲束，細(xì)胞骨架明顯，由微管、微絲、中間纖維形成立體的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，邊緣復(fù)雜，有觸突狀骨架伸出，對維持細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞的運(yùn)動和物質(zhì)運(yùn)輸起著關(guān)鍵的作用。細(xì)胞核大，核膜清晰，核仁明顯，部分細(xì)胞核可見多個核仁。細(xì)胞間連接也可見微管及微絲結(jié)構(gòu)，形成細(xì)胞間的網(wǎng)狀連接，提示細(xì)胞間存在相互通訊和物質(zhì)交換的可能。透射電鏡顯示細(xì)胞呈長梭形，細(xì)胞膜完整，在高倍鏡下，細(xì)胞表面可見散在的豐富的類似微絨毛結(jié)構(gòu)，可能與胎盤固有的附著能力有關(guān)。細(xì)胞間的連接以緊密連接為主，部分區(qū)域可見縫隙連接，說明細(xì)胞間存在粘合和通訊的交互作用。細(xì)胞多為單核，偶見雙核，核漿比例大，核膜清晰，外膜外表面附有核糖體，具有合成蛋白質(zhì)的功能，核仁一個或多個，由核仁絲纏繞成海綿球體狀，少量的異染色質(zhì)分布在核周邊區(qū)，常染色質(zhì)占多數(shù)，是間期核處于伸展部位的染色質(zhì)，電子密度低，利于RNA的復(fù)制，部分細(xì)胞可見核仁邊集現(xiàn)象，這可以使核仁合成的各種RNA更迅速的釋放在胞質(zhì)中，表明細(xì)胞代謝活躍。胞漿內(nèi)可見散在的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，其上附著豐富的游離核糖體，說明正在大量合成細(xì)胞分裂和生長所需的蛋白質(zhì)，這從側(cè)面反應(yīng)了細(xì)胞增殖活躍，細(xì)胞分化程度較低。細(xì)胞的線粒體為管狀嵴結(jié)構(gòu)，與內(nèi)分泌細(xì)胞的線粒體的超微結(jié)構(gòu)相似。染色體核型分析結(jié)果顯示所有受檢的晚期代數(shù)DBMSCS樣本均和早期代數(shù)細(xì)胞一樣保持正常染色體核型46，XX由于所有胎盤樣本均來自與男性胎兒，此結(jié)果也側(cè)面反應(yīng)了我們所分離的細(xì)胞單純來源于母體組織，而并未受胎兒組織細(xì)胞的污染。MLCS實驗結(jié)果表明無論細(xì)胞細(xì)胞接觸方式和TRANSWELL，DBMSCS類似FMMSCS可抑制促細(xì)胞分裂素和同種異源誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖，并且呈濃度依賴性。流式細(xì)胞儀ANNEXINVPI染色檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示MLCS對照和共培養(yǎng)體系中淋巴細(xì)胞未見明顯的凋亡，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（T1340，P0229）。流式細(xì)胞儀分析與DBMSCS共培養(yǎng)后CD4CD25HIGH細(xì)胞的變化情況，結(jié)果顯示MLCS體系中經(jīng)PHA刺激，與DBMSCS共培養(yǎng)3天后，CD4CD25HIGH細(xì)胞比例相比對照組增高了5倍以上。QPCR結(jié)果提示除TGFΒZ0289P0773外，IL10Z2309P0021、INOSZ2309P0021、COX2Z2309P0021、IDOZ2309P0021和HLAGZ2309P0021等抗炎因子的表達(dá)量相比未處理DBMSCS明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性，體外長期連續(xù)培養(yǎng)可保持穩(wěn)定正常的染色體核型，且具有明顯的免疫抑制作用，是干細(xì)胞移植治療良好的細(xì)胞種子來源。第三章人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞向多巴胺能樣神經(jīng)元分化目的探討人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為多巴胺能樣神經(jīng)元的潛能，并分析這種潛能是否受長期培養(yǎng)影響進(jìn)而評價其在PD治療方面的應(yīng)用前景。方法采用早期第3代和經(jīng)長期培養(yǎng)3個月后第19代單細(xì)胞來源DBMSCS依照兩步法進(jìn)行誘導(dǎo)。第一步神經(jīng)球NSS誘導(dǎo)，細(xì)胞換新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基孵育過夜，胰蛋白酶消化后用含表皮生長因子EGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子BFGF和B27等細(xì)胞因子的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)。同時，通過光學(xué)顯微鏡下分別計數(shù)兩種不同代數(shù)細(xì)胞的成球率來評價他們的成球能力。第二步DA神經(jīng)元誘導(dǎo)，將NSS消化成單個細(xì)胞后，用含音猬因子SHH、成纖維細(xì)胞生長因子8FGF8、腦源性生長因子BDNF和毛猴素的誘導(dǎo)培養(yǎng)基重懸后接種于層粘連蛋白包被的培養(yǎng)板中連續(xù)誘導(dǎo)710天。第一步誘導(dǎo)后光學(xué)顯微鏡下觀察NSS形態(tài)和生長特點(diǎn)，免疫細(xì)胞化學(xué)和WESTERNBLOT檢測神經(jīng)干細(xì)胞NSC標(biāo)記NESTIN和CD133的表達(dá)第二部誘導(dǎo)后光學(xué)顯微鏡下觀察DA神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)改變，免疫細(xì)胞化學(xué)和WESTERNBLOT檢測成熟神經(jīng)元標(biāo)記神經(jīng)特異性的烯醇化酶NSE、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP和DA神經(jīng)元特異性標(biāo)記酪胺酸羥化酶TH的表達(dá)情況。采用圖像分析軟件分析WESTERNBLOT條帶灰度，以ΒACTIN作為標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)參。電化學(xué)高效液相色譜法分析誘導(dǎo)前后培養(yǎng)上清中DA含量變化。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）方式進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)描述早、晚期代數(shù)來源的NSS成球能力及DA神經(jīng)元神經(jīng)遞質(zhì)分泌量比較采用兩個獨(dú)立樣本的T檢驗，早、晚期代數(shù)DBMSCS來源的DA神經(jīng)元標(biāo)記表達(dá)率比較采用兩獨(dú)立樣本非參數(shù)秩和檢驗，P＜005認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果當(dāng)DBMSCS經(jīng)過第一步NSS誘導(dǎo)后，起初幾天大多數(shù)細(xì)胞仍呈貼壁生長，在第3天開始出現(xiàn)小的細(xì)胞團(tuán)，這些細(xì)胞團(tuán)（并非所有）體積逐漸增大，約810天形成漂浮生長的細(xì)胞球，第3代和第19代細(xì)胞來源的NSS光學(xué)顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)上無差異，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測提示兩種不同來源的NSS均高表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記NESTIN和CD133，WESTERNBLOT結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果相符。而晚期代數(shù)DBMSCS來源的NSS形成數(shù)量明顯低于早期代數(shù)來源的NSS（3889±0674VS6778±0752），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義T4958，P0000。當(dāng)NSS經(jīng)過第二步DA神經(jīng)元誘導(dǎo)后，細(xì)胞呈現(xiàn)出長梭形分枝狀的神經(jīng)元樣形態(tài)，兩種代數(shù)來源的神經(jīng)元祥細(xì)胞均表達(dá)成熟神經(jīng)元標(biāo)記NSE（62250±4935VS56650±6890％，Z1441，P0180）、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記GFAP42800±6160VS40867±10686％，Z0641，P0589和DA神經(jīng)元特異性標(biāo)記TH（19050±5585VS17233±2680％，Z0320，P0818）。WESTERNBLOT結(jié)果同樣證實了TH蛋白的表達(dá)，且電化學(xué)高效液相結(jié)果顯示相比誘導(dǎo)前，兩種不同來源細(xì)胞誘導(dǎo)后培養(yǎng)上清DA含量均有升高P3T23002，P0000P19T15756，P0000，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，兩種不同代數(shù)細(xì)胞誘導(dǎo)前后DA分泌量（P3VSP19156033±8206VS144640±12435PGML，T1325，P0256）無明顯區(qū)別，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論人胎盤底蛻膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外可分化為多巴胺能樣神經(jīng)元，且這種分化能力不受體外長期培養(yǎng)的影響，可能成為PD干細(xì)胞移植治療的有效細(xì)胞來源。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文改良HBSS液對體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞生物學(xué)活性的影響EFFECTOFMODIFIEDHBSSSOLUTIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANPERIODONTALLIGAMENTCELLSINVITRO課題來源國家自然科學(xué)基金30900860學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院李鑫段建民主任醫(yī)師口腔臨床醫(yī)學(xué)科研型碩士研究生學(xué)院2013年5月2日廣州中文摘要的牙齒發(fā)生了置換性吸收【5】，而造成再植牙失敗的主要原因是牙根的炎癥性吸收INFLAMMATORYRESORPTION，IR和置換性吸收REPLACEMENTRESORPTION，RR。ANDREASENJO對影響再植牙形成FH的因素進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，對形成FH有影響的因素由強(qiáng)至弱依次為牙根發(fā)育階段、體外干燥放置時間、即刻再植和體外濕保存時問16J。再有，許多研究結(jié)果顯示與縮短口外放置時間比較，用保存介質(zhì)保存PDLC活性來預(yù)防脫位牙再植后的RR和IR貝TJ更為關(guān)鍵【71。理想的脫位牙保存介質(zhì)應(yīng)具有生理性滲透壓和PH值、能保存PDLC的活性、粘附力和增殖能力、以及容易獲得且保質(zhì)期長等特性。TLBSS液HANK’SBALANCEDSALTSOLUTION是美國牙髓醫(yī)師學(xué)會推薦的最佳牙齒保存液，含有細(xì)胞生存所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，滲透壓290320MOSRRDL，PH值72，適宜細(xì)胞生長【8I。但是因為在藥店里無售而一直沒有被廣泛使用。牛奶因為含細(xì)菌量低，并且含有少量細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子而被廣泛接受，但是它的效果是否與HBSS液樣還存在爭議，有報道認(rèn)為它只能在3H內(nèi)保存細(xì)胞活性【9】。器官保存液VIASPAN也被研究用做PDLC的保存介質(zhì)，它能有效保存唇成纖維細(xì)胞活性至168H，且在VIASPAN中保存6H和12H的狗牙再植后既未發(fā)生IR，也未發(fā)生RRLL0，111。雖然VIASPAN能長時間地保存細(xì)胞活性，但因價格昂貴而不適于普遍使用。BUTTKETMNVIASPAN含有的還原型谷胱甘肽GLUTATHIONE，GSH能分解過氧化氫，保護(hù)PDLC免受氧化損傷他的研究也證實在添加了100U／ML過氧化氫酶的HBSS液中保存過的狗脫位牙，再植后的根面吸收率顯著低于未添加過氧化氫酶的HBSS液組【3L。德匡DENTOSAFE公司生產(chǎn)了一種名為牙科急救箱的脫位牙齒保存液，被瑞士和澳洲引進(jìn)放在易發(fā)生牙外傷的高風(fēng)險區(qū)中小學(xué)校，體外實驗表明這種牙齒保存液能在室溫下保存PDLC活性和增殖能力至48H【12】。有報道對使用了牙科急救箱的6顆脫位牙做了長期隨訪，保存時間為1～53H，這些牙齒再植后全部形成了牙周膜愈合【1。由此可見，選擇適當(dāng)?shù)谋４娼橘|(zhì)濕保存脫位牙，對于保存牙根面PDLC的活性，提高再植牙的FH是非常重要的。目前我國對脫位牙齒保存液的研究甚少，也沒有商業(yè)化的脫位牙齒保存液U

簡介：點(diǎn)擊查看更多體外培養(yǎng)人創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：後旦大學(xué)復(fù)旦大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文SMOOTHENED介導(dǎo)的GPCR樣信號對腫瘤多藥耐藥細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及作用機(jī)制研究院系所專業(yè)姓名指導(dǎo)教師完成日期藥學(xué)院藥理學(xué)L目爭白霞譚文福副研究員2013年5月20目復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略詞表縮略符外文全稱中文全稱

簡介：目的瘦素信號通路缺失瘦素抵抗是二型糖尿病的并發(fā)癥之一現(xiàn)有的研宄顯示中樞和外周途徑的瘦素信號對骨量、脂肪含量都有較為明顯的影響。但瘦素信號對于兩種不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞作用是否相同與之相關(guān)的作用靶點(diǎn)是什么卻不甚了解。本研宄旨在對瘦素信號在不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞中的具體作用方式及靶點(diǎn)進(jìn)行探索為解釋兩種不同靶器官對于瘦素信號的應(yīng)答提供依據(jù)。方法實驗一對瘦素缺失小鼠組OBOB瘦素受體缺失小鼠組DBDB正常野生型小鼠組WT重組瘦素恢復(fù)瘦素缺失小鼠瘦素信號組OBOB1印TIN進(jìn)行骨形態(tài)學(xué)、成骨和破骨細(xì)胞功能、體內(nèi)白色脂肪含量、攝食量的測定。確定瘦素信號缺失對于兩種器官組織生理功能的影響。實驗二以酶消化法和全骨髓法培養(yǎng)脂肪來源和骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞MSCS經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定表面分子分組同前。MTT、克隆形成能力試驗CFUASSAY檢測細(xì)胞增殖能力成骨、成脂分化實驗檢測細(xì)胞相關(guān)分化能力。PCR與WESTERNBLOT檢測相關(guān)基因與蛋白水平的變化。實驗三對細(xì)胞體外進(jìn)行PPARY信號與AMPK信號的激活觀察細(xì)胞成脂成骨能力的變化及相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果實驗一、MICROCT通過股骨遠(yuǎn)端骨密度BMD、骨量組織量BVTV、骨小梁粗細(xì)TRTH、骨小梁數(shù)量TRN骨小梁間距TRS等骨形態(tài)學(xué)指標(biāo)檢測提示OBOB小鼠均明顯高于WT小鼠且WT小鼠高于DBDB小鼠。HE染色、新骨形成率BFR、抗酒石酸酸性磷酸酶活性TRAP、血清成骨破骨標(biāo)志物檢測提示相同趨勢。骨髓腔油紅0染色提示瘦素信號缺失IEP小鼠的骨髓腔內(nèi)有較多脂滴形成。骨長度、皮質(zhì)骨密度檢測提不IEP小鼠較WT小鼠有明顯的下降。IEP小鼠的體重和相關(guān)白色脂肪、攝食量均較WT小鼠有明顯的增加瘦素信號的恢復(fù)對體重的改變是明顯的。實驗二、分離的脂肪與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)流式表面分子鑒定符合干細(xì)胞特征。MTT實驗、克隆形成能力提示瘦素信號的缺失方式不同會影響骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS增殖能力克隆形成集落骨向分化能力實驗CFUO提示三種來源細(xì)胞無明顯差異而克隆形成集落脂向分化能力實驗CFUA顯示1印小鼠明顯強(qiáng)于WT小鼠。而脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞ADSCS方面增殖分化相關(guān)實驗結(jié)果提示I印來源的ADSCS增殖能力較強(qiáng)、成骨分化能力較弱而成脂分化能力較強(qiáng)。相關(guān)基因蛋白的結(jié)果與染色結(jié)果一致。重組瘦素可以恢復(fù)瘦素缺失的MSCS的生物學(xué)行為異常。實驗三PPARY激活劑羅格列酮可明顯增強(qiáng)WT來源ADSCS的脂向分化能力卻對瘦素信號缺失的ADSCS作用甚微AMPK激活劑二甲雙胍對不同來源的BMSCS增強(qiáng)成骨分化能力的作用一致。重組瘦素可扭轉(zhuǎn)羅格列酮對MSCS成脂分化過程影響的差異卻對二甲雙胍造成的成骨能力上升無明顯作用。結(jié)論1、瘦素信號通路的缺失對小鼠長骨的骨量有明顯的影響但瘦素缺失與其受體缺失所起的作用不完全相同提示除外周循環(huán)條件下瘦素的直接作用以外可能存在瘦素于中樞交感神經(jīng)的信號對骨量存在作用且是主要作用的可能。且瘦素對發(fā)育期的骨形成有較為明顯的影響。瘦素對小鼠體內(nèi)白色脂肪生成的刺激作用兩種不同的信號缺失方式較一致。2、OBOB小鼠的骨量上升是一種高成骨和高破骨的高轉(zhuǎn)換型骨量上升DBDB小鼠的骨質(zhì)疏松是一種低成骨和低破骨共同作用的低轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松。3、瘦素信號對BMSCS的增殖能力、成脂分化能力影響明顯而對成骨分化能力影響不大。瘦素信號對ADSCS的增殖、分化能力均具有明顯影響。4、瘦素信號可能通過抑制PPARY的活化來抑制ADSCS的成脂分化能力。而對BMSCS的成骨分化能力的影響應(yīng)該在AMPK信號的上游。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RNAI抑制G250基因以及對腎癌7860細(xì)胞生物學(xué)特性影響的實驗研究姓名趙俊峰申請學(xué)位級別博士專業(yè)泌尿外科指導(dǎo)教師鄭少斌20080421中文摘要隨著對G250的研究不斷深入以及其顯示出來的良好的腫瘤特異性，其在腎癌的診斷、篩選以及生物治療方面具有非常好的應(yīng)用前景。比如G250單克隆抗體G250MAB可以直接攻擊表達(dá)G250蛋白的腎癌細(xì)胞，腎癌細(xì)胞表面的G250抗原可以增強(qiáng)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)ANTIBODYDEPENDENTCELLMEDIATEDCYTOTOXICITY，ADCC，利用核素標(biāo)記的G250MAB進(jìn)行腫瘤放射免疫顯像、放射免疫治療以及利用G250的特異性和免疫原性進(jìn)行腫瘤疫苗的研究等。而最近的研究發(fā)現(xiàn)G250可能是一種癌基因，與腎癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中具有不可忽視的作用，所以有必要對G250在腎癌的發(fā)生、發(fā)展中的真正作用進(jìn)一步認(rèn)識，并在此基礎(chǔ)之上，開展腎癌診斷和治療方面的研究。RNA干擾技術(shù)是近年來發(fā)展起來的新的生物工程技術(shù)。人工誘導(dǎo)RNA干擾技術(shù)的建立，為基因功能研究和人類基因治療開辟了一個全新的領(lǐng)域，取得了令人振奮的研究成果。利用人工誘導(dǎo)RNA干擾技術(shù)使所研究的目的基因沉默從而進(jìn)一步研究目的細(xì)胞的生物學(xué)特性及功能是目前分子生物學(xué)領(lǐng)域常用的實驗方法。應(yīng)用該技術(shù)使G250基因沉默，觀察腎癌細(xì)胞生物學(xué)特性的變化，來研究G250基因?qū)δI癌的發(fā)生、發(fā)展的影響，該方法簡便、易行，結(jié)果可靠，目前國內(nèi)外尚無類似研究報道。本研究旨在探討能否在腎癌細(xì)胞系中利用人工誘導(dǎo)RNA干擾技術(shù)，抑制G250基因表達(dá)，通過體內(nèi)、外試驗研究G250基因沉默對腎癌細(xì)胞系7860細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，進(jìn)而了解G250基因?qū)δI癌的發(fā)生及發(fā)展的影響，為闡明腎癌的發(fā)生機(jī)制提供理論依據(jù)并為進(jìn)一步探索腎癌的基因治療奠定基礎(chǔ)。方法第一章G250基因特異性SIRNA的設(shè)計、合成及表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定利用NCBI的基因庫GCNEBANK及計算機(jī)輔助設(shè)計軟件設(shè)計4條內(nèi)含不同G250基因特異性序列的寡核苷酸干擾片斷命名G250SIRNA1～G250SIRNA4，并設(shè)計另一條無意義序列命名G250SIRNAN作對照，寡核苷酸鏈退火后用T4DNA連接酶連接到線性化的PRNATU61／NEO載體中，構(gòu)建成重組質(zhì)粒載體H

簡介：分類號分類號R73R733737學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼071010071010學(xué)號號2110101598110101598福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文ATF3ATF3在腸癌細(xì)胞腸癌細(xì)胞HCT116HCT116中生物學(xué)生物學(xué)作用作用及蛋白酶體抑及蛋白酶體抑制劑制劑CARFILZOMIBCARFILZOMIB對ATF3ATF3的調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)EFFECTOFACTIVATINGTRANIONFACT3ATF3ONTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFCOLONCANCERCELLHCT116ATF3ISUPREGULATEDUPONPROTEASOMEINHIBITCARFILZOMIB學(xué)位類型型科研型碩士科研型碩士所在學(xué)院院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研究生生廖錦容廖錦容學(xué)科、?？啤I(yè)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)導(dǎo)師師葉韻斌葉韻斌教授教授研究起止日期研究起止日期2012年7月至月至2014年4月答辯日期期2014年5月日二○一四年五月一四年五月目錄英文縮略詞表3中文摘要中文摘要4ABSTRACTABSTRACT6前言9第一部分第一部分ATF3ATF3過表達(dá)對過表達(dá)對HCT116HCT116細(xì)胞增殖，腫瘤起始能力以及相關(guān)信號通路的細(xì)胞增殖，腫瘤起始能力以及相關(guān)信號通路的影響影響11材料與方法11結(jié)果23討論31小結(jié)34第二部分第二部分ATF3ATF3過表達(dá)對過表達(dá)對HCT116HCT116細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力、細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力、EMTEMT以及相關(guān)信號通路的影響以及相關(guān)信號通路的影響35材料與方法35結(jié)果38討論42小結(jié)44第三部分第三部分蛋白酶體抑制劑蛋白酶體抑制劑CARFILZOMIBCARFILZOMIB對ATF3ATF3的調(diào)節(jié)的調(diào)節(jié)45材料與方法45結(jié)果47討論51小結(jié)53結(jié)論54參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)55致謝59綜述綜述60

簡介：單位代碼10475學(xué)號104753101236分類號R733碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文CD133肺癌細(xì)胞的放射生物學(xué)特性研究學(xué)科、專業(yè)醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)研究方向腫瘤放療申請學(xué)位類別醫(yī)學(xué)碩士申請人蔡迎春指導(dǎo)教師宋永平袁翎教授二〇一三年五月RADIOBIOLOGYACTERISTICSOFCD133POSITIVECELLSINHUMANLUNGCANCERADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOLOFHENANUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYCAIYINGCHUNSUPERVISPROFSONGYONGPINGYUANLINGDATEMAY2013

簡介：卵泡作為卵巢的功能單位，由卵母細(xì)胞及包裹于其周圍的顆粒細(xì)胞GRANULOSACELLS，GCS和外圍的膜細(xì)胞組成。卵泡生長發(fā)育是一個復(fù)雜而又精細(xì)調(diào)控的過程，期間卵母細(xì)胞逐步獲得發(fā)育潛能，為后續(xù)受精及胚胎發(fā)育做準(zhǔn)備。卵泡發(fā)育過程中，隨著卵泡腔形成，顆粒細(xì)胞分化為兩種不同表型①壁顆粒細(xì)胞MURALGRANULOSECELLS，MGCS，位于卵泡腔周圍，主要功能為類固醇激素合成及促進(jìn)卵泡壁破裂②卵丘細(xì)胞CUMULUSCELLS，CCS，與卵母細(xì)胞緊密聯(lián)系，兩者構(gòu)成卵母細(xì)胞卵丘細(xì)胞復(fù)合體COC。卵母細(xì)胞和CCS之間通過縫隙鏈接和旁分泌信號通路相互交流，形成卵母細(xì)胞生長發(fā)育的微環(huán)境，并貫穿于整個卵泡發(fā)育過程。在竇前卵泡階段，卵泡生長不依賴于FSH的作用，主要通過GCS上表達(dá)KIT配體KITL，作用于卵母細(xì)胞上的受體KIT促進(jìn)卵子生長反過來，卵子通過旁分泌因子OOCYTESECRETEFACTS，OSFS，主要為生長分化因子9GDF9和骨形態(tài)形成蛋白15BMP15，作用于CCS促進(jìn)CCS增殖、抗凋亡。在竇卵泡階段，CCS通過縫隙連接向卵子傳遞CAMP和CGMP等小分子物質(zhì)以維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯，同時其自身也受到OSFS的調(diào)節(jié)以拮抗FSH引起的黃素化作用在卵母細(xì)胞成熟階段，卵母細(xì)胞和CCS相互協(xié)調(diào)完成卵丘擴(kuò)張及卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)。此外，CCS為卵母細(xì)胞提供必須的代謝小分子如丙酮酸、丙氨酸和膽固醇以供卵母細(xì)胞生長發(fā)育，同時卵母細(xì)胞促進(jìn)了CCS三大代謝相關(guān)酶的表達(dá)。卵母細(xì)胞卵丘細(xì)胞這些緊密的相互作用，提示卵母細(xì)胞成熟過程中在CCS上存在諸多印記，即CCS上的相關(guān)基因表達(dá)、分子和信號可以間接反應(yīng)卵母細(xì)胞發(fā)育成熟的狀態(tài)。卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)IVM指將未成熟卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體GVCOCS從竇卵泡中取出，在特定的體外培養(yǎng)體系中培養(yǎng)成熟MⅡCOCS。IVM作為一項輔助生殖前沿技術(shù)，尤其適用于卵巢過度刺激綜合征OHSS患者及多囊卵巢綜合征PCOS患者。此外，近年來也有學(xué)者提出，在一些激素敏感性腫瘤患者治療前可應(yīng)用IVM對其行生育力保存。但是大量的臨床數(shù)據(jù)表明，和體內(nèi)成熟卵子相比，IVM后的卵子發(fā)育潛能低，因此，IVM尚未廣泛應(yīng)用于臨床。探索IVM過程中卵丘細(xì)胞的狀態(tài)及相關(guān)基因表達(dá)有助于深入理解卵母細(xì)胞成熟機(jī)制并有望改進(jìn)IVM培養(yǎng)體系。小鼠COC體外培養(yǎng)和IVM，是此類研究的最常用模型。近年來，隨著高通量技術(shù)的發(fā)展，檢測GCS或CCS上基因表達(dá)譜成為可能。已見研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)及QPCR技術(shù)嘗試分析CCS與卵母細(xì)胞質(zhì)量相關(guān)的生物標(biāo)記物也有研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)確定了不同培養(yǎng)條件下CCS上的基因表達(dá)譜差異。然而，鮮有關(guān)于IVM過程中CCS上基因表達(dá)譜變化的研究。因此，我們認(rèn)為，基于卵母細(xì)胞和卵丘細(xì)胞之間的相互交流理論，IVM過程中CCS上的基因表達(dá)譜發(fā)生一系列的變化，通過高通量技術(shù)可以獲得表達(dá)譜的變化，可望從中篩選出某些因子作為生物標(biāo)記物間接評價卵母細(xì)胞發(fā)育潛能。為了驗證以上科研假說，深入理解卵母細(xì)胞與CCS之間的相互交流及卵母細(xì)胞成熟的分子機(jī)制，本研究以小鼠IVM及IVF為模型，應(yīng)用高通量技術(shù)研究CCS上基因表達(dá)譜特征，確定CCS上卵母細(xì)胞胞核及胞質(zhì)發(fā)育潛能相關(guān)生物標(biāo)記物，以期無創(chuàng)性評價卵母細(xì)胞質(zhì)量。作為該研究的一部分，本文應(yīng)用小鼠IVM模型通過基因芯片技術(shù)建立IVM前后CCS上基因表達(dá)譜的變化，進(jìn)一步通過細(xì)胞內(nèi)亞定位及定量分析的技術(shù)探討從差異表達(dá)譜篩選的某些與卵母細(xì)胞體外成熟相關(guān)生物標(biāo)記物。材料與方法1小鼠IVM模型建立3周齡雌性ICR小鼠，予腹腔注射孕馬血清PMSG5U只常規(guī)促排卵，獲取未成熟卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體GVCOCS，參照國內(nèi)外文獻(xiàn)建立小鼠IVM平臺。2CCS差異表達(dá)譜分別從GVCOCS和MⅡCOCS中剝?nèi)CS，對應(yīng)于GVCCS組和MⅡCCS組，每組包含3個混合CCS樣品（每個混合樣品含100枚COC）。分別提取總RNA，運(yùn)用基因芯片技術(shù)獲得差異表達(dá)譜。3生物信息學(xué)分析確定差異表達(dá)基因、差異細(xì)胞功能和事件，并選擇某些候選研究基因。4基因芯片結(jié)果驗證根據(jù)芯片結(jié)果中的生物信息學(xué)分析結(jié)果，結(jié)合現(xiàn)有文獻(xiàn)報道，挑選出感興趣的目的基因，運(yùn)用與芯片上樣時同樣的樣品行QPCR水平驗證。5差異基因的生物學(xué)意義在芯片結(jié)果驗證的基礎(chǔ)上，確定一些功能基因。擴(kuò)大樣本量，每組8個樣品（每個樣品含30枚COCS），重新收集樣品，行QPCR驗證。6目的基因的蛋白水平表達(dá)差異分別從GVCOCS和MⅡCOCS中剝?nèi)CS，通過WESTERNBLOT對以上確定的功能基因行蛋白水平的定量研究，免疫熒光方法進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位的研究。7統(tǒng)計方法采用SPSS200統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計數(shù)資料（MⅡ率）統(tǒng)計采用卡方檢驗計量資料（目的基因的蛋白表達(dá)和MRNA表達(dá)水平）以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（MEANS±SD）表示，采用獨(dú)立樣本T檢驗進(jìn)行分析。P＜005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1在本中心成功復(fù)制小鼠IVM模型，獲得GVCOCS和IVM后的MⅡCOCS，其平均成熟率MⅡ％穩(wěn)定在926％。2通過基因芯片，獲得了IVM前后CCS上基因表達(dá)譜變化。按照FC≥30FOLDCHANGE，同時P≤005篩選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行差異表達(dá)基因分析。①M(fèi)Ⅱ?qū)V上調(diào)基因有2615個，主要涉及基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)節(jié)及表皮生長因子受體結(jié)合等功能②MⅡ?qū)V下調(diào)基因有2810個，主要涉及細(xì)胞核內(nèi)相關(guān)生物學(xué)事件。3QPCR驗證芯片結(jié)果，發(fā)現(xiàn)IVM以后CCS上ECM和EFG相關(guān)基因（PTGS2EREGTNFAIP6，EFEMP1）以及線粒體代謝相關(guān)基因（FDX1，AIFM2）表達(dá)上調(diào)了縫隙鏈接及細(xì)胞周期相關(guān)基因GJA1，GJA4CCND2CCNA2CCNB2表達(dá)下調(diào)了。與芯片結(jié)果一致。4從以上目的基因中進(jìn)一步篩選出功能基因（EFEMP1，F(xiàn)DX1，GJA1，CCND2），重新收集樣品進(jìn)行生物學(xué)意義的驗證，與芯片結(jié)果一致。5篩選出4個因子（EFEMP1，F(xiàn)DX1，GJA1，CCND2）進(jìn)行蛋白定量研究，發(fā)現(xiàn)與MRNA水平的變化一致。細(xì)胞內(nèi)定位研究發(fā)現(xiàn)①EFEMP1主要定位CCS的胞質(zhì)中，在GVCOC中僅表達(dá)在表層CCS上，內(nèi)層CCS不表達(dá)，且在GV期卵子中不表達(dá)經(jīng)過IVM后，EFEMP1表達(dá)在全層CCS上，且MⅡ其卵母細(xì)胞中高表達(dá)②FDX1也主要定位于CCS胞質(zhì)中，在GVCOC中內(nèi)外層CCS均有FDX1的表達(dá)，且GV期卵母細(xì)胞中也有表達(dá)IVM后表達(dá)陽性的CCS數(shù)目明顯增多③GJA1只表達(dá)在CCS胞質(zhì)中，不表達(dá)與胞核中，在GVCOC中，GJA1在各層CCS中均有表達(dá)IVM后陽性細(xì)胞數(shù)目明顯減少。且在GV期和MⅡ期卵母細(xì)胞內(nèi)，GJA1均不表達(dá)④CCND2主要表達(dá)在CCS的胞核中，胞質(zhì)中少量表達(dá)，在GVCOC中，其主要表達(dá)在內(nèi)層CCS中IVM以后這種表達(dá)極性消失，且熒光強(qiáng)度明顯減弱。結(jié)論1研究生期間掌握了小鼠卵母細(xì)胞顯微鏡下操作技術(shù)，在本中心成功復(fù)制IVM模型并應(yīng)用于課題研究中。2IVM過程中，隨著卵母細(xì)胞成熟，CCS上的基因表達(dá)譜發(fā)生一系列變化。IVM以后CCS上金屬蛋白酶調(diào)節(jié)及表皮生長因子受體結(jié)合相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)了，細(xì)胞核相關(guān)的基因表達(dá)下調(diào)了?；蛐酒Y(jié)果利用QPCR技術(shù)進(jìn)行了驗證。3通過擴(kuò)大樣本量驗證，表明功能基因（EFEMP1，F(xiàn)DX1，GJA1，CCND2）在IVM過程中差異表達(dá)，具有重要的生物學(xué)意義。4IVM過程中，隨之卵母細(xì)胞成熟的進(jìn)程CCS一些上調(diào)的因子EFEMP1和FDX1和下調(diào)因子（GJA1和CCND2）可望作為卵母細(xì)胞成熟及質(zhì)量相關(guān)的生物標(biāo)記物，也可能發(fā)展成為改進(jìn)IVM培養(yǎng)液的靶因子。

簡介：碩士學(xué)位論文MIR155抑制物對骨肉瘤細(xì)胞系抑制物對骨肉瘤細(xì)胞系SOSP9607細(xì)胞生物學(xué)特性的影響細(xì)胞生物學(xué)特性的影響張開亮培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位一級學(xué)科專業(yè)類臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（骨外）研究方向骨腫瘤基礎(chǔ)研究指導(dǎo)教師馬保安教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位唐都醫(yī)院骨科二O一四年五月第四軍醫(yī)大學(xué)THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號R7337UDC616006密級公開第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略語表1中文摘要2英文摘要5前言8文獻(xiàn)回顧101MIRNA102骨肉瘤133MIRNA15518正文25實驗一MIR155抑制物對SOSP9607細(xì)胞增殖能力的影響251材料252方法263結(jié)果284討論30實驗二MIR155抑制物對SOSP9607細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響341材料342方法353結(jié)果374討論38實驗三MIR155抑制物對SOSP9607細(xì)胞周期的影響421材料422方法433結(jié)果44

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文ANNEXINⅡ基因在肺癌組織中的表達(dá)分析及其反義表達(dá)載體對肺癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究姓名賈晉偉申請學(xué)位級別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（呼吸系?。┲笇?dǎo)教師錢桂生20030501第三軍醫(yī)大學(xué)|尊士學(xué)位論文SDSSEC強(qiáng)SSODIUMDODECYLSULFATESECONDTRISHYDROXYMETHYLAMINOMETNANE2十二烷基磺酸鈉秒三羥甲基氨基甲烷

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文低劑量脈沖超聲波對培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)研究姓名孔璐申請學(xué)位級別碩士專業(yè)勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生指導(dǎo)教師趙進(jìn)順20030610二、低劑最脈沖超聲波刺激體外培養(yǎng)細(xì)胞凋亡情況的研究1最裁|雖球掙愁聲渡翊激對久瘦款裁紓維綴麓鞲亡麓誘導(dǎo)锃鞠※JHANNEXINV法測定低卉U量脈沖超聲波刺激對人皮膚成纖維細(xì)胞凋亡的漪導(dǎo)作川。研究結(jié)果顯示，低劑餐脈沖超聲波劃激人皮膚成纖維細(xì)胞超過～定時間厲，少量細(xì)腿開始啦現(xiàn)凋亡，且隨著裁激時滴的逶～步延長，蠲亡細(xì)髓激逐漸增多，萁髑亡；擎度也逐灝蕊重。其中麓聲波稍激時間為60MIN、80MIN和100MIN劑齬婀的細(xì)胞凋亡數(shù)與對JC組比較萍昴有統(tǒng)計學(xué)意義O001。2低劑量脈沖超聲波荊激對A胰腺癌細(xì)胞凋I的誘導(dǎo)作用采H1ANNEXINV法測定低劑量脈沖超聲波刺激列人胰腺癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。實驗綹糶顯示，繇粼鼙辣猙超聲波蟋激瓣癬繅貔超遮一定瓣閏螽，糖癌繃魅開始瀣璦凝亡，量蓬羲刺激對問的繼續(xù)延長，細(xì)胞凋亡數(shù)逐漸增多。其中超聲波刺激時間為60MIN、80MIN和100MIN制鼙組的細(xì)胞塌亡數(shù)與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義DO01。慧之，在較短時間靜捌激F，該種超毒液能；J怒綱瑰滔魏、綱齄數(shù)蘩及緇穩(wěn)所分泌瀚活性奔質(zhì)等鼴蔣性增加，以及細(xì)胞內(nèi)蛋向磷酸化水平顯著性升高，避而促進(jìn)細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)的增殖。薅另～方囂，一里超聲波刺激超過60MIN辱，則又％逐漸G越凋亡纓黧數(shù)量的域拍，麗慰此凋亡效應(yīng)在正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的差異不具顯著性。進(jìn)而提示我們設(shè)想，能否通過超聲波的局部定位來刺激腫瘤細(xì)胞，化其不利的生物學(xué)效應(yīng)為有利網(wǎng)素，從而達(dá)到腫瘤治療的效果。敞此，只要控裁妻亍捌滋祭紛，低潮量弦瀋趣聲波戇瓣令不羈躲綢癱生勃學(xué)鼓應(yīng)罄霹為天炎薪蠲。關(guān)鍵詞低荊餐脈沖超聲波；生物學(xué)效應(yīng)；細(xì)胞增髓；細(xì)胞捅亡STUDYOFTHEBIOLOGICALEFFECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDOILTHECULTUREDCELLABSTRACTKONGLUTUTORZHAOJINSHUNPROFESSORTHESCHOOLOFPUBLICHEALTH，SOUTHEASTUNIVERSITYO秘EET嬸EULTRASOUNDISAPHYSICALFACTORITISUSED濂MANYFIELDS，F(xiàn)OREXAMPLEINDASTF韓MEDICALSCIENCEANDDAILYLIFEETCTHEAIMOFTHISSTUDYISTOSTUDYTHEBIOLOGICALERIECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDFREQUENCY15MHZPULSEDBY1KHZ，SIGNALBUMTWIDTH200MICROSECONDS，INTENSITY30MW／CM‘ONTHECULTUREDCELLINVITROMETHODSFIBROBLASTSFROMHUMANSKINAREPRIMARILYCULTUREDANDSABEULTUREDMIAPACA一2CELLSTHEHUMANPANCREATICADENOCARCINOMACELLAREKINDLYPROVIDEDBVPD盼ROLANDSCHMID，DEPARTMENTOFLMEMALMEDIEINEL，UNIVERSITYOFULMCELLSAREHARVESTEDFROMTHEFLASKSANDSUSPENDEDWITHAFINALCONCENTRATIONOF擴(kuò)CELLS訊L1INMEDIUMCONTAININGLO％HEATINACTIVATEDFETALCALFSEMMFCSPENICILLIN100U／MLLANDSTREPTOMYCIN≤50G婦￡，THELLSEEDEDIN6一WELLCELJCULTUREPLATE≤2ML／WELLAT18SL，THEYARECULTUREDAT37℃INAHUMIDIFIEDATMOSPHEREWITH5％C02ATIER48HOURSINCUBATION，LOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDISAPPLIEDTOSTIMULATETHECELLSWHICHARECULTUREDINDM囂MWITHDIFIERENCECONCENTRATIONFCSFORTHECOMMITTEDTIME。CELTSASCONTRASTGROUPARESHAMTREATEDTHELLTHEBIOLOGICALEFFECTSOFLOWINTENSITYPULSEDULTRASOUNDONTHE11

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文人免疫缺陷病毒調(diào)升基因AEG1促腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)作用與分子機(jī)制研究姓名楊樂申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師黎孟楓20090525中I山大學(xué)碩士論文人免疫缺陷病毒調(diào)升基因AEG1促腫瘤細(xì)胞增羅II的生物學(xué)作用與分子機(jī)制研究腺癌的關(guān)鍵。目前的研究表明乳腺癌的發(fā)生受基因與環(huán)境兩大因素的影響，但對其發(fā)病的具體的分子機(jī)制卻知之甚少，乳腺癌的預(yù)后的判斷仍然依賴于一些常規(guī)的臨床與影像學(xué)指標(biāo)，例如，腫瘤的大小，病理分級，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。至今為止，已有許多基因被認(rèn)為足與乳腺癌轉(zhuǎn)移和或預(yù)后有關(guān)的標(biāo)記物，但仍缺乏獨(dú)立、有效的乳腺癌診斷指標(biāo)和與預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)記物。因此，闡述乳腺癌發(fā)牛、發(fā)展的分子機(jī)制，尋找特異性診斷和治療靶標(biāo)是目前乳腺癌基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)。本文旨在研究AEGL基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖的影響，并探討其在入乳腺癌細(xì)胞中的作用機(jī)理。首先，本文做免疫組化檢測乳腺癌組織中AEG一1與KI67的臨床相關(guān)性。隨后建立了兩株穩(wěn)定外源性高表達(dá)AEGL和兩株下調(diào)細(xì)胞內(nèi)源性AEG一1表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系，用于檢測AEG1與乳腺癌細(xì)胞增殖的相關(guān)性。本文的數(shù)據(jù)顯示，上調(diào)AEG1的表達(dá)能夠明顯促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和其非錨定依賴性牛長的能力，反之下調(diào)內(nèi)源性AEG1的表達(dá)則可明顯抑制乳腺癌細(xì)胞的生長。因此，AEG1可能足促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞異常增生的重要分子。通過對AEG1促增殖機(jī)制的研究，本文發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞增殖加快與細(xì)胞周期抑制物P27KIPL5陽P21CI01P有關(guān)，進(jìn)而證明了AEG1是通過P13K／AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下調(diào)FOXOL的表達(dá)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖的。本文的發(fā)現(xiàn)首次闡述了AEGL促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，提示AEGL基因在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)腱過程中起重要作用，可能成為有價值的腫瘤分子治療的潛在靶點(diǎn)。關(guān)鍵詞AEG1乳腺癌增殖

簡介：中山大學(xué)博士后學(xué)位論文肝細(xì)胞生長因子在牙髓中的表達(dá)及生物學(xué)作用姓名葉玲申請學(xué)位級別博士后專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師凌均棨20051101中山大學(xué)博士后研究工作報告中文摘要肝細(xì)胞生長因子HEPATOCYTEGROWTHFACTORHGF是一種間充質(zhì)來源的多效性細(xì)胞因子，通過與其跨膜受體CMET結(jié)合對多種組織器官的生長發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織修復(fù)再生具有重要的生理調(diào)節(jié)功能。HGF已被發(fā)現(xiàn)對肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等具有顯著的促細(xì)胞分裂、運(yùn)動作用，此外還在血管生成、上皮間充質(zhì)細(xì)胞相互間作用中有重要的地位。牙髓組織作為一種外胚間充質(zhì)來源的組織，其損傷的修復(fù)源于牙髓組織中的間充質(zhì)細(xì)胞的分化能力和組織的修復(fù)能力，本課題首次對肝細(xì)胞生長因子在牙髓修復(fù)中的作用進(jìn)行研究，初步闡明了HGF在牙髓修復(fù)中的作用機(jī)制。本研究采用了免疫組織化學(xué)方法和分子生物學(xué)方法，利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對肝細(xì)胞生長因子及其受體在正常牙髓組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究采用動物模型研究HGF在修復(fù)性牙本質(zhì)形成過程中的表達(dá)情況；此外還對HGF對體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞的生物學(xué)作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究，探討其對牙髓細(xì)胞生長、分化的影響，并對ERK／MAPK信號通路在其中的作用進(jìn)行了初步研究。本實驗擬通過系統(tǒng)的實驗研究，對肝細(xì)胞生長因子在牙髓修復(fù)中的作用機(jī)制進(jìn)行研究，也為牙髓病變的早期修復(fù)尋找新的生物學(xué)途徑。本實驗共分為四個部分第一部分肝細(xì)胞生長因子在牙髓中的表達(dá)。采用免疫組化、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)方法研究肝細(xì)胞生長因子及其受體在正常牙髓組織、牙髓細(xì)胞中的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞可檢測出HGFMRNA及CMETMRNA的表達(dá)，HGF在體外培養(yǎng)的牙髓細(xì)胞中胞漿呈陽性表達(dá)，胞核陰性表達(dá)；在健康離體牙的牙髓組織中成牙本質(zhì)細(xì)胞層和血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿均呈弱陽性表達(dá)。第二部分肝細(xì)胞生長因子在大鼠修復(fù)性牙本質(zhì)中的表達(dá)。采用動物模型和免疫組化，研究肝細(xì)胞生長因子在大鼠牙髓修復(fù)過程中的表達(dá)。實驗結(jié)果表明修復(fù)性牙本質(zhì)形初期3D，肝細(xì)胞生長因子在大鼠牙髓細(xì)胞及成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，積分光密度值為8995士0943；損傷后15D表達(dá)呈陽性5624土0951，但逐漸減弱，30D4073士0127和正常對照組大鼠牙髓細(xì)胞及成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿中呈弱陽性表達(dá)427910348。說明HGF參與了牙髓損傷早期修復(fù)及修復(fù)性牙本質(zhì)形成的過程。2

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2012級碩士學(xué)位論文低氧對人牙髓干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響THEEFFECTOFHYPOXIAONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANDENTALPULPSTEMCELLS課題來源國家自然科學(xué)基金81371137學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院劉慶娜吳補(bǔ)領(lǐng)教授口腔臨床醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院答辯委員會主席凌均柴教授答辯委員會委員黃世光教授林正梅教授韋曦教授段建民教授2015年5月14日廣州摘要復(fù)中的作用及牙組織再生的研究提供重要理論參考。目前有關(guān)低氧環(huán)境下人牙髓干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究較少，且現(xiàn)有研究結(jié)果存在較多差異。本實驗旨在研究探討低氧對人牙髓干細(xì)胞的增殖、遷移、成牙本質(zhì)向分化及促血管生成特性的影響，為進(jìn)一步闡明人牙髓干細(xì)胞在牙髓損傷修復(fù)及再生機(jī)制中的作用提供重要依據(jù)。本論文主要包括以下四章內(nèi)容第一章人牙髓干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定本章實驗利用組織塊酶消化法分離培養(yǎng)人牙髓干細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面分子標(biāo)記物；克隆形成實驗檢測細(xì)胞克隆形成能力；多向誘導(dǎo)實驗檢測細(xì)胞多向分化潛能。第二章低氧對人牙髓干細(xì)胞增殖、遷移的影響實驗分別采用低氧3％02和常氧21％02培養(yǎng)人牙髓干細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)檢測低氧培養(yǎng)對人牙髓干細(xì)胞表面分子標(biāo)記物、細(xì)胞周期分布及凋亡的影響；MTT法檢測低氧對人牙髓干細(xì)胞增殖能力的影響；TRANSWELL實驗檢測低氧對人牙髓干細(xì)胞遷移能力的影響。第三章低氧對人牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化的影響QRZPCR檢測低氧組和常氧組人牙髓干細(xì)胞礦化誘導(dǎo)7D、14D、21D后，成牙本質(zhì)向分化相關(guān)基因ALP、DMP1、DSPPMRNA的表達(dá)情況。第四章低氧對人牙髓干細(xì)胞表達(dá)成血管相關(guān)因子的影響QRTPCR檢測對比低氧組和常氧組人牙髓干細(xì)胞成血管相關(guān)因子VEGF、SDF1MRNA的表達(dá)情況，并分別收集低氧組和常氧組人牙髓干細(xì)胞24H、48H、72H的培養(yǎng)上清作ELISA檢測，比較VEGF在蛋白水平分泌量的變化。Ⅱ