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簡(jiǎn)介:NESTIN調(diào)控多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的研究NESTIN,ANOVELREGULATOROFMULTIPLEMYELOMA導(dǎo)論文課題起止時(shí)間2Q圣生2月二2Q壘生蘭月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧2014年5月目錄一、摘要中文論著摘要?...?.?????...??????....1英文論著摘要????????????????。.3二、英文縮略語(yǔ)??.????.?????.?????.5三、論文前言???..?..???..???.??????...6日U舌???..?..???..???.??????...材料與方法?????????????.???..7實(shí)驗(yàn)結(jié)果.??.????.???????.?.?...8討{侖...?........??????..?.?..??..?...11結(jié)論?...?.??.?.......??..???...??..12四、本研究的創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)?....?????????.13五、參考文獻(xiàn)?????????????????.14六、附錄綜述?.????????.??..?.????..17在學(xué)期間科研成績(jī)?????????.?????24致謝???????????.???????25個(gè)人簡(jiǎn)介???????.?????????..26
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簡(jiǎn)介:山東大學(xué)碩士學(xué)位論文米諾環(huán)素、四環(huán)素及強(qiáng)力霉素對(duì)體外培養(yǎng)的人牙周韌帶細(xì)胞生物學(xué)活性的影響姓名趙寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)(口內(nèi))指導(dǎo)教師楊丕山20030421山求人學(xué)碩F二學(xué)位論義符號(hào)說(shuō)明縮略語(yǔ)英文解釋中文解釋TTCSTETRACYCLINES四環(huán)素族藥物HPDLCSHUMANPERIODONTALLIGAMENTCELLS人牙周韌帶細(xì)胞FCSFETALCALFSERUM胎牛血清DMEMDULBECCO’SMODIFIEDEAGLE’SMEDIUM一種細(xì)胞培養(yǎng)液PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖溶液BOPBLEEDINGONPROBING探診出血PDPROBINGDEPTH探診深度CALCLINICALATTACHMENTLEVEL臨床附著水平MTT3.4,5DIMETHYLTHIAZ01.2Y1.二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽2,5DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDEDMSODIMAMYLSULFOXIDE二甲基亞砜ODOPFICMDENSITY光密度TDRTHYMIDINE胸腺嘧啶核苷
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簡(jiǎn)介:分類號(hào)R34密級(jí)單位代碼10114學(xué)號(hào)GXJS08049RNA干擾下調(diào)宮頸癌HELA細(xì)胞SURVIVIN表達(dá)及其生物學(xué)效應(yīng)的研究研究生指導(dǎo)教師申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別專業(yè)名稱研究方向所在學(xué)院2012年3月15日目錄中文摘要??????????????????????????????????.I英文摘要??????????????????????????????????。Ⅲ英文名稱縮略詞???????????????????????????????.V前言??????????????????????????????????????????.1日巧舌??????????????????????????????????????????1第一部分SURVIVN基因RNA干擾真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定1材料??????????????????????????????????????..32方法??????????????????????????????????????.43結(jié)果??????????????????????????????????????.84討論??????..??????????..??????????..??????????.9第二部分SURVIVIN基因沉默對(duì)宮頸癌HELA細(xì)胞SURVIVIN表達(dá)的影響1材料??????????????????????????????????????LL2方法?????????????????????????????????????。123結(jié)果?????????????????????????????????????。154討論?????????????????????????????????.????.19第三部分SURVIVIN基因沉默對(duì)宮頸癌HELA細(xì)胞增殖能力的影響1剌『料?????????????????????????????????????。202方法?????????????????????????????????????。2L3結(jié)果?????????????????????????????????????。224討論?????????????????.????????????????????.14第四部分SURVIVIN基因沉默對(duì)宮頸癌HELA細(xì)胞凋亡的影響1材料?????????????????????????????????????。262方法?????????????????????????????????????。283結(jié)果?????????????????????????????????????。294討論?????????????????????????????????????..3L參考文獻(xiàn)????????????????????????????????.32綜J盎?????.????????????????????????????????????.16綜述參考文獻(xiàn)??????????????????????????????.41個(gè)人簡(jiǎn)介???????????????????????????????????????43
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簡(jiǎn)介:侈H,⑧論文作者簽名盤煎指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3答辯委員會(huì)主席睦摳壹』數(shù)援』逝渣太堂藥堂院委員L虛金彪』熬援』逝江太堂醫(yī)堂瞳委員2吳拉國(guó)Z副圭堡醫(yī)瘟么浙江太堂邳逸去醫(yī)睦答辯日期2Q生2月2魚(yú)旦L0一久1浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果,也不包含為獲得逝塑太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名簽字日期刃F1年弓月多日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解浙江太堂有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)浙婆太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者簽名旁奏,簽字日期刃『J年弓月弓日導(dǎo)師簽名扒/鋤鮐剮人√簽字日期溯年月多日
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簡(jiǎn)介:微重力環(huán)境可引起肌肉骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、自主平衡系統(tǒng)等各個(gè)系統(tǒng)的改變,如骨丟失、肌肉萎縮、心血管系統(tǒng)失調(diào)、立位耐受性下降、認(rèn)知功能降低等等。那么,微重力環(huán)境對(duì)牙周組織會(huì)造成怎樣的影響呢在本研究中我們擬采用三維回轉(zhuǎn)器(THREEDIMENSIONALCLINOSTATTDC)來(lái)模擬失重環(huán)境,從這種失重環(huán)境對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞(HUMANPERIODONTALLIGAMENTFIBROBLASTSHPDLFS)生物學(xué)性能的影響入手,對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行了探討。目的觀察模擬失重環(huán)境對(duì)HPDLFS形態(tài)和功能的影響,初步探討在這一特殊環(huán)境中工作、生活的個(gè)體(如宇航員、太空旅游者)的牙周組織對(duì)這種環(huán)境的耐受性。方法取體外培養(yǎng)的47代HPDLFS,接種于20ML培養(yǎng)瓶貼壁24H,隨機(jī)分為回轉(zhuǎn)組和對(duì)照組。運(yùn)用三維回轉(zhuǎn)器(THREEDIMENSIONALCLINOSTATTDC)模擬失重環(huán)境,設(shè)定410RMIN隨機(jī)轉(zhuǎn)速,所產(chǎn)生的重力水平在103104G間。回轉(zhuǎn)組HPDLFS在TDC中分別培養(yǎng)48H、72H和96H,對(duì)照組細(xì)胞分別在常規(guī)環(huán)境中培養(yǎng)。然后進(jìn)行以下檢測(cè),比較分析兩組間細(xì)胞的差異性。1、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)利用HE染色、羅丹明鬼筆環(huán)肽免疫熒光染色觀察兩組間細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞微絲骨架的變化。2、細(xì)胞功能檢測(cè)利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、MTT細(xì)胞活力檢測(cè)、流式細(xì)胞術(shù)、HOECHST33258核染色及RTPCR技術(shù),比較兩組細(xì)胞間增殖、凋亡及I型膠原MRNA的表達(dá)等細(xì)胞功能的差異。結(jié)果1、TDC模擬失重對(duì)HPDLFS細(xì)胞形態(tài)的影響HE染色培養(yǎng)48H后,回轉(zhuǎn)組和對(duì)照組HPDLFS均呈梭形或多角形,細(xì)胞核大,居中,胞體豐滿,胞漿均勻,未出現(xiàn)胞漿內(nèi)顆粒增多、胞內(nèi)空泡、核分叉、核碎裂等現(xiàn)象。但回轉(zhuǎn)組細(xì)胞的胞核面積較對(duì)照組縮小約12%(P<005);培養(yǎng)72H和96H后,回轉(zhuǎn)組細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。羅丹明鬼筆環(huán)肽免疫熒光染色培養(yǎng)48H后,回轉(zhuǎn)組微絲骨架結(jié)構(gòu)略顯模糊,排列較對(duì)照組稍顯紊亂。培養(yǎng)72H和96H后,回轉(zhuǎn)組和對(duì)照組微絲骨架結(jié)構(gòu)均呈現(xiàn)清晰而有規(guī)律的束狀結(jié)構(gòu),分布均勻。2、TDC模擬失重對(duì)HPDLFS細(xì)胞功能的影響細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)培養(yǎng)48H和72H后,回轉(zhuǎn)組與對(duì)照組HPDLFS細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差異(P>005);培養(yǎng)96H后,回轉(zhuǎn)組與對(duì)照組細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果有顯著差異,回轉(zhuǎn)組細(xì)胞數(shù)量明顯高于對(duì)照組(P<001)。MTT細(xì)胞活力檢測(cè)培養(yǎng)48H后,回轉(zhuǎn)組與對(duì)照組細(xì)胞活力無(wú)明顯差異(P>005);培養(yǎng)72H和96H后,回轉(zhuǎn)組細(xì)胞活力明顯高于對(duì)照組(P<001)。細(xì)胞周期培養(yǎng)48H和72H后,回轉(zhuǎn)組與對(duì)照組細(xì)胞周期S期所占總周期的百分比例結(jié)果無(wú)明顯差異(P>005);模擬失重培養(yǎng)96H后,回轉(zhuǎn)組細(xì)胞周期S期所占總周期的百分比例高于對(duì)照組(P<005)。HOECHST33258核染色培養(yǎng)48H、72H和96H后,回轉(zhuǎn)組和對(duì)照組HPDLFS細(xì)胞核均呈彌散均勻熒光,細(xì)胞核邊緣光滑圓潤(rùn),未出現(xiàn)細(xì)胞核固縮、核碎裂、濃染致密的顆粒塊狀凋亡小體熒光。RTPCR培養(yǎng)48H和72H后,回轉(zhuǎn)組HPDLFSI型膠原MRNA表達(dá)較對(duì)照組變化不明顯(P>005);培養(yǎng)96H后,回轉(zhuǎn)組HPDLFSI型膠原MRNA表達(dá)有所升高(P<005)。結(jié)論暴露于微重力環(huán)境的初期(48H),HPDLFS表現(xiàn)出細(xì)胞核變小、微絲骨架結(jié)構(gòu)稍顯紊亂的形態(tài)學(xué)變化,但未出現(xiàn)細(xì)胞裂解、凋亡增強(qiáng)、細(xì)胞活性下降等破壞性變化。隨著在微重力環(huán)境中暴露時(shí)間的延長(zhǎng)(72H、96H),HPDLFS細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常,并且逐漸表現(xiàn)出細(xì)胞活力、增殖能力及I型膠原表達(dá)增強(qiáng)的功能狀態(tài)。這一結(jié)果提示,HPDLFS對(duì)短期(96H)的微重力環(huán)境具有耐受性,但其所表現(xiàn)出的功能活動(dòng)增強(qiáng)的情況會(huì)對(duì)牙周組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生何種影響,尚需進(jìn)一步的研究進(jìn)行探討。
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簡(jiǎn)介:?jiǎn)魏思?xì)胞增多性李斯特菌LISTERIAMONOCYTOGENESLM是革蘭氏陽(yáng)性兼性胞內(nèi)寄生菌廣泛存在于自然界和一些特定的環(huán)境中如土壤、水、污水管等。上世紀(jì)80年代以來(lái)該菌作為一種重要的食源性病原菌已引起廣泛關(guān)注。LM在食品生產(chǎn)和加工過(guò)程中可以通過(guò)多種途徑進(jìn)入食品對(duì)消費(fèi)者的健康構(gòu)成潛在威脅。該菌具有很強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性能夠耐受的PH范圍為40~95、溫度范圍為1~45℃其耐鹽能力也相當(dāng)強(qiáng)能在高于10%NACL的環(huán)境中存活。這些環(huán)境適應(yīng)性使其很難在食品加工生產(chǎn)過(guò)程中被完全殺滅對(duì)食品安全性構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此在食品生產(chǎn)和加工過(guò)程中建立LM簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法及監(jiān)控體系具有重要意義。本研究的目的是通過(guò)對(duì)浙江省某市海產(chǎn)品從生產(chǎn)到加工過(guò)程中LM的污染狀況進(jìn)行檢測(cè)明確海產(chǎn)品中LM的污染狀況并分析LM分離株的毒力、耐藥性和基因型。此外我們還對(duì)兩株典型單增李斯特菌奶源分離株毒力和環(huán)境適應(yīng)性進(jìn)行了研究。在浙江省某市5個(gè)海產(chǎn)品加工企業(yè)的蝦和魚(yú)制品及其原料和加工環(huán)境共采樣482份最終鑒定出8株單增李斯特菌其檢出率為17%。其中主要分離自成品魚(yú)、成品蝦。海產(chǎn)品分離株的毒力差異較大可以分為強(qiáng)毒和弱毒兩組。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明單增李斯特菌海產(chǎn)品分離株對(duì)常用的十五種抗生素表現(xiàn)出較強(qiáng)的敏感性所有菌株均對(duì)四環(huán)素和喹諾酮類抗生素敏感個(gè)別分離株對(duì)Β內(nèi)酰胺類、復(fù)方新諾明、紅霉素或克林霉素具有一定程度的耐藥性其中分離株116A具有多重耐藥性對(duì)慶大霉素、阿米卡星、頭孢呋肟、復(fù)方新諾明、克林霉素均有抗藥性。用限制性內(nèi)切酶SMAI對(duì)海產(chǎn)品分離株的基因組DNA酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)電泳分析DNA條帶數(shù)在812條之間具有較好的分型性。聚類分析結(jié)果表明8個(gè)單增李斯特菌海產(chǎn)品分離株中有7個(gè)分屬于2個(gè)PFGE亞型分離株116A自成1個(gè)PFGE亞型。LM1056LM1057和LM6三個(gè)菌株分離自同一加工廠其指紋圖譜基本一致屬同一個(gè)克隆株系LM6為環(huán)境分離株表明成品分離株LM1056和LM1057可能來(lái)自加工環(huán)境。兩株單增李斯特菌奶源分離株H4和320在小鼠和雞胚中的毒力不同對(duì)小鼠的LD50分別為10814和10555320株的毒力與參考菌株接近10549。單增李斯特菌分離株可以在低溫培養(yǎng)條件下穩(wěn)步生長(zhǎng)8℃培養(yǎng)條件下分離株320和H4的生長(zhǎng)速度基本一致培養(yǎng)6天的活菌數(shù)比接種時(shí)分別增加148和205個(gè)LOG培養(yǎng)9天的活菌數(shù)比接種時(shí)分別增加241和334個(gè)LOG。在12℃條件下分離株H4的生長(zhǎng)顯著慢于320株培養(yǎng)2天分離株320的活菌數(shù)比接種時(shí)增加341個(gè)LOG而H4株則增加177個(gè)LOGP<005。這些結(jié)果提示消毒牛奶一旦受到環(huán)境中抗性和毒力較強(qiáng)的單增李斯特菌污染可以對(duì)消費(fèi)者健康構(gòu)成潛在威脅。牛奶中的李斯特菌在12℃溫度培養(yǎng)條件下能夠比較快速生長(zhǎng)若保存牛奶的溫度在8~12℃波動(dòng)其實(shí)際保質(zhì)期將明顯縮短。在8%NACL條件下培養(yǎng)兩個(gè)分離株與參考菌株10403S的相對(duì)存活率的變化趨勢(shì)基本一致。而在PH30條件下分離株的相對(duì)存活率高于參考菌株10403SP<005。PH30~70和NACL濃度范圍05~10%對(duì)單增李斯特菌的生長(zhǎng)呈現(xiàn)交互作用即隨著NACL濃度的增加和PH值的下降細(xì)菌的生長(zhǎng)速度逐漸減慢、滯后期漸長(zhǎng)。上述結(jié)果表明單增李斯特菌分離株的環(huán)境適應(yīng)性比參考菌株10403S強(qiáng)。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)單增李斯特菌分離株的毒力、藥敏性、環(huán)境適應(yīng)性和PFGE分型等研究為今后進(jìn)一步開(kāi)展該菌對(duì)食品污染的風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估和HACCP體系中關(guān)鍵控制點(diǎn)的建立奠定基礎(chǔ)對(duì)預(yù)防食源性李斯特菌病具有重要意義。
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簡(jiǎn)介:第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文CSRC基因?qū)δI癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其臨床意義研究RESEARCHONTHEINFLUENCEOFCSRCGENEONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFRENALCELLCARCINOMAANDITSCLINICALSIGNIFICANCE研究生姓名指導(dǎo)教師專業(yè)名稱培養(yǎng)單位陳俊明王林輝教授外科學(xué)泌尿外科第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院泌尿外科二。一五年四月目錄中文摘要1英文摘要3英文縮略詞表5前言6日U吾O第一部分慢病毒載體介導(dǎo)的CSRCSHRNA基因的制備及敲減效果的驗(yàn)證一、材料10二、方法11三、結(jié)果22四、討論33五、結(jié)論33參考文獻(xiàn)35第二部分CSRC基因敲減后對(duì)人腎癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響一、材料36二、方法37三、結(jié)果41四、討論47五、結(jié)論47參考文獻(xiàn)48
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簡(jiǎn)介:/尹必05226分類號(hào)墮絲題單位代碼學(xué)號(hào)中回鏨升夫零碩士學(xué)位論文10159200327454目?jī)H1,2一巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響AL,2一FUCOSYHRANSFERASEGENETRANSFECTIONINFLUENCESBIOLOGICALBEHAVIOROFOVARIANCARCINOMADERIVEDRMGICELLS研究生塑童萱導(dǎo)林蓓學(xué)科專業(yè)塑£壁堂論文課題起止時(shí)間蘭QQ蘭生壘旦二蘭堂生旦論文完成時(shí)間呈Q鰻生姐中文論著摘要D1,2一巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響剛吾卵巢癌在婦科惡性腫瘤中死亡率最高。發(fā)病原因不清,缺乏早期診斷方法,晚期者治療效果差,愈后不佳。侵襲、轉(zhuǎn)移是影響愈后,導(dǎo)致死亡的主要原因。所以闡明轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)于預(yù)防轉(zhuǎn)移、指導(dǎo)治療有著重要意義。上皮性卵巢癌中75%出現(xiàn)LEWISY不同程度的過(guò)量表達(dá);對(duì)于作為上皮性卵巢腫瘤標(biāo)記物CA。。結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果表明,其中含有LEWISY結(jié)構(gòu),說(shuō)明LEWISY與上皮性卵巢癌有關(guān)。本研究將外來(lái)人O【1,2一巖藻糖轉(zhuǎn)移酶儀1,2一FUCOSYHRANSFERASE,D1,2一FI“基因轉(zhuǎn)入卵巢癌細(xì)胞內(nèi)使其表達(dá),建立ⅨL,2一FT及LEWISY高表達(dá)細(xì)胞株為了研究糖鏈的生物學(xué)作用提供了卵巢癌細(xì)胞模型。通過(guò)各種生物化學(xué)、免疫學(xué)等研究方法,研究?jī)HL,2一FT基因?qū)β殉舶┘?xì)胞生物學(xué)特性的影響。探討LEWISY抗原與惡性腫瘤發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。材料與方法一、材料1細(xì)胞系、質(zhì)粒及菌株質(zhì)粒PCDNA31一,含有0IL,2一FT基因真核表達(dá)重組體HFUTH,人卵巢癌細(xì)胞系RMGI,均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)婦產(chǎn)科教研室林蓓教授惠贈(zèng)。2主要試劑超純質(zhì)粒提取試劑盒,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑盒,G。。鼠抗人LEWISY單克隆抗體,SABC試劑盒,DMSO,DMEM,胎牛血清。二、實(shí)驗(yàn)方法1
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簡(jiǎn)介:分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)(UDC)第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文牙根發(fā)育期相關(guān)間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究(題名和副題名)韓春(作者姓名)指導(dǎo)教師姓名段銀鐘教授金巖教授指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院正畸科、病理科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學(xué)正畸學(xué)論文提交日期200904答辯日期200905論文起止時(shí)間2007年3月至2009年4月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)牙根發(fā)育期相關(guān)間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究研究生韓春研究生韓春學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)(正畸學(xué))所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院正畸科導(dǎo)師段銀鐘教授(主任醫(yī)師)金巖教授(主任醫(yī)師)學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)(正畸學(xué))所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院正畸科導(dǎo)師段銀鐘教授(主任醫(yī)師)金巖教授(主任醫(yī)師)資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金(NO30572046NO30725042)關(guān)鍵詞詞牙根牙周組織工程;牙根發(fā)育期根尖復(fù)合體;間充質(zhì)干細(xì)胞;根端牙囊干細(xì)胞;牙周膜干細(xì)胞中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2009年04月
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簡(jiǎn)介:鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3中側(cè)群細(xì)胞的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究姓名耿麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師索振河;樊青霞201105摘要目前對(duì)腫瘤干細(xì)胞的研究越來(lái)越多,并在多種實(shí)體腫瘤中證實(shí)了腫瘤干細(xì)胞的存在。卵巢癌干細(xì)胞的研究對(duì)認(rèn)識(shí)卵巢癌的發(fā)病機(jī)制、早期診斷以及根治方法提示了新的研究方向。分離和鑒定腫瘤干細(xì)胞是研究腫瘤干細(xì)胞的首要問(wèn)題,但是如果缺乏特異的表面標(biāo)記物,腫瘤干細(xì)胞的分離鑒定就變成一個(gè)難題。側(cè)群細(xì)胞SIDEPOPULATIONCELL,SPCELL,SP細(xì)胞是利用DNA熒光染料HOECHST33342和流式細(xì)胞技術(shù)發(fā)現(xiàn)的特殊細(xì)胞亞群,能通過(guò)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白將熒光染料HOECHST33342泵出細(xì)胞而呈弱染狀態(tài),并因此而得名。側(cè)群細(xì)胞可能是一種特殊類型的干細(xì)胞,具有自我更新、多向分化等一系列干細(xì)胞的生物學(xué)特征。至今人們已經(jīng)在多種實(shí)體腫瘤中分離得到了側(cè)群細(xì)胞。當(dāng)缺乏干細(xì)胞特異標(biāo)記的情況下,SP細(xì)胞分選和分析成為研究腫瘤干細(xì)胞的一種實(shí)用而重要的方法。最近的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤干細(xì)胞的另一重要特征是它們具有間質(zhì)細(xì)胞的特性,它們?nèi)菀壮霈F(xiàn)表皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化EPITHELIALMESENCHYMALTRANSFORMATION,EMT。EMT現(xiàn)象是腫瘤發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的第一步,也是最重要的一步。阻斷腫瘤干細(xì)胞的EMT特性,有可能預(yù)防腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究利用SP細(xì)胞的弱染特性將OVCAR3細(xì)胞系中的SP細(xì)胞分選出來(lái),并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究,為探索以腫瘤干細(xì)胞理論為基礎(chǔ)的新的卵巢癌治療策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法本研究中,首先用免疫細(xì)胞化學(xué)方法分析了干細(xì)胞相關(guān)基因OCT3/4在OVCAR3細(xì)胞中的表達(dá)。隨后將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的OVCAR3細(xì)胞經(jīng)HOECHST33342染色后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分選,通過(guò)對(duì)HOECHST33342濃度和染色時(shí)間的調(diào)整對(duì)SP方法進(jìn)行條件優(yōu)化。對(duì)比維拉帕米抑制實(shí)驗(yàn)在流式細(xì)胞儀上設(shè)門,分別收集熒光陽(yáng)性的NSP細(xì)胞和熒光陰性的SP細(xì)胞,研究它們生物學(xué)性狀的差異,包括將分選后的兩個(gè)亞群的細(xì)胞分別接種到六孔板中,進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn),比較兩個(gè)亞II
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簡(jiǎn)介:Y787869分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)南華大學(xué)碩士學(xué)位論文外源性P16基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究生姓名指導(dǎo)教師姓名、職稱學(xué)科、專業(yè)名稱研究方向羅春華朱建思教授病理學(xué)與病理生理學(xué)腫瘤的病因發(fā)病學(xué)及防治2005年5月外源性P16基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究生羅春華導(dǎo)師朱建思教授中文摘要目的構(gòu)建人P16CDNA重組真核表達(dá)載體。探討轉(zhuǎn)入外源性P16CDNA對(duì)人原發(fā)性肝癌SMMC772I細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制。方法從PBSP16克隆載體中。將人P16CDNA亞克隆入真核表達(dá)載體PCDNA31∽,構(gòu)建含人P16CDNA的重組質(zhì)粒PCDNA31_一P16,并經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定。將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入SLAMC7721緬胞,經(jīng)G418抗性篩選和擴(kuò)增得到穩(wěn)定表達(dá)P16的亞細(xì)胞株及穩(wěn)定表達(dá)PCDNA31∽的對(duì)照亞細(xì)胞株,并經(jīng)RTPCR及免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)法,流式細(xì)胞術(shù),免疫細(xì)胞化學(xué)及WESTERNBLOT等實(shí)驗(yàn)方法,對(duì)外源性P16基因?qū)肴烁伟┘?xì)胞后的細(xì)胞生物學(xué)行為及細(xì)胞周期調(diào)控因子CYCLINDL及PRB進(jìn)行觀察。結(jié)果成功地構(gòu)建含人P16CDNK好重組表達(dá)質(zhì)粒PCDNA3,L。一P16,測(cè)序證明P16CDNA編碼序列與GENBANK中報(bào)道的序列一致。轉(zhuǎn)染外源性P16基因的SMMC一7721細(xì)胞有外源性P16基因的整合及表達(dá),細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯減慢,細(xì)胞群體倍增時(shí)間明顯延長(zhǎng)37,8HVS243H,G1期細(xì)胞明顯多于轉(zhuǎn)基因前579%VS415%PO05;免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示外源性P16表達(dá)可下調(diào)CYLINDL的表達(dá)PO05,WESTERNBLOT分析提示轉(zhuǎn)染外源性P16基因后細(xì)胞中磷酸化PRB水平明顯降低。結(jié)論1、成功構(gòu)建含人P16CDNA的重組表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31一P162、外源性P16基因?qū)肴烁伟┘?xì)胞株SMMC一7721細(xì)胞中可穩(wěn)定表達(dá)并使細(xì)胞周期停滯在GL期,抑制細(xì)胞生長(zhǎng);3、外源性P16基因抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制可能與下調(diào)CYCLINDL表達(dá),抑制PRB磷酸化相關(guān)。關(guān)鍵詞肝腫瘤P16基因治療;G1期阻滯CYCLINDLPRB
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簡(jiǎn)介:蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果,也不含為獲得蘇州大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)體和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名弦L塹墜日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文,可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名盈I塹塾日期導(dǎo)師簽名日期
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