簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多卵母細(xì)胞的體外成熟及其分子生物學(xué)機(jī)制的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠肈NA免疫和細(xì)胞加強(qiáng)方法制備抗人CD55分子單克隆抗體MAB，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究，確定該方法制備抗體的可行性。實(shí)驗(yàn)方法RTPCR方法克隆CD55分子編碼區(qū)全長(zhǎng)基因，將擴(kuò)增基因定向?qū)胝婧吮磉_(dá)載體PCDNA31和原核表達(dá)載體PET28A中。誘導(dǎo)PET28A55載體在大腸桿菌ROSSETA中表達(dá)CD55，表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在。通過(guò)鹽酸胍變性溶解包涵體，并經(jīng)鎳柱純化得到重組CD55蛋白。重組質(zhì)粒PCDNA3155采用多次肌肉注射方法免疫小鼠，并在每次DNA免疫前對(duì)小鼠股四頭肌做預(yù)處理①DNA免疫前1周注射蛇毒心肌毒素；②DNA免疫前15分鐘注射25％的高滲蔗糖溶液。與細(xì)胞融合前3天，用高表達(dá)CD55分子HPBALL細(xì)胞加強(qiáng)免疫一次，之后采用傳統(tǒng)的淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗CD55分子單克隆抗體。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)每次免疫后小鼠血清中抗體分泌情況。應(yīng)用夾心ELISA方法檢測(cè)抗體的類型，并利用抗體競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證制備抗體的表位。通過(guò)流式細(xì)胞儀FACS、熒光顯微鏡驗(yàn)證抗體與天然細(xì)胞膜蛋白的結(jié)合活性和特異性；WESTERNBLOT印證抗體與變性線性蛋白結(jié)合活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1擴(kuò)增CD55全長(zhǎng)基因1174BP，構(gòu)建成PCDNA3155重組質(zhì)粒。2采用FACS檢測(cè)血清滴度，3次DNA免疫后其最高為1∶200，細(xì)胞加強(qiáng)后滴度最高為1∶800。3通過(guò)細(xì)胞融合、篩選和克隆化培養(yǎng)最后得到兩株單克隆抗體分別為2B6E和2B6B。4兩株抗體IGG亞類均為IGG2A，輕鏈均為為Κ型。5抗體免疫競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)表明2B6B、2B6E、IA10BD和67SEROTEC之間識(shí)別不同的抗原表位。6FACS、免疫熒光顯微鏡和WESTERNBLOT實(shí)驗(yàn)表明抗體與天然細(xì)胞膜蛋白和變性膜蛋白及重組蛋白都有良好的結(jié)合活性和特異性。實(shí)驗(yàn)結(jié)論P(yáng)CDNA3155肌肉內(nèi)免疫后能激發(fā)小鼠產(chǎn)生針對(duì)CD55分子的抗體，聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞加強(qiáng)免疫可顯著提高抗體的滴度，而不影響其特異性。而且此方法制備的單克隆抗體具有良好的結(jié)合活性和特異性，這為以后探討制備單克隆抗體的方法提供新思路，也為日后改造CD55單克隆抗體，進(jìn)行靶向治療的研究打下基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：背景與目的侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最主要的生物學(xué)特性，也是腫瘤致死的重要因素。研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療具有重要意義。腫瘤轉(zhuǎn)移的方式主要有淋巴道轉(zhuǎn)移、血道轉(zhuǎn)移和種植轉(zhuǎn)移。腫瘤發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚有待研究。研究表明，腫瘤轉(zhuǎn)移不僅與機(jī)體微環(huán)境有關(guān)，還與腫瘤細(xì)胞自身特性密切相關(guān)，其中細(xì)胞表面糖蛋白的糖基化調(diào)節(jié)起重要作用。CD147分子，又名EMMPRIN，屬于免疫球蛋白超家族IMMUNOGLOBULINSUPERFAMILYIGSF的跨膜糖蛋白，是細(xì)胞膜的監(jiān)視分子。CD147由2個(gè)胞外IG結(jié)構(gòu)域、1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和1個(gè)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。從CD147的N端起，第1個(gè)胞外IG結(jié)構(gòu)域與MMPS誘導(dǎo)活性及CD147自身寡聚有關(guān)；第2個(gè)胞外IG結(jié)構(gòu)域與窖蛋白CAVEOLIN1CAV1存在相互作用。由于N糖基化不同，CD147同時(shí)表現(xiàn)為高糖型CD147HGCD147，分子量4066KD和低糖型CD147LGCD147，分子量33KD，但CD147糖基化與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚不明確。CD147主要通過(guò)誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶活性參與組織重構(gòu)，在機(jī)體發(fā)育、生殖等多種生理過(guò)程，以及腫瘤、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、潰瘍等多種病理過(guò)程中發(fā)揮作用。另一方面，CD147已被證實(shí)在多種腫瘤尤其是惡性腫瘤組織中表達(dá)增加，目前CDL47已在肺癌、肝癌、腦膠質(zhì)瘤、食道癌、喉癌、卵巢癌、乳腺癌等癌細(xì)胞中檢測(cè)出來(lái)。作為存在于腫瘤細(xì)胞表面的一種粘附分子，CD147介導(dǎo)腫瘤和基質(zhì)之間的相互作用，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞自身MMPS生成，加速腫瘤血管的生成，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。目前影響CD147水平表達(dá)活性的調(diào)節(jié)劑有糖基化、生長(zhǎng)因子、激素和膜脫落等。其中，糖基化對(duì)CD147的誘導(dǎo)活性起關(guān)鍵性作用。本文通過(guò)克隆小鼠CD147的CDNA、構(gòu)建其表達(dá)載體并將其穩(wěn)定過(guò)表達(dá)于小鼠肝癌細(xì)胞HEPA16中，觀察CD147糖型和HEPA16細(xì)胞生物學(xué)的變化，旨在闡明CD147的糖基化及其調(diào)節(jié)在腫瘤轉(zhuǎn)移中的重要作用，為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物設(shè)計(jì)提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和線索。方法1從小鼠肝癌細(xì)胞HCAF中提取總RNA，利用CD147特異性引物經(jīng)RTPCR擴(kuò)增CD147CDNA11830BP片段，克隆至PMD18TSIMPLEVECT，然后亞克隆到真核表達(dá)載體質(zhì)粒PCDNA31上，經(jīng)轉(zhuǎn)化、抗生素初步篩選、限制性核酸內(nèi)切酶酶切和DNA測(cè)序獲得重組質(zhì)粒PCDNA31CD147。2利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒PCDNA31CD147轉(zhuǎn)染至小鼠肝癌細(xì)胞HEPA16上，空載體做對(duì)照，經(jīng)G418篩選及RTPCR和WESTERNBLOT分析，獲得穩(wěn)定表達(dá)株。3WESTERNBLOT分析穩(wěn)定過(guò)表達(dá)CD147的糖型變化，并利用體外侵襲實(shí)驗(yàn)觀察小鼠肝癌細(xì)胞HEPA16細(xì)胞生物學(xué)性狀的變化。結(jié)果1利用RTPCR從小鼠肝癌細(xì)胞HCAF總RNA中成功克隆出850BP的CD147CDNA的11830BP片斷，重組陽(yáng)性克隆經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定證實(shí)目的基因已正確插入PCDNA31表達(dá)載體中，且與載體上的CMYC基因處于同一開(kāi)放閱讀框，記為PCDNA31CD147。2利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，經(jīng)G418篩選，RTPCR、WESTERNBLOT分析，獲得了2個(gè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)外源CD147的HEPA16細(xì)胞株，記為HEPA16CD147。3CD147過(guò)表達(dá)的小鼠肝癌細(xì)胞HEPA16中，高糖型和低糖型CD147的表達(dá)均有增加，細(xì)胞的侵襲能力顯著增強(qiáng)。結(jié)論CD147的過(guò)表達(dá)沒(méi)有影響小鼠肝癌細(xì)胞HEPA16中CD147的糖基化，但是顯著增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲能力。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多重組人肝再生增強(qiáng)因子基因轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞系的生物學(xué)活性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)神經(jīng)母細(xì)脆瘤細(xì)脆生物學(xué)特性影響反神經(jīng)母細(xì)脆瘤全基因組拷貝數(shù)變異初步分析EFFECTSOYENVIRONMENTALENDOCRINEDISRUPTORSONTHECHARACTERISTICSOFNEUROBLASTOMACELLSANDWHOLEGENOMICCOP,NUMBERVARIANTPROFILINGOYNEUROBLASTOMA博士研究生朱海濤學(xué)科反專土J兒科學(xué)F外科J導(dǎo)師育現(xiàn)民教授導(dǎo)師組威置吳柏林教授T巋籃捌I任醫(yī)師忱亦平蘸投陳蓮材麓援肆繼卓I話醫(yī)師2010年4月5日塑E太學(xué)博±學(xué)＆論I常用縮略詞匯英漢對(duì)照表目錄中文摘要?????????????????????????????????????I羲文摘監(jiān)?????????????????????????????????????_、引言第一部分BPA及DEHP對(duì)神經(jīng)母紐J胞瘤SKN，SH細(xì)胞增殖凋亡特性的影響前言????????????．．???”??．“”“?”???????????????．．4材料與方法結(jié)果討論小結(jié)“5142第二部分BPA及DEHP對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK．N。SH細(xì)胞多藥耐藥性的影響前言材料與方法結(jié)聚???????????????????????．．．???．???”．．??””??34I寸淪?????????????????????????????????????．45_、結(jié)????????????????．．??．”．??．”．”“．”．???．??．．．．．．?N”．?．47第三部分BN技DEHP對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK．N．SH細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移特性的影響前言?????????????????”???????????．““??．??48材料與方法?????????????????????????????????”49}自H?????????????????????????????????????．52討論?????????????????????????????????????．59_、結(jié)?????????．．??．．”????????????????????????6L第舊部分EED對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤SKNSH細(xì)胞生物學(xué)特性影響的分了機(jī)制F{UII??????????????????????????????“”??????61利料與方法?????????????????????????????????．．64結(jié)G；??????????????????????．?．．???．．．?．．．．”．”??．．?．“．6710鹼?????????”?一????”??”””“??“?????．??????．850、結(jié)??????????????????????????????????”??“89第五部分中阿漢族人種經(jīng)母細(xì)胞確全基因紐拷貝數(shù)變異糾步分析前占?????????????????????????????????????90材料與方法?????????????????????????????????．．91}自?????????????????????????????????????．95討論小結(jié)03{義總結(jié)．?．“．??”??．．．??．．．．?????????????????????”L16參考文獻(xiàn)博J二期間發(fā)表論文致謝07244146

簡(jiǎn)介：臍血是造血干祖細(xì)胞的一個(gè)重要來(lái)源，可用于臨床移植來(lái)恢復(fù)患者的髓系造血功能。臍血采集后至進(jìn)入臨床應(yīng)用前，需要優(yōu)良的冷凍技術(shù)來(lái)保持造血干細(xì)胞的活性與特征。目前，除了傳統(tǒng)的慢速凍存法外，玻璃化法逐漸成為一種頗具應(yīng)用前景的低溫保存技術(shù)，而良好的干細(xì)胞低溫保存方案不僅要保證一定的細(xì)胞活率，同時(shí)要維持干細(xì)胞的增殖及分化能力。本實(shí)驗(yàn)室在前期的研究中篩選出聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑配方，并對(duì)臍血來(lái)源的造血干祖細(xì)胞進(jìn)行了低溫保存。為了評(píng)價(jià)該玻璃化冷凍方案的效果，本文首先用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)凍后細(xì)胞活率，并用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD34細(xì)胞的百分含量，再對(duì)凍后的細(xì)胞進(jìn)行短期的靜態(tài)培養(yǎng)和長(zhǎng)期的集落培養(yǎng)，綜合考查凍后細(xì)胞的回收率與生物學(xué)特征。其次，由于導(dǎo)入過(guò)程是細(xì)胞發(fā)生損傷的主要環(huán)節(jié)，繼而又對(duì)導(dǎo)入過(guò)程平衡時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)方法主要采用顯微攝像系統(tǒng)拍攝細(xì)胞照片，對(duì)導(dǎo)入過(guò)程不同時(shí)刻的細(xì)胞體積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并結(jié)合細(xì)胞活率的測(cè)定，確定適宜的導(dǎo)入平衡時(shí)間。結(jié)果表明玻璃化冷凍復(fù)蘇后，單個(gè)有核細(xì)胞平均回收率可達(dá)到815±17％，而傳統(tǒng)的慢速凍存法，單個(gè)有核細(xì)胞回收率僅為747±26％，兩者存在顯著性差異。慢速凍存組CD34細(xì)胞的回收率為523％，略高于玻璃化凍存組497％，但兩者無(wú)顯著性差異。雖然，CD34細(xì)胞的回收率無(wú)顯著差異。原代細(xì)胞，玻璃化凍后細(xì)胞和慢速冷凍后細(xì)胞在72小時(shí)內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)良好，擴(kuò)增倍數(shù)分別為27，23和19倍。各組細(xì)胞進(jìn)行14天集落培養(yǎng)，均可形成典型的BFUE，CFUGM和CFUGEMM集落，各實(shí)驗(yàn)組無(wú)顯著性差異，玻璃化凍存組的集落回收率可達(dá)到90％以上。優(yōu)化前導(dǎo)入平衡時(shí)間為等時(shí)間間隔，即每步導(dǎo)入之間均為90S，總時(shí)間為450S。細(xì)胞的體積皺縮到初始體積的35％以下，并無(wú)法有效恢復(fù)。細(xì)胞活率為881±30％。優(yōu)化設(shè)計(jì)的平衡時(shí)間為前短后長(zhǎng)的非等平衡時(shí)間間隔，即180S，180S，90S，90S和60S，總時(shí)間為600S。細(xì)胞的體積恢復(fù)至初始體積的63％，細(xì)胞活率為954±04％，具有顯著提高。采用聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑對(duì)臍血造血干祖細(xì)胞進(jìn)行玻璃化冷凍保存，可以得到較高的細(xì)胞回收率，且成活細(xì)胞的功能性保持完好。對(duì)導(dǎo)入平衡時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，提出前長(zhǎng)后短的非等時(shí)間間隔，有效地減少了導(dǎo)入過(guò)程細(xì)胞損失的情況。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多跨膜型SCF與分泌型SCF對(duì)肥大細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：該文分四部分第一部分轉(zhuǎn)染人TGFΒ1和反義TGFΒ1基因大鼠MSC系的建立目的通過(guò)對(duì)大鼠MSC轉(zhuǎn)染正義和反義TGFΒ1基因獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)和低表達(dá)TGFΒ1的MSC克隆結(jié)論穩(wěn)定過(guò)表達(dá)和低表達(dá)TGFΒ1的MSC系的建立為進(jìn)一步研究TGFΒ1對(duì)MSC生物學(xué)特性改變的影響提供物質(zhì)保證第二部分轉(zhuǎn)染TGFΒ1和反義TGFΒ1對(duì)MSC增殖及其基質(zhì)降解酶系統(tǒng)表達(dá)的影響目的研究過(guò)表達(dá)和低表達(dá)TGFΒ1對(duì)MSC細(xì)胞增殖、纖溶酶原激活物及其抑制劑和基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響結(jié)論TGFΒ1可通過(guò)對(duì)大鼠系膜細(xì)胞增殖、PAI1TPA和MMP237表達(dá)的影響而在腎小球硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程起著重要作用第三部分TGFΒ1對(duì)腎小球MSC醛糖還原酶表達(dá)的影響目的對(duì)轉(zhuǎn)染人TGFΒ1基因的MSC進(jìn)行相關(guān)反應(yīng)性基因的篩選并觀察TGFΒ1對(duì)其中之一的醛糖還原酶表達(dá)的影響結(jié)論醛糖還原酶是一個(gè)與TGFΒ1基因表達(dá)密切相關(guān)的多元醇代謝通路的關(guān)鍵酶可能參與TGFΒ1介導(dǎo)的腎小球硬化的發(fā)生機(jī)制第四部分瞬時(shí)轉(zhuǎn)染SMAD4基因?qū)Υ笫驧SC增殖和MMP2表達(dá)的影響目的探討SMAD4信號(hào)傳遞分子參與TGFΒ1介導(dǎo)的MSC生長(zhǎng)及其MMP2表達(dá)中的作用結(jié)論SMAD4分子參與TGFΒ1對(duì)MSC生長(zhǎng)抑制和MMP2表達(dá)增強(qiáng)的調(diào)節(jié)機(jī)制顯示其在介導(dǎo)腎小球硬化過(guò)程中也可能起重要作用

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶Μ3對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDAMB231生物學(xué)特性的影響姓名黃秋梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)藥理學(xué)（臨床藥理學(xué)）指導(dǎo)教師袁洪20090501無(wú)明顯影響，主要改變細(xì)胞對(duì)阿霉素的藥物敏感性，并影響細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力，從而改變?nèi)橄侔┘?xì)胞轉(zhuǎn)移的傾向。關(guān)鍵詞谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P3；乳腺癌；RNA干擾；遷移；生長(zhǎng)抑制Ⅱ

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文PASAL1基因在胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)及生物學(xué)意義姓名楊曉薇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)；內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師陳洪20110602英文摘要EXPRESSIONANDBIOLOGICALSIGNIFICANCEOFRASPROTEINACTIVATORLIKE1GENEINGASTRICCANCERCELLLINEABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEEXPRESSIONANDBIOLOGICALSIGNIFICANCEOFRASPROTEINACTIVATORLIKE1RASALLINNORMALHUMANGASTRICEPITHELIALCELLLINEANDDIFFERENTLYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINES．METHODSTHENORMALHUMANGASTRICEPITHELIALCELLLINEANDDIFFERENTLYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINESWERECULTUREDINVITROANDDIVIDEDINTOCONTROLGROUPANDEXPERIMENTALGROUPS．THEEXPRESSIONSOFRASALLMRNAANDPROTEINWERERESPECTIVELYDETECTEDBYPTPCRANDWESTERNBLOTINTHREEKINDSOFGASTRICCANCERCELLLINES，INCLUDINGWELLDIFFERENTIATEDMKN一28，MODERATELYDIFFERENTIATEDSGC一7901，POORLYDIFFERENTIATEDBGC一823，ANDNORMALGASTRICEPITHELIALCELLLINEGES1．THEMUTATIONOFKRASGENECODON12AND13WASDETECTEDBYPCRANDGENESEQUENCING．RESULTS1THERESULTSOFPTOPCRSHOWEDTHEEXPRESSIONOFRASALLMRNADECREASED47．53％，85．80％，95．86％RESPECTIVELYINWELLDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINEMKN28，MODERATELYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINESGC7901ANDPOORLYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINEBGC823ASCOMPAREDWITHTHENORMALGASTRICEPITHELIALCELLLINEGES1P0．01，ANDTHEEXPRESSIONWASCORRELATEDWITHTHEDEGREEOFDIFFERENTIATIONTHEPOORESTDIFFERENTIATION，THELOWESTEXPRESSIONF8098．175，P0．01．2THERESULTSOFWESTERNBLOTSHOWEDTHEEXPRESSIONOFRASALLPROTEINSDECREASED40．12％，54．94％，63．33％RESPECTIVELYINWELLDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINEMKN28，MODERATELYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINESGC7901ANDPOORLYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINEBGC823ASCOMPAREDWITHTHENORMALGASTRICEPITHELIALCELLLINEGES1PO．01，ANDTHEEXPRESSIONWASALSOCORRELATEDWITHTHEDEGREEOFDIFFERENTIATIONTHEPOORESTDIFFERENTIATION，THELOWESTEXPRESSIONF3059．420，PO．01．THERESULTSOFWESTERNBLOTWERECONSISTENTWITHTHERESULTSOFRTPCR．3THEMUTATIONOFKRASGENECODON12AND13WASNOTFOUNDINNONEOFTHETHREEGASTRICCANCERCELLLINES．

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2007級(jí)博士學(xué)位論文IDL對(duì)卵巢癌內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究THEEFFECTSANDMECHANISMSOFIDLONBIOLOGICALBEHAVIOUROFOVARIANCANCERENDOTHELIALPROGENITORCELLS專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)蘇亞娟王前教授、主任醫(yī)師高天明教授吳曉蔓教授李林教授蔡應(yīng)木教授裘宇容教授楊紅玲教授鄭磊副教授論文評(píng)閱人崔巍教授李艷教授曹燕教授2010年05月L5日廣州博士學(xué)位論文LIIIIIIIIIIILLLIIIIIIL＼1770389IDL對(duì)卵巢癌內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究博士研究生蘇亞娟指導(dǎo)教師王前教授、主任醫(yī)師研究背景和目的摘要卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居?jì)D科腫瘤第三位。然而卵巢癌的死亡率高居?jì)D科腫瘤首位，5年生存率仍然徘徊在30％左右。近年來(lái)，基因治療、靶向治療作為腫瘤治療的新生代模式日益受到重視。通過(guò)基因芯片和蛋白質(zhì)組技術(shù)在卵巢痛研究中的應(yīng)用發(fā)現(xiàn)了很多潛在價(jià)值的標(biāo)志物。但目前還沒(méi)有找到特有效的特異性標(biāo)志物，對(duì)于生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理也缺乏一定的了解。轉(zhuǎn)移是影響卵巢癌患者治療效果和死亡的主要原因，探討與卵巢癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移相關(guān)的因素，尋找預(yù)防和治療的有效途徑，是當(dāng)代腫瘤學(xué)研究的一項(xiàng)迫切任務(wù)。腫瘤血管化是腫瘤從體積小、局限性的非浸潤(rùn)性腫瘤發(fā)展成為體積大、具有浸潤(rùn)性和轉(zhuǎn)移能力的腫瘤的關(guān)鍵步驟?？寡苌墒遣煌诔Ｒ?guī)抗腫瘤治療的新策略，并以成為腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。最近研究闡明了微量的骨髓來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞ENDOTHELIALPROGENITORCELLS，EPCS參與腫瘤的血管發(fā)生，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，是腫瘤轉(zhuǎn)移的開(kāi)關(guān)。分化抑制因了1INHIBITORSOFDIFFERENTIATIONL，IDL又稱DNA結(jié)合抑制因子INHIBITORSOFDNABINDING，屬于螺旋環(huán)一螺旋HELIXLOOPHELIX，HLH轉(zhuǎn)錄因子家族，它顯性負(fù)調(diào)控堿性螺旋．環(huán)一螺旋BHLH轉(zhuǎn)錄因了活性，從而抑制細(xì)胞分化，促進(jìn)細(xì)胞增殖。研究表明，IDL在人體腫瘤標(biāo)本及體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中均呈過(guò)表達(dá)。SCHINDL等檢測(cè)了卵巢癌巾IDL的表達(dá)，結(jié)果表明，卵巢痛的惡性程度與IDL

簡(jiǎn)介：目的擬從人足月胎盤(pán)分離純化出間充質(zhì)干細(xì)胞MECENCHYMALSTEMCELLSMSCS，進(jìn)行體外擴(kuò)增，研究其生物學(xué)性狀，并向成脂細(xì)胞分化，尋找新的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源。方法1、采取4種不同的消化分離方法從人足月胎盤(pán)中分離純化MSCS，胎盤(pán)組織剪碎后平均分為4組A、胰蛋白酶淋巴細(xì)胞分離液組；B、胰蛋白酶膠原酶Ⅳ11羥乙基淀粉沉淀組；C、膠原酶Ⅳ淋巴細(xì)胞分層液分離組；D、膠原酶Ⅳ羥乙基淀粉沉淀組，五份標(biāo)本組。2、第3代細(xì)胞經(jīng)CD44抗體、CD34抗體、CD29抗體、CD106抗體免疫熒光方法鑒定；通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及電鏡觀察其生物學(xué)性狀。3、第三代細(xì)胞采用含異丁基甲基黃嘌呤、地塞米松、胰島素的高糖DMEM誘導(dǎo)液向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)，油紅O染色，觀察MSCS的形態(tài)變化，未誘導(dǎo)組作為平行對(duì)照。結(jié)果1、在其他條件相同的情況下，膠原酶Ⅳ羥乙基淀粉沉淀組培養(yǎng)成功率為100％，其余3組分別為20％，60％，80％，膠原酶IV羥乙基淀粉沉淀組細(xì)胞出現(xiàn)伸展時(shí)間及原代培養(yǎng)時(shí)間均短于其他三組。2、人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞為貼壁生長(zhǎng)的長(zhǎng)梭形成纖維樣細(xì)胞，增殖能力較強(qiáng)；強(qiáng)表達(dá)透明質(zhì)酸受體CD44和整合素家族受體CD29，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD1063、胎盤(pán)MSCS具有向脂肪細(xì)胞分化的潛能，油紅O染色結(jié)果陽(yáng)性。結(jié)論使用膠原酶Ⅳ消化胎盤(pán)組織，結(jié)合羥乙基淀粉沉淀法能較好地分離人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞；從人足月胎盤(pán)中成功分離出間充質(zhì)干細(xì)胞，與其他來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性狀相似，可組為組織工程新的干細(xì)胞來(lái)源。

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)男ｏL(fēng)和科研作風(fēng)，本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解第三軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬第三軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為第三軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期釜一目錄眥Y帆1惴8㈣0M1帆9㈣670英文縮寫(xiě)一覽表???????????????????????????????L英文摘要?????????????????????????????????．．3中文摘要?????????????????????????????????．．6論文正文泛素連接酶E3GP78的RNA干擾對(duì)MHCC97一H細(xì)胞生物學(xué)行為及KAII表達(dá)的影響?????????????????????8前言????????????????????????????????．．8日U舌????????????????????????????????．．子第一部分泛素連接酶E3GP78RNAI真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定??．10實(shí)驗(yàn)材料???????????????????????????????．10結(jié)果??????????????????????????????．．27討論???????????????????????????????．36第二部分GP78RNAI對(duì)MHCC97H細(xì)胞生物學(xué)行為的影響???????．．39實(shí)驗(yàn)材料???????????????????????????????．39實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????????．40結(jié)果???????????????????????????????．43討論???????????????????????????????．47第三部分MHCC97．H細(xì)胞株中GP78的RNA干擾對(duì)KALL表達(dá)的影響????．．49實(shí)驗(yàn)材料???????????????????????????????．49實(shí)驗(yàn)方法???????????????????????????????．49結(jié)果???????????????????????????????．50討論???????????????????????????????．54全文結(jié)論????????????????????????????????．56致謝????????????????????????????????．57參考文獻(xiàn)????????????????????????????????．58文獻(xiàn)綜述泛素連接酶E3GP78在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展????????．6L參考文獻(xiàn)????????????????????????????????．67在讀期間發(fā)表的文章???????????????????????????70

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10571學(xué)號(hào)2010010074MIR32對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響及對(duì)PTEN調(diào)控機(jī)制的研究THEEFFECTOFMIR32ONBIOLOGICALBEHAVIORANDREGULATIONMECHANISMOFPTENBYMIR一32INCOLORECTALCANCERCELLS學(xué)科門(mén)類學(xué)科、專業(yè)研究方向年醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)消化內(nèi)科消化系疾病的基礎(chǔ)與臨床研究級(jí)二零一零級(jí)研究生姓名導(dǎo)師姓名楊靜芳周宇教授起止日期2010094201305廣東醫(yī)學(xué)院消化內(nèi)科二。一三年五月目錄中文摘要1ABSTRACT31前言。611研究背景612研究目的一1013研究?jī)?nèi)容一112材料與方法1121材料1122方法173結(jié)果324討論435小結(jié)47參考文獻(xiàn)。48綜述。53綜述參考文獻(xiàn)58致謝。61附錄一縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照62附錄二在讀碩士期間科研情況63

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文脂氧合酶抑制劑NDGA對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF7生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制探討姓名劉煥濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（普外科）指導(dǎo)教師孫靖中20040412脂氧合酶抑制劑NDGA對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF一7生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制探討專業(yè)外科學(xué)普外科博士研究生劉煥濤導(dǎo)師孫靖中教授摘要目的乳腺癌是威脅女性健康的主要疾病。目前公認(rèn)的乳腺癌治療模式是以手術(shù)為主的全身性綜合治療，其中化療在整個(gè)綜合性治療中占有重要的地位。化療能夠聯(lián)合其他治療方法有效地抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)乳腺癌患者的生存時(shí)間，提高生活質(zhì)量。但是，乳腺癌的侵襲擴(kuò)散性和對(duì)化療的耐藥性是目前治療失敗的主要原因，往往在腫瘤被發(fā)現(xiàn)時(shí)即有轉(zhuǎn)移性病灶存在的可能，而且部分腫瘤細(xì)胞還獲得一定的耐藥性，這給乳腺癌的治療帶來(lái)困難。NDGA能夠抑制花生四烯酸通過(guò)脂氧合酶途徑進(jìn)行代謝，是脂氧合酶的強(qiáng)烈抑制劑。最近研究發(fā)現(xiàn)NDGA能在體內(nèi)外阻止乳腺癌、肝癌、肺癌、大腸癌及膠質(zhì)瘤等多種腫瘤的發(fā)生，并抑制腫瘤細(xì)胞增殖，降低腫瘤對(duì)化療藥的耐藥性，但其分子機(jī)理尚不清楚。本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)為研究工具，對(duì)乳腺癌MCF一7細(xì)胞系增殖和凋亡、5LOX、BCL一2、端粒酶、VEGF、CD44V6等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，研究探討NDGA對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MCF一7生物學(xué)特性的影響，以便于我們進(jìn)一步揭示脂氧合酶抑制劑的抗癌機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。材料和方法體外培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞系MCF．7，NDGA濃度設(shè)為L(zhǎng)、LO、1001TMOL／L，采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1觀察1～1000肛MOI／LNDGA對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MCF7增殖動(dòng)力學(xué)的影響MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)藍(lán)線及檢測(cè)細(xì)胞存活率；2倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；3流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率、BEL．2及CD44V6的表達(dá)情況；4RTPCR