簡介：後旦大學(xué)碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位PPAR丫蛋白的體液表達(dá)及其對母胎界面滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜基質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響院系專業(yè)姓名指導(dǎo)老師完成日期婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)劉雙萍程海東教授2013年4月30日目錄英文縮略詞1中文摘要2英文摘要6第一部分12第二部分17第三部分21結(jié)侖35參考文獻(xiàn)36附錄I綜述39附錄II發(fā)表綜述44附錄III發(fā)表病例報告52附錄IV致謝54

簡介：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文ⅢΒ微管蛋白和多藥耐藥基因1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)特性的相關(guān)性研究姓名胡立紅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)呼吸系病指導(dǎo)教師周建英20090401浙江大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要1116．TUBULIN和MDRL表達(dá)陽性的患者其3年生存率分別為37％和32％，經(jīng)分析差異有顯著性P0．05。結(jié)論IIIGTUBULIN和MDRL在肺癌的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮著一定的作用，可作為判斷肺癌預(yù)后的重要指標(biāo)．關(guān)鍵詞III型D微管蛋白MDRL蛋白非小細(xì)胞肺癌免疫組化

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文ERΒ對乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響及肺高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系的建立姓名侯意楓申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師沈鎮(zhèn)宙20040427ERB對人乳腺癌復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要第二部分自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移人乳腺癌細(xì)胞系的建立目的建立具有自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移特性的人乳腺癌細(xì)胞系，為乳腺癌轉(zhuǎn)移的相炎研究提供一個良好的實驗平臺。方法采用人乳腺癌細(xì)胞株MDAMB435構(gòu)建裸鼠原位移植瘤模型，連續(xù)進(jìn)行6輪肺轉(zhuǎn)移篩選，取其肺轉(zhuǎn)移灶建立具有自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移特性的人乳腺癌細(xì)胞系MDAMB一435HM并運(yùn)用核型分析、MT7R、流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)、TRANSWELL、R，L、一PCR及基因芯片等方法比較該細(xì)胞系和源細(xì)胞的差異。結(jié)果MDAMB一435HM細(xì)胞呈圓梭型、亞三倍體核型、主流染色體數(shù)目為50～52條細(xì)胞倍增時間縮短至“小時，較源細(xì)胞增殖速度顯著加快伊一玻∞允細(xì)胞的侵襲能力提高約2倍滬口OO；S期細(xì)胞所占的比例為5546％，較源細(xì)胞4034％顯著增高伊N05；兩株細(xì)胞的成瘤率均為100％，但MDAMB一435細(xì)胞的4周肺轉(zhuǎn)移率為40％，而MDAMB一435HM細(xì)胞為100％伊N016周時，MDAMB一435HM細(xì)胞和源細(xì)胞的中位肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)分別為37個／肺和6個／肺；RTPCR檢測顯示，MDAMB～435IIM細(xì)胞的MMP一2、7MRNA表達(dá)水平分別提高32倍和21倍伊口卯基因芯片檢測顯示，有60條基因的表達(dá)發(fā)生改變。結(jié)論自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的良好工具。關(guān)鍵詞乳腺腫瘤動物模型轉(zhuǎn)移基質(zhì)金屬蛋白酶基因芯片

簡介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是一種具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞，是當(dāng)前干細(xì)胞研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在組織器官缺損性疾病、退行性疾病、自身免疫性疾病、遺傳缺陷等疾病的治療中有著巨大的臨床應(yīng)用前景。隨著MSCS臨床應(yīng)用的進(jìn)程，對MSCS生物學(xué)特性的研究和認(rèn)識提出了更高的要求。一直以來，骨髓MSCS被認(rèn)為是骨髓單個核細(xì)胞中具有貼壁的特性、并可在體外培養(yǎng)增殖和誘導(dǎo)多向分化的非造血系統(tǒng)的干細(xì)胞。值得注意的是，迄今為止MSCS尚未發(fā)現(xiàn)有特異性的表面分子。目前國際公認(rèn)的MSCS表型特征為細(xì)胞表面CD73、CD90、CD105等抗原呈陽性，而CD14、CD19、CD34、CD45、HLADR等造血譜系分子表達(dá)陰性。由于缺乏鑒定細(xì)胞的特異性標(biāo)志，導(dǎo)致對MSCS的生物學(xué)特征缺乏嚴(yán)格統(tǒng)一的定義，制約了對MSCS生物學(xué)特性的研究和認(rèn)識，使得MSCS的檢測、分離純化以及應(yīng)用均面臨著巨大的難題。第1章人間充質(zhì)干細(xì)胞特異性單克隆抗體及其抗原特征的鑒定為發(fā)現(xiàn)新的MSCS特異的表面標(biāo)志，以期深入研究MSCS的生物學(xué)特性，本研究以培養(yǎng)的人骨髓MSCS為免疫原免疫BALBC小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)研究制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的人骨髓MSCS特異性單克隆抗體ZUB1，并對ZUB1單克隆抗體及其識別抗原的生物學(xué)特性進(jìn)行了深入研究。通過對抗體種屬和組織細(xì)胞特異性鑒定，證實ZUB1單克隆抗體針對人MSCS有高度的特異性和敏感性，ZUB1可識別骨髓、脂肪組織、臍帶組織和臍帶血來源的MSCS，與大鼠、小鼠和兔骨髓MSCS均無交叉反應(yīng)。WESTERNBLOT結(jié)果顯示，ZUB1單克隆抗體識別一種分子量約為250KD的抗原分子，該種抗原在13種人血液系統(tǒng)惡性疾病細(xì)胞株和10種人實體組織細(xì)胞株均無表達(dá)。骨髓、脂肪組織、臍帶組織和臍帶血來源的MSCS在傳代擴(kuò)增過程中形態(tài)基本一致，流式細(xì)胞術(shù)檢測傳代擴(kuò)增細(xì)胞表達(dá)ZUB1抗原的陽性率分別為9758±068％、8950±397％、9663±123％、8723±407％，此外CD29、CD44、CD105、CD166、CD146陽性標(biāo)記出現(xiàn)單峰，CD3、CD14、CD19、CD34、CD117、CD133、CD45、CD235A、HLADR均表達(dá)陰性，傳代細(xì)胞ZUB1抗原和其他各表面抗原表達(dá)均無顯著性差異。當(dāng)誘導(dǎo)骨髓MSCS向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞定向分化時，流式細(xì)胞檢測顯示ZUB1抗原表達(dá)相應(yīng)減弱，提示ZUB1抗原可作為MSCS干細(xì)胞特征的標(biāo)志分子，且可能參與了MSCS分化的細(xì)胞活動。為進(jìn)一步鑒定ZUB1單克隆抗體識別的抗原表位，我們通過WESTERNBLOT實驗證實ZUB1單克隆抗體識別的抗原分子量約為250KD，應(yīng)用ZUB1單克隆抗體通過免疫沉淀的方法從人骨髓MSCS細(xì)胞裂解液中獲取與ZUB1抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，ZUB1抗體蛋白復(fù)合物經(jīng)SDSPAGE電泳分離后切取蛋白質(zhì)條帶，質(zhì)譜分析提示ZUB1單克隆抗體識別的分子量為250KD的抗原肽段為非肌性肌球蛋白9重鏈NONMUSCLEMYOSINHEAVYCHAIN9，NMMHCⅡA。生物信息學(xué)分析提示該類細(xì)胞骨架蛋白的同型異構(gòu)體在不同組織和干細(xì)胞的不同分化階段有不同的異構(gòu)體的表達(dá)，MSCS特異的形態(tài)特征和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)與其多向分化潛能是相適應(yīng)的該研究進(jìn)一步豐富了對骨髓MSCS特異性分子特征的認(rèn)識，也為進(jìn)一步研究MSCS分化等細(xì)胞活動提供了一個重要的線索第2章ZUB1抗原陽性骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞亞群的鑒定和生物學(xué)特性的研究隨著對體外培養(yǎng)MSCS的生物學(xué)特性認(rèn)識的深入，研究者利用不同的表面分子分離骨髓單個核細(xì)胞以期進(jìn)一步研究和鑒定骨髓原始MSCS及其不同亞群的生物學(xué)特性。利用ZUB1單克隆抗體，我們建立了ZUB1骨髓MSCS的分離培養(yǎng)體系，并深入研究了ZUB1骨髓MSCS亞群的生物學(xué)特性。應(yīng)用ZUB1單克隆抗體通過免疫磁珠分選骨髓單個核細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測分選后細(xì)胞純度為6152±669％，分選后獲得的ZUB1骨髓單個核細(xì)胞體積較小、核質(zhì)比大，符合干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。ZUB1骨髓單個核細(xì)胞培養(yǎng)3天后細(xì)胞貼壁呈梭形，5天后細(xì)胞擴(kuò)增明顯，梭形貼壁細(xì)胞增殖呈集落樣分布，培養(yǎng)15天左右貼壁細(xì)胞達(dá)80％～90％匯合，細(xì)胞形態(tài)均一，且具有很好的增殖活性，細(xì)胞擴(kuò)增至第8代細(xì)胞生長曲線無明顯差異。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示ZUB1骨髓單個核細(xì)胞貼壁培養(yǎng)后具有MSCS的表型特性，且可誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和神經(jīng)元樣細(xì)胞。因此，ZUB1單克隆抗體可用于分離富集ZUB1骨髓MSCS亞群。一直以來MSCS缺乏特異性分子標(biāo)志，目前尚無有效的指標(biāo)可以鑒定骨髓中不同亞群的原始MSCS的含量。CFUF可用于評估骨髓單個核細(xì)胞中MSCS集落的形成情況，也是目前用于評估骨髓中原始MSCS的數(shù)量的主要指標(biāo)之一。將未分選的骨髓單個核細(xì)胞、及磁珠分選后ZUB1和ZUB1髓單個核細(xì)胞按2104CM2、1103CM2、2104CM2的細(xì)胞密度分別接種培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)15D，ZUB1骨髓單個核細(xì)胞形成CFUF的數(shù)量和直徑明顯多于未分選的骨髓單個核細(xì)胞，而ZUB1骨髓單個核細(xì)胞未見集落形成按照每105單個核細(xì)胞計算ZUB1單克隆抗體分選骨髓單個核細(xì)胞的CFUF富集指數(shù)ENRICHMENTFACT為19309±3281，且ZUB1骨髓MSCS增殖較快。為進(jìn)一步分析ZUB1骨髓MSCS的表型特征，對MSCS公認(rèn)的一系列表面分子檢測結(jié)果顯示該類細(xì)胞的表型一致CD29、CD105、CD166、CD146表達(dá)陽性，而CD3、CD14、CD19、CD33、CD235A、HLADR、CD45、CD34、CD133、CD117為陰性。由此，我們認(rèn)為ZUB1單克隆抗體可有效地富集骨髓單個核細(xì)胞中的MSCS，ZUB1抗原可以作為研究骨髓原始MSCS的分子標(biāo)志；ZUB1骨髓MSCS體外培養(yǎng)增殖較快，并可多向分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和神經(jīng)元樣細(xì)胞。本研究制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗人骨髓MSCS特異性單克隆抗體，并證實ZUB1抗原針對人MSCS有高度的特異性，可用于人MSCS的檢測、鑒定以及富集骨髓中原始MSCS。ZUB1抗原為一種在MSCS中特異的細(xì)胞骨架蛋白，參與了MSCS定向分化的生命活動。骨髓細(xì)胞中ZUB1骨髓單個核細(xì)胞作為一個新的骨髓MSCS亞群，豐富了對MSCS生物學(xué)特性的認(rèn)識，并為MSCS的研究帶來新契機(jī)。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文造血干細(xì)胞體內(nèi)衰老模型的構(gòu)建及相關(guān)生物學(xué)研究姓名楊斌申請學(xué)位級別碩士專業(yè)人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師王亞平20100501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文在為研究HSC衰老機(jī)理以及延緩其衰老的途徑提供理論與實驗依據(jù)。方法1免疫磁性分選法MACS分離、純化雄性C57小鼠SCA1HSC，流式細(xì)胞術(shù)FCM鑒定分選細(xì)胞純度，免疫熒光檢測分選HSCSEA1抗原的表達(dá)，臺盼藍(lán)拒染法檢測分選SCA。1HSC的活性。2用雄性供體HSC連續(xù)尾靜脈移植給雌性受體鼠，建立小鼠HSC復(fù)制性衰老體內(nèi)模型；經(jīng)PCR分析Y染色體基因，鑒定受體鼠造血細(xì)胞是否來源于雄性供體；觀察移植后受體鼠脾結(jié)節(jié)CFUS形成數(shù)量、測定脾臟指數(shù)，胸腺指數(shù)，觀察移植HSC后受體鼠外周血血象指標(biāo)WBC，RBC以及PLT的恢復(fù)，以觀察受體鼠造血功能重建情況。3采用造血祖細(xì)胞混合性集落CFUMIX培養(yǎng)、細(xì)胞周期測定和衰老相關(guān)P半乳糖苷酶SA一13染色，觀察連續(xù)移植所致衰老HSC自我更新和多向分化能力的生物學(xué)特點(diǎn)。結(jié)果1小鼠SEA1IISC分離純化及鑒定流式細(xì)胞術(shù)檢測MACS前骨髓單個核細(xì)胞MNCS中SCA1HSC百分比僅為17％；MACS分離純化后SEA1HSC純度可達(dá)872％以上。免疫熒光觀察顯示，分選前MNCS中僅有極少數(shù)細(xì)胞表達(dá)SCA1抗原，MACS分離純化后標(biāo)記的細(xì)胞中見大多數(shù)細(xì)胞表達(dá)SCA1抗原。臺盼藍(lán)拒染法檢測分選的SCA1HSC活性為96％99％。提示分選的SCA1細(xì)胞有較高純度和活性。2供體HSC連續(xù)移植后受體鼠脾結(jié)節(jié)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及外周血4

簡介：I781200糾博士學(xué)位論文2004屆人胎盤源間充質(zhì)樣千細(xì)胞生物學(xué)特性及移植治療腦出血的實驗研究EXPERIMENTALSTUDIESOFBIOLOGICALCHARACTEROFHUMANPLACENTADERIVEDMESENCHYMALLIKESTEMCELLSANDTRANSPLANTATIONININTRACEREBRALHEMORRHAGE研究生姓名指導(dǎo)教師姓名申請學(xué)位級別專業(yè)名稱研究方向論文提交時間藍(lán)登張學(xué)光匡堂監(jiān)內(nèi)科學(xué)王細(xì)胞廑壓薹趟2004年11月人胎盤問充質(zhì)樣干細(xì)胞生物學(xué)特性及移植治療腦出血的實驗研究中文摘要而用體外微孔隔離室穿越實驗觀察其對NPCS遷移的影響。結(jié)果1由胎盤分離培養(yǎng)得到的細(xì)胞具有BMSCS相似的形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞形態(tài)呈類似成纖維細(xì)胞，免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞儀檢測顯示該群細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44和CDL05SH2分子，但不表達(dá)CDILB、CD34、CD45、CDL9，CDL06、HLADR、VWF、CDLL7等表面抗原分子，免疫細(xì)胞化學(xué)顯示HPMSCS表達(dá)ASMA、I型和III型膠原，不表達(dá)MYSM；2HPMSCS表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志巢蛋白NESTIN，并可誘導(dǎo)表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志抗原主要微管相關(guān)蛋白2MAJORMICROTUBULEASSOCIATEDPROTEIN2，MAP2、神經(jīng)元特異性烯醇化酶NEURONSPECIFICENOLASE，NSE、神經(jīng)微絲NEUROFILAMENT，NF、星型膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志抗原膠質(zhì)纖維酸性蛋白GLIALFIBRILAMENTACIDICPROTEIN，GFAP和少突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志GALC等；3進(jìn)一步的移植實驗發(fā)現(xiàn)，HPMSCS可跨越血腦屏障，并遷移到損傷側(cè)病灶周圍；同時EBST和BEDERSON評分結(jié)果提示，在移植后5天、14天，對側(cè)腦移植組、同側(cè)腦移植組和同側(cè)頸總動脈移植組明顯優(yōu)于自然恢復(fù)組；且28天時未見成瘤現(xiàn)象4／IPMSCS與HBMSCS相似，不表達(dá)一系列免疫分子HLADR、CD40、CD40L、CD28、CDS0和CD86。首次證實HPMSCS表達(dá)PDL1這一負(fù)性調(diào)節(jié)的共刺激分子，其與T淋巴細(xì)胞體外共培養(yǎng)，無明顯的促T細(xì)胞增殖反應(yīng)，提示其具有低免疫源性的特點(diǎn)；5HPMSCS可分泌高水平的SDF一1A，并可在體外趨化培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞；TNFATUMOURNECROSISFACTORA和GPL30信號均可上調(diào)NPC上功能性CXCR4的表達(dá)，從而增強(qiáng)SDFLD對表達(dá)CXCR4的NPCS的趨化能力。結(jié)論人胎盤源間充質(zhì)樣干細(xì)胞具有來源豐富、方便、免疫源性低、可塑性好和擴(kuò)增能力強(qiáng)等特性，并能跨越血腦屏障并向病灶處定向遷移且未見成瘤現(xiàn)象，它能分泌SDF一1D并趨化NPCS，具備臨床應(yīng)用的潛在價值。移植入腦出血模型實驗結(jié)果表明其可促進(jìn)動物的神經(jīng)功能缺損的修復(fù)。鑒此，HPMSCS符合移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病對移植種子細(xì)胞的要求，有望成為I艋床治療神經(jīng)系統(tǒng)病變的新的組織干細(xì)胞來源。關(guān)鍵詞胎盤問充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)趨化SDFLQCXCR4GPL30信號移植PDL一1研究生薛群指導(dǎo)教師張學(xué)光教授IL

簡介：該實驗的目的旨在通過對HS的成纖維細(xì)胞中SP的檢測以及觀察SP對其增殖、膠原代謝和形態(tài)學(xué)的影響探討SP對HS中成纖維細(xì)胞的作用和在HS形成中的作用機(jī)制為HS的防治拓展新的領(lǐng)域為此該研究應(yīng)用免疫組化法對HS成纖維細(xì)胞中的SP進(jìn)行檢測并與正常皮膚做比較用細(xì)胞計數(shù)及MTT法研究SP對HS成纖維細(xì)胞增殖及活力的影響用H脯氨酸參入及SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測SP對HS成纖維細(xì)胞膠原代謝的影響并用光鏡和電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)的對比研究結(jié)論1HS成纖維細(xì)胞中SP的表達(dá)較正常皮膚顯著增加提示SP參與了HS的形成過程2SP可以促進(jìn)HS成纖維細(xì)胞增殖和活力增加提示SP可直接作用成纖維細(xì)胞通過增強(qiáng)其數(shù)量和功能來促進(jìn)HS的形成3SP增加H脯氨酸攝入降低膠原酶活性提示SP通過促進(jìn)成纖維細(xì)胞的膠原合成增加和降低膠原酶活性抑制膠原降解兩條途徑破壞膠原代謝平衡導(dǎo)致HS的形成4P物質(zhì)可以直接影響HS成纖維細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)從而引起細(xì)胞功能的改變

簡介：關(guān)節(jié)軟骨損傷是關(guān)節(jié)外科常見的疾病軟骨由于其自身的解剖特點(diǎn)，損傷后很難自愈，這也是導(dǎo)致關(guān)節(jié)疾病和關(guān)節(jié)不穩(wěn)的主要原因。目前，關(guān)節(jié)鏡下盥洗術(shù)、微骨折技術(shù)、馬賽克移植術(shù)等治療方法遠(yuǎn)期效果均不滿意，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的退變和骨性關(guān)節(jié)炎。采用自體軟骨細(xì)胞移植AUTOLOGOUSCHONDROCYTEIMPLANTATION，ACI能夠?qū)崿F(xiàn)透明軟骨或透明樣軟骨修復(fù)，并取得較好的臨床療效。但ACI的缺點(diǎn)是供區(qū)出現(xiàn)新的缺損，需要二次手術(shù)，增加患者的痛苦。采用干細(xì)胞移植治療軟骨缺損是一個新興的治療手段，并認(rèn)為間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是最有希望的干細(xì)胞。MSCS是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的一類多能干細(xì)胞。目前，MSCS主要來源于骨髓，但獲得骨髓時造成患者的痛苦，且骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWSTROMALCELLS，BMSCS隨著年齡增長其細(xì)胞數(shù)量和擴(kuò)增、分化能力出現(xiàn)明顯下降趨勢，故尋找一種能替代BMSCS，并可彌補(bǔ)其缺陷干細(xì)胞來源，已越來越受到各國學(xué)者的關(guān)注。胚胎干細(xì)胞EMBRYONICSTEMCELLS，ESCS尚存在定向分化和純化的技術(shù)障礙，且面臨眾多倫理、法律方面的問題，也有移植后形成畸胎瘤的報道，應(yīng)用受到一定限制。臍帶屬于胚胎外組織，是胎兒分娩后的廢棄物，組織來源廣泛，無倫理學(xué)限制。臍帶由臍帶外膜、臍動脈、臍靜脈以及血管周圍的黏蛋白樣組織，后者被稱為WHARTON膠。本研究目的為探討臍帶WHARTON膠中干細(xì)胞作為軟骨組織工程種子細(xì)胞的可行性，并從四個方面進(jìn)行闡述。第一部分為人臍帶WHARTON膠中的基質(zhì)成分定性和定量分析的實驗研究；第二部分為人臍帶臍帶WHARTON膠中MSCS的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)性狀的實驗研究；第三部分人臍帶WHARTON膠中MSCS向軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的實驗研究；第四部分為細(xì)胞因子在人臍帶WHARTON膠間質(zhì)干細(xì)胞及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的軟骨細(xì)胞的表達(dá)本研究從組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)和組織化學(xué)、基因水平和蛋白表達(dá)水平探討臍帶WHARTON膠及WHARTON膠中MSCS的生物學(xué)特性和向軟骨誘導(dǎo)的可行性。方法1對臍帶組織進(jìn)行組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色，同時對WHARON膠進(jìn)行葡萄糖胺聚糖GLYCOSAMINOGLYCANS，GAGS和總膠原含量的測定。2從手術(shù)臺取足月正常產(chǎn)健康產(chǎn)婦臍帶組織，去除臍血管和外膜組織，剝離WHARTON膠，采用膠原酶消化法和小組織塊兩種培養(yǎng)方法進(jìn)行原代培養(yǎng)；對不同代的臍帶MSCS進(jìn)行生長曲線、表面標(biāo)志、流式細(xì)胞檢測表面標(biāo)志、成纖維細(xì)胞集落生成單位COLONYFMINGUNITFIBROBLAST，CFUF、生長周期、凍存與復(fù)蘇及逆轉(zhuǎn)錄PCRREVERSETRANIONPOLYMERASECHAINRACTION，RTPCR分析，并進(jìn)行番紅“O”染色、甲苯胺藍(lán)染色以及Ⅱ型膠原免疫組化染色進(jìn)行軟骨特異性標(biāo)志的鑒定。3在DMEM中加入10％FBS，10NGMLTGFΒ1，25NGMLBFGF，107M地塞米松作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基。采用普通誘導(dǎo)培養(yǎng)、密集誘導(dǎo)培養(yǎng)、結(jié)合生物反應(yīng)器技術(shù)體外構(gòu)建無支架軟骨組織。成軟骨細(xì)胞表型通過番紅“O”染色、甲苯胺蘭染色以及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行鑒別。GAGS定量檢測應(yīng)用二甲基亞甲蘭法，Ⅱ型膠原定量檢測通過ELISA法。4分別對人臍帶WHARTON膠MSCS、向軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后的MSCS以及人軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞因子抗體芯片檢測，比較人臍帶WHARTON膠MSCS軟骨誘導(dǎo)前后與正常人軟骨細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)水平，為同種異體移植奠定實驗基礎(chǔ)結(jié)果1人臍帶組織富含膠原和GAGS，HE染色發(fā)現(xiàn)WHARTON膠中含有大量的間質(zhì)細(xì)胞；2采用酶消化法分離可以快速分離WHARTON膠中間質(zhì)細(xì)胞，并迅速貼壁生長；采用組織塊法培養(yǎng)原代培養(yǎng)時間較長。流式細(xì)胞檢測表明這些細(xì)胞表達(dá)CD44、CD105、CD271等MSCS標(biāo)志物；不表達(dá)CD34、CD45等造血等標(biāo)志物；HLAABC陽性表達(dá)，HLADPDQDR陰性表達(dá)。經(jīng)過凍存復(fù)蘇后免疫表型無顯著變化。3未進(jìn)行軟骨誘導(dǎo)的細(xì)胞弱表達(dá)軟骨細(xì)胞標(biāo)志，誘導(dǎo)后GAGS和Ⅱ型膠原定量檢測結(jié)果均顯著高于未誘導(dǎo)細(xì)胞。RTPCR結(jié)果顯示人臍帶WHARTON膠MSCS誘導(dǎo)前后均表達(dá)SOX9、COL2AL人臍帶WHARTON膠MSCS經(jīng)密集誘導(dǎo)培養(yǎng)后迅速結(jié)成膜狀；采用密集誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)合生物反應(yīng)器培養(yǎng)體外可以構(gòu)建大塊無支架組織工程軟骨。4采用細(xì)胞因子芯片技術(shù)對人臍帶WHARTON膠MSCS、誘導(dǎo)后的軟骨細(xì)胞以及正常軟骨細(xì)胞進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，臍帶WHARTON膠干細(xì)胞以及誘導(dǎo)后的軟骨細(xì)胞在軟骨相關(guān)因子表達(dá)水平與軟骨細(xì)胞接近；同時還表達(dá)腫瘤抑制生長因子以及某些神經(jīng)生長因子。結(jié)論1人臍帶WHARTON膠富含膠原和GAGS，具有與軟骨組織相似的細(xì)胞外基質(zhì)；2人臍帶WHARTON膠中MSCS來源廣泛，無倫理學(xué)限制；臍帶MSCS具有間質(zhì)干細(xì)胞的特性，不向造血系分化；3臍帶MSCS具有前軟骨細(xì)胞的特性，有望作為軟骨組織工程的新型的種子細(xì)胞。臍帶MSCS密集誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)合旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可體外構(gòu)建大塊無支架組織工程軟骨組織，有望作為新型體外構(gòu)建軟骨組織的方法。4人臍帶WHARTON膠MSCS以及誘導(dǎo)后的軟骨細(xì)胞具有與軟骨細(xì)胞相同的表達(dá)譜，表明其更為接近軟骨細(xì)胞，是較好的軟骨組織工程的種子細(xì)胞來源。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2007級碩士學(xué)位論文鼻咽癌細(xì)胞系5．8F中SP亞群的檢測及其生物學(xué)功能的分析CHARACTERIZATIONANDFUNCTIONALANALYSESOFTHESIDEPOPULATIONOFTHENASOPHARYNGEALCANCERCELLLINE58F課題來源自選專業(yè)名稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師答辯委員會主席答辯委員會成員病理學(xué)焦鋒姚開泰教授曾木圣教授鐘雪云教授姚開泰教授曾木圣教授羅深秋教授李欣教授論文評閱人顧為望教授陳系古教授黃冰副教授2010年05月12日廣州碩士學(xué)位論文鼻咽癌細(xì)胞系58F中SP亞群的檢測及其生物學(xué)功能分析碩士研究生焦鋒指導(dǎo)教師姚開泰教授摘要背景腫瘤干細(xì)胞學(xué)說認(rèn)為腫瘤組織中存在極少量腫瘤細(xì)胞，具有正常干細(xì)胞相似的特性自我更新的能力和多向分化的潛能，是腫瘤增殖生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源。什么是腫瘤干細(xì)胞目前認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞具有如下幾個特點(diǎn)1腫瘤組織中的極少量腫瘤細(xì)胞，具有強(qiáng)大的致瘤，轉(zhuǎn)移和耐藥能力。2無限的自我更新能力，腫瘤干細(xì)胞能夠產(chǎn)生與上一代完傘相同的子代細(xì)胞。3分化能力，腫瘤干細(xì)胞除了自我更新之外，還能夠產(chǎn)生不同表型的腫瘤細(xì)胞，能夠在體內(nèi)形成新的腫瘤。4具有與非致瘤細(xì)胞NONTUMORIGENICCELLS不同的表面標(biāo)志?，F(xiàn)今，人們已成功的從急性髓性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，乳腺癌，腦腫瘤，非小細(xì)胞肺癌，黑色素瘤，前列腺痛和膀胱癌等多種類型的腫瘤患者組織中分離并培養(yǎng)出各自的腫瘤干細(xì)胞。這證明在腫瘤細(xì)胞群體中確實存在一類極少數(shù)的能使群體擴(kuò)增的腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞現(xiàn)已成為腫瘤研究的熱點(diǎn)。目前，主要依據(jù)腫瘤細(xì)胞表面膜蛋白，粘附分子及受體的差異，通過一些假想的干細(xì)胞表面標(biāo)記，如CDL33、CD44等分離和鑒定腫瘤干細(xì)胞。但是由于大部分的腫瘤尚缺乏特異性的表面標(biāo)記，因此腫瘤干細(xì)胞的分離純化一直是長久以來亟待解決的難題之一。而側(cè)群SIDEPOPULATION，SP細(xì)胞作為一種不通過尋找特異性的表面標(biāo)記，利用熒光染料外排的特性來富集腫瘤干細(xì)胞，作為研究腫瘤干細(xì)胞的方法是一種理想的途徑。SP細(xì)胞是指可將熒光染料HOECHST33342泵出細(xì)胞外，在一步法骨

簡介：點(diǎn)擊查看更多宿主細(xì)胞對LPS刺激的應(yīng)答機(jī)制中金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域和解整合素結(jié)構(gòu)域的表達(dá)及其分子生物學(xué)意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文人舌鱗狀細(xì)胞癌脊髓轉(zhuǎn)移細(xì)胞系TS的建立和生物學(xué)特性姓名朱曉英申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師吳軍正200351第四軍醫(yī)太學(xué)頑士學(xué)位論文英文縮略語表英文縮寫英文全名ABCAVIDINBIO_TINPEROXIDASECOMPLEXSABCS訂EPTAVIDINBIOTINCOMPLEXALPALKALINEPHASPH01啞SEDTDOUBLINGTIMEFBSFATALBOVINESCFILMHRPHORSEEADISHPCMXIDASEDAB3，3DIAMINOBCNZIDINEFCMFLOWC舛鯽髓YIHCIMMUNOHISTOCHEMISTRYNMTM?？鰣”。1。甜?！癕I。?！啊盤CPBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPCNAPROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGENSCCSQUAMOUSCELLCARCINOMAMMPMATRIXMETALLOPROTEINASE中譯名抗生素一生物素一過氧化物酶復(fù)合物鏈酶親和素過氧化物酶復(fù)合物堿性磷酸酶群體倍增時問胎牛血清辣掇過氧化物酶3，3二胺基聯(lián)苯胺流式細(xì)胞僅免疫組織化學(xué)透射電鏡磷酸鹽緩沖液增殖細(xì)胞棱抗原鱗狀細(xì)胞癌基質(zhì)金屬蛋白酶

簡介：目的調(diào)查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對陽性檢測樣本的核苷酸序列進(jìn)行連接測序，比較分析BDVP24基因序列，建立病毒株的種系發(fā)生樹，闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源；應(yīng)用轉(zhuǎn)染的OL作進(jìn)一步的病毒核蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位研究，初步探討病毒的感染和發(fā)病機(jī)制。方法應(yīng)用巢式逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCRFQNRTPCR技術(shù)檢測中國寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDVP24和P40基因片段；對檢測BDVP24和P40基因片段均為陽性標(biāo)本的P24基因片段進(jìn)行連接、克隆、測序，并應(yīng)用EMBL、DNASP40和MEGA40軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度，構(gòu)建NEIGHBJOINING基因系統(tǒng)發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源；對轉(zhuǎn)染的OL應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和WESTERNBLOT的方法觀察病毒核蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)定位。結(jié)果在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測到BDVP24和P40陽性基因片段，檢出率分別為368％6163和127％9710；對15例陽性檢出標(biāo)本進(jìn)行連接、克隆、測序，連同14例前期檢測序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為965％～100％，氨基酸的同源相似度為953％～100％。與德國馬源性標(biāo)準(zhǔn)株HE80同源相似度較高。構(gòu)建基因的系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現(xiàn)寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨(dú)立的支系，其余陽性檢出序列形成混合支系，其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國的馬、日本的綿羊形成了‘德國中國寧夏日本’的混合支系；在轉(zhuǎn)染BDVP40基因片段的熒光表達(dá)質(zhì)粒的OL內(nèi)激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜中；WESTERNBLOT的結(jié)果顯示在細(xì)胞膜蛋白中存在核蛋白，而在細(xì)胞漿中未檢測到該蛋白。結(jié)論中國寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染；寧夏地區(qū)人和動物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨(dú)立株和國外傳入基因保守株的多源性；在轉(zhuǎn)染的OL內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)了BDV核蛋白，并將其定位在細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白中，尤其在細(xì)胞膜中含量更為豐富，推斷其可能在細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或介導(dǎo)病毒感染入胞過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文糖皮質(zhì)激素和TGFΒ1對人成骨肉瘤細(xì)胞RHOB的誘導(dǎo)作用、機(jī)制及生物學(xué)意義姓名刁飛申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師盧建20100501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文者聯(lián)合作用時促進(jìn)粘附的效果明顯大于兩者單獨(dú)作用的效果；對其機(jī)制的研究表明DEX在PC3細(xì)胞和HO8910細(xì)胞中都可以上調(diào)TGFPL的II型受體的表達(dá)，并增強(qiáng)TGF131的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，表明兩條通路間的確存在相互作用。但是對于兩條通路間協(xié)同作用的很多細(xì)節(jié)以及共同影響的靶基因的表達(dá)，我們至今了解的不多。在前期研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)DEX能夠上調(diào)人卵巢癌HO8910細(xì)胞RHOB的表達(dá)，RHOB的上調(diào)參與了DEX對HO8910細(xì)胞的增殖抑制作用，并發(fā)現(xiàn)DEX能明顯抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其分化，但是RHOB是否參與了DEX對骨肉瘤細(xì)胞的上述作用還不清楚。此外，有研究表明，TGF131能夠抑制MG63等骨細(xì)胞的增殖。新近還有報道TGF131在31“3成纖維細(xì)胞和HACAT角質(zhì)細(xì)胞中能夠上調(diào)RHOB的表達(dá)。因此TGF131對MG63細(xì)胞RIMB的表達(dá)是否有影響，以及RHOB在骨肉瘤細(xì)胞中的作用也是令人感興趣的問題。本實驗以骨肉瘤細(xì)胞為模型，首先研究了DEX對人成骨肉瘤MG63和HOS8603細(xì)胞RHOB的誘導(dǎo)作用，在證實DEX可以上調(diào)上述細(xì)胞RHOB之后，進(jìn)一步研究了DEX上調(diào)MG63細(xì)胞RHOB的分子機(jī)制以及RHOB在DEX調(diào)節(jié)MG63細(xì)胞增殖、分化和粘附中可能的作用。在此基礎(chǔ)上，我們又研究了TGF13對RHOB表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制，以及DEX和TGFBL聯(lián)合作用對人成骨肉瘤MG63細(xì)胞RHOB的誘導(dǎo)作用和對MG63細(xì)胞增殖與粘附的影響。本課題有助于進(jìn)一步闡明RHOB的作用和調(diào)節(jié)機(jī)制，以及糖皮質(zhì)激素和TGFP對骨細(xì)胞和骨肉瘤細(xì)胞的作用機(jī)制。一、糖皮質(zhì)激素對人成骨肉瘤細(xì)胞RHOB的誘導(dǎo)作用、機(jī)制及生物學(xué)意義一DEX對人成骨肉瘤細(xì)胞RHOB表達(dá)的影響我們選擇MG63和HOS8603兩種人成骨肉瘤細(xì)胞作為研究對象，用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT方法檢測了DEX對RHOB表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DEX能夠上調(diào)成骨肉瘤細(xì)胞剛10B的表達(dá)。二DEX誘導(dǎo)MG63細(xì)胞RHOB表達(dá)的機(jī)制研究1DEX上調(diào)RHOB的表達(dá)通過GR介導(dǎo)用GR的拮抗劑RU486預(yù)處理MG63細(xì)胞，再加DEX處理，分別用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT方法檢測RHOBMRNA和蛋白水平的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)RU486幾乎完全阻斷DEX對RHOB的誘導(dǎo)。表明DEX對RHOB表達(dá)的誘導(dǎo)作用是由GR受體介導(dǎo)的。ZDEX不能誘導(dǎo)含有人RHOB啟動子序列1765／111的報告基因的表達(dá)為明確DEX對RHOB的誘導(dǎo)作用是否發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，我們將含有人RHOB基因部分啟動子的序列1765／111的熒光素酶報告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞，再用DEX處理，并利用報告基因技術(shù)來進(jìn)行分析。結(jié)果表明在RHOB啟動子的這段長19KB的區(qū)域1765／111內(nèi)沒有功能性的GRE存在。用生物信息學(xué)方法檢索了人RHOB基

簡介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文MIR21對宮頸癌HELA細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名梅佳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李國利賈筱琴20100501揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文24、TRANSWELL侵襲實驗結(jié)果顯示MIR21上調(diào)組穿膜細(xì)胞數(shù)為21624MIR一21下調(diào)組穿膜細(xì)胞數(shù)為536；MIRNA前體陰性對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為12215MIRNA抑制劑陰性對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為11510；正常對照組穿膜細(xì)胞數(shù)為11514。MIR一2L上調(diào)組與對照組比較，穿摸細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異具有顯著性P001，而MIR21下調(diào)組與對照組比較，穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異具有顯著性P001。結(jié)論L、MIR2L前體能夠有效上調(diào)MIR21在HELA細(xì)胞中的表達(dá)水平，而MIR21抑制劑能夠有效下調(diào)MIR2L在HELA細(xì)胞中的表達(dá)水平。2、上調(diào)MIR21在HELA細(xì)胞中的表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖活性，對細(xì)胞的遷移，侵襲能力有明顯的增強(qiáng)作用；下調(diào)MIR21在HELA細(xì)胞中的表達(dá)則抑制細(xì)胞的增殖，同時減弱細(xì)胞的遷移及侵襲能力。3、MIR21與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。關(guān)鍵詞宮頸癌；HELA細(xì)胞；RNIR21細(xì)胞遷移及侵襲；

簡介：江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文VEGF對耐藥白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名方莉莉申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師許文林20090604江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細(xì)胞的凋亡情況，采用MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后阿霉素對耐藥白血病細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度50％INHIBITINGCONCENTRATION，IC50的變化，計算其增敏倍數(shù)，RTPCR、流式細(xì)胞術(shù)和WESTERNBLOTTING檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細(xì)胞耐藥相關(guān)基因MDRL、MRPL、TOPOII及其蛋白的表達(dá)變化，采用胞內(nèi)羅丹明123RH0123潴留試驗檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PGP及MRPL的功能狀態(tài)，采用免疫印跡法檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細(xì)胞MAPK／ERK和P13K／AKT信號傳導(dǎo)通路的活化水平。結(jié)果1與敏感株K562細(xì)胞比較，耐藥株K562／A02細(xì)胞VEGF基因的表達(dá)水平更高，兩組細(xì)胞VEGFMRNA與13ACTIN的灰度比值分別為05180055、08140073T6845，P0001，具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異；并且免疫印跡法顯示類似的結(jié)果，K562／A02細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)水平顯著高于K562細(xì)胞。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將隨機(jī)片段HK和VEGFSHRNA轉(zhuǎn)染入K562／A02細(xì)胞，共獲5組細(xì)胞，依次為K562／A02、K562／A02HK、K562／A02VEGFSHRNAL、K562／A02VEGFSHRNA2和K562／A02VEGFSHRNA3；轉(zhuǎn)染24H、48H及72H后，RTPCR結(jié)果顯示不同時間點(diǎn)隨機(jī)片段HK組和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞VEGFMRNA的表達(dá)均無差異，而轉(zhuǎn)染VEGFSHRNA的各組細(xì)胞VEGFMRNA的表達(dá)水平均低于HK組，其中轉(zhuǎn)染VEGFSHRNA2和VEGFSHRNA3組與HK組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異PO05，并且轉(zhuǎn)染不同時間VEGFSHRNA3對VEGF的抑制率分別為29611％、459土16％和432415％；WESTERNBLOTTING結(jié)果也顯示轉(zhuǎn)染24H、48H及U