白血病患者中乙型肝炎病毒感染及隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：了解白血病患者中HBV感染及隱匿性HBV感染的檢出率,并探討其與研究對(duì)象年齡、性別、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果以及乙型肝炎病毒標(biāo)志物之間的關(guān)系,同時(shí)從S基因變異角度探討白血病患者隱匿性HBV感染可能的分子機(jī)制。
　　方法：①病例選擇和標(biāo)本收集:收集2010年9月~2011年11月在我院血液科住院的白血病患者257例,所有病例均經(jīng)骨髓細(xì)胞學(xué)檢查確診為白血病,排除酒精性及自身免疫性肝病患者;另選同期我院骨科住院的骨折病人377例作為對(duì)照組。

2、②HBVDNA提取:采用經(jīng)典蛋白酶K消化-酚/氯仿法。③巢式PCR法檢測(cè)HBVDNA:參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)及HBV參照序列,在HBV基因組S、C、X區(qū)分別設(shè)計(jì)一對(duì)巢式引物。巢式PCR擴(kuò)增,當(dāng)任兩個(gè)區(qū)及以上同時(shí)陽(yáng)性者定義為隱匿性HBV感染者。④雅培ArchitectI2000R電化學(xué)發(fā)光儀定量檢測(cè)隱匿性HBV感染者的HBV血清學(xué)標(biāo)志物,對(duì)隱匿性HBV感染者與非感染者進(jìn)行性別、年齡、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果以及HBV血清標(biāo)志物等的比較。⑤擴(kuò)增HBVDNA陽(yáng)

3、性者小S區(qū)測(cè)序:根據(jù)HBV參照序列,在S區(qū)設(shè)計(jì)引物,對(duì)隱匿性HBV感染者以及HBsAg陽(yáng)性的白血病患者進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序,并進(jìn)行基因型、HBsAg“α”決定簇突變分析,發(fā)現(xiàn)可能和隱匿性HBV感染有關(guān)的變異位點(diǎn)。
　　結(jié)果：①257例在白血病患者中,HBsAg陽(yáng)性率為10.9％(28/257),顯著高于對(duì)照組的5.6%(P<0.01);急性髓性白血病(AML)和慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)患者血清HBsAg陽(yáng)性率分別為10.9%和33.

4、3%,顯著高于骨折人群(P<0.05);白血病患者中HBsAg陽(yáng)性者較HBsAg陰性者的ALT異常率明顯增高,分別為35.7%vs19.3%(P=0.04),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②在229例HBsAg陰性的白血病中,隱匿性感染者有27例,隱匿性HBV感染的檢出率為11.8%(27/229)。實(shí)驗(yàn)組的年齡、性別分布、生化學(xué)檢測(cè)結(jié)果等與對(duì)照組相比,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在隱匿性HBV感染組,抗-HBc陽(yáng)性率為44.4%(12/27),明顯高于對(duì)

5、照組的23.8%(48/202),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022)。③白血病患者中隱匿性HBV感染者共檢測(cè)到2種基因型(HBV/B,HBV/C),其中HBV/C基因型占優(yōu)勢(shì),22例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/C(18例),HBV/B(4例),其基因型與白血病合并慢性HBV感染者的基因型對(duì)比,有明顯的差異性(P=0.029)。④白血病中,27例隱匿性HBV感染者中共22人有S區(qū)測(cè)序結(jié)果,其中1例隱匿性HBV感染者出

6、現(xiàn)了插入突變,另4例提前形成終止密碼,形成縮短的氨基酸序列,共有12例在MHR區(qū)存在變異,其中8例發(fā)生I/126T變異,4例N146S變異,兩例發(fā)生聯(lián)合突變,分別是Q129R、D144E、S155Y和I126T、S143T聯(lián)合突變。
　　結(jié)論：①白血病患者的HBsAg陽(yáng)性率及隱匿性HBV感染的檢出率均較高。②在白血病患者中,隱匿性HBV感染更多見于抗-HBc陽(yáng)性的患者。③白血病患者中隱匿性HBV感染者與HBsAg陽(yáng)性的白血病患者基