簡介：東北農業(yè)大學碩士學位論文共表達GPMVF基因和GPVVP3基因重組禽痘病毒生物學特性研究姓名李丹申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師王君偉20090620東北農業(yè)大學農學碩士學位論文IIIBIONOMICSSTUDIESOFRECOMBINANTFOWLPOXVIRUSESCOEXPRESSINGGPMVFGENEGPVVP3GENEABSTRACTINTHESTUDYTHEPRELIMINARYSTUDIESONTHEPHYSICALCHEMICALPROPERTIESOFRFPVVP3FGEICSTABILITYOFRFPVVP3FEXPRESSINGOFFGENEVP3GENEINCEFTHEEXPRESSINGOFFGENEVP3GENEINTHECHICKENWERECARRIEDOUTTHEVIRUSWASPURIFIEDTHENTHEEXISTENCEEXPRESSIONOFTHEFEIGNGENESWEREIDENTIFIEDBYPCRDOTELISAINTHESTUDYOFPHYSICALCHEMICALTHERECOMBINANTFOWLFOXVIRUSRGPVVP3FWHICHHASBEENTREATEDBYPHYSICALCHEMICALFACTSWEREINOCULATEDINTOCEFTHENTHEDIFFERENTINFECTIONTITERWEREOBSERVEDBETWEENTHETREATMENTUNTREATMENTVIRUSESPARTOFTHECHEMICALPROPERTYWEREVERIFIEDTHEOPTIMUMVIRALMULTIPLICATIONWEREDEFINITEDBYOBSERVEDTHEEFFECTSOFDIFFERENTCELLNUMBERDIFFERENTMOIWHENTHECELLDENSITYIS105CM2MOIIS001THETITEROFTHEVIRUSWILLACHIVEDTO308105100ULINTHEGEICSTABILITYSTUDIESOFRECOMBINANTFOWLPOXVIRUSTHERECOMBINANTFOWLPOXVIRUSONTHECEFWEREPASSAGEDF20GENERATIONSTHENTHE5TH10TH15TH20THGENERATIONSOFRECOMBINANTFOWLPOXWERECHOSENTOIDENTIFYTHEFGENEVP3GENE’SGEICSTABILITYTHERESULTSHOWNTHATBULEPLAQUEPERCENTAGEOFTHESEFOURGENERATIONIS100NOWHITEPLAQUEWEREOBSERVEDWHICHMAYOCCURWHENTHEFEIGNGENESWERELOSSUSETHE5TH10TH15TH20THGENERATIONSOFRECOMBINANTFOWLPOXVIRUSDNAASATEMPLATEFPCRAMPLIFICATION460BPFPARTLYAMPLIFIEDGENEFRAGMENT657BPVP3PARTLYGENEFRAGMENTWEREACQUIREDUSINGTHEOTHERTWOPAIRSOFPRIMERATOTALLENGTHOFTHEFGENETOTALLENGTHVP3GENEWEREAMPLIFIEDAFTERSEQUENCINGTHEGENEDEROF5TH10TH15TH20THGENERATIONSWERECOMPAREDWITHTHEGENEDEROFIGINALGENERATIONFGENEOFGPMVHADTWONUCLEOTIDECHANGEDBUTAMINOACIDDIDN’TCHANGEDVP3GENEOFGPVHADTHREENUCLEOTIDECHANGEDAMINOACIDDIDN’TCHANGEDTOOUSINGINDIRECTIMMUNOFLUESCENCETESTTOIDENTIFYTHEEXPRESSIONOFFGENEVP3GENEOFTHE5TH10TH15TH20THGENERATIONRECOMBINANTFOWLPOXVIRUSRESULTSFROMEXPERIMENTSHOWNTHATTHETWOFEIGNGENESOFTHERECOMBINANTFOWLPOXCANBESTABLYEXPRESSEDINCEFTHERECOMBINANTFOWLPOXHAVEGOODGEICSTABILITYTHEFEIGNGENEDIDN’TBELOSTINTHEPROCESSOFPASSAGEFGENEVP3GENECANEXPRESSCRESPONDINGPROTEINCRECTLY35DAYSOLDCHICKENWEREINOCULATEDWITHTHERFPVVP3FBY106PFUMLBLOODWERECOLLECTED7D14D21D28D35DAFTERIMMUNIZATIONTHESERUMWERESEPERATEDTHEANTIBODYLEVELSANTIGPVFWEREDETECTEDTHROUGHNEUTRALIZATIONTESTTHEANTIBODYLEVELS

簡介：山東農業(yè)大學碩士學位論文鴨副粘病毒分離鑒定、F基因序列分析及生物學特性研究姓名紀巍申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師刁有祥20090614鴨副粘病毒分離鑒定、F基因序列分析及生物學特性研究膜出血、肺臟出血、十二指腸黏膜彌漫性出血。為確定發(fā)病原因，我們對死亡鴨胚、1日齡的病死鴨及出現神經癥狀的雛鴨進行了病原的分離、鑒定，確定為副粘病毒，命名為SDFCH株，對該分離株的生物學特性進行了研究。毒力測定結果表明該病毒雞肝平均致死亡時間MDT為566H；1同齡SPF雞腦內接種分離病毒致病指數ICPI為1786周齡SPF雞靜脈接種致病指數IVPI為259。攻毒雛鴨生長緩慢，精神沉郁，剖檢可見氣管彌漫性出血、肺臟出血、腺胃乳頭出血、胰臟出血、十二指腸黏膜彌漫性出血，個別雛鴨腦膜出旭。第二部分鴨副粘病毒山東株F基因克隆與序列分析對20062008年從山東省不同地區(qū)規(guī)?；唸霾杉囊伤气喐闭巢《静“Y狀的病料進行了鴨副粘病毒的分離鑒定及F基因克隆和序列分析，結果表明F基因的核苷酸序列較穩(wěn)定，不同地區(qū)6株鴨副粘病毒毒株的F基因全基因組序列均由1662BP組成，彼此間核苷酸序列同源性達953％一998％，親緣關系密切；與GENBANK已發(fā)表的鴨副粘病毒參考毒株的同源性介于874％978％；與GENBANK已發(fā)表的鵝副粘病毒參考毒株的同源性介于957～984％；與傳統(tǒng)的疫苗株LASOTA株的同源性在877％～883％之間；與F48E9的同源性在903‰910％之間。系統(tǒng)進化樹分析表明這6株毒株與江蘇、黑龍江、廣東的鵝副粘病毒毒株和鴨副粘病毒毒株親緣性較近，屬于同一分支。本研究對所測定的6株鴨副粘病毒毒株F基因所對應的氨基酸序列分析表明6株毒株之間的氨基酸同源性為953％～980％；與GENBANK已發(fā)表的鴨源副粘病毒的氨基酸同源性為8740／0975％；與鵝源副粘病毒的氨基酸同源性為964％～984％與傳統(tǒng)的疫苗株LASOTA株的氨基酸同源性為879％～883％；與F48E9的氨基酸同源性為901％91O％。6株毒株與鵝源副粘病毒的親緣性較近，因此推測鴨副粘病毒是由鵝源副粘病毒進化而來。2

簡介：東北農業(yè)大學碩士學位論文鵝細小病毒98E鴨胚致弱株的培育及生物學特性研究姓名王春媛申請學位級別碩士專業(yè)獸醫(yī)學；預防獸醫(yī)學指導教師王君偉20120620ABSTRACTRESEARCHANDBIOLOGICALCHARACTERIZATIONOFADUCKEMBRYOATTENUATEDSTRAINOFGOOSEPARVOVIRUS98EABSTRACTGOOSEPARVOVLRUSINFECTIONALSOKNOWNASGOSLINGPLAGUEORDERZSY’SDISEASE，MAINLYINFECTS4DAYOLDTO20DAYOLDDOMESTICGOSLINGSANDMUSCOVYDUCKINGS．THESHORTCOURSEOFTHEDISEASE，RAPIDTRANSMISSION，ANDAHIGHMORTALITYRATE，CAUSINGSERIOUSECONOMICLOSSES，IT’SONEOFTHEIMPORTANTINFECTIOUSDISEASESOFGOOSECULTURALINDUSTRY．GGOSLINGPLAGUEWASPREVENTEDMAINLYTHROUGHIMMUNIZINGGOOSEWITHTHEGPVGOOSEEMBRYO／DUCKEMBRYOATTENUATEDVACCINEANDINACTIVATEDVACCINEANDTHENTHEGOSLINGACQUIREANTIBODYAGAINSTTHEGOSLINGPLAGUE．THISSTUDYUSEDTHECULTIVATEGOOSEPARVOVIRUSDUCKEMBRYOATTENUATEDSTRAINGPV98D15WITHCONTINUOUSLYPASSAGINGIN9DAYOLDSPFDUCKEMBRYO，IDENTIFIEDTHEVIRALNUCLEICACIDOFTHEDIFFERENTGENERATIONSBYPCRANDDETERMINEPARTSOFBIOLOGICALCHARACTERISTICSDURINGTHEGENERATIONPROCESS．THERESULTSOFTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFGOSLINGPLAGUEDUCKEMBRYOATTENUATEDSTRAINSGPV98D15SHOWEDTHATDUCKEMBRYOCOULDNOTDIEFROMFITOF10，STARTGRADUALLYDIEDFROMF11TOF13．BEGINNINGWITHF14，LETHALITYRATEOFDUCKEMBRYOKEEPSTABLEAT100％．THELETHALTIMEOFDUCKEMBRYOREPRESENTSHORTREGULARLY．THEDEADBODIESOFDUCKEMBRYOWERECONGESTED，ANDTHELOCUSOFHEMORRHAGEMAINLYCONCENTRATEDINTHEHEAD，NECK，CHESTANDLEGS，WHICHARECONSISTENTW．ITHTHEFEATUREOFGPVPATHOLOGICALCHANGES．ITWASSUCCESSFULLYCLONEDTHEGPV98D15STRAINNSLGENEANDVPLGENEBYPCR；THEVPLGENEOFGPV98D15STRAINANDGPV98ESTRAINHADPARTIALNUCLEOTIDESEQUENCEMUTATION．THEGPV98D15STRAINATTENUATEDSTABILITYANDSAFETYBYDUCKEMBRYOLETHALDOSE，THEPATHOGENICITYTESTOFGOOSEEMBRYOANDSAFETYTEST．GPV98D15VIRUSCOULDINFECTDUCKEMBRYOFIBROBLASTS．ITCANBEUSEDDUCKEMBRYOFIBROBLASTSINFECTEDANDHALFTHEAMOUNTOFINDIRECTIMMUNOFLUORESCENCEIFATODETERMINATION．WECOMPAREDTHEIMMUNOGENICISONOFARENUATEDSTRAINSWITHTHECOMMERCIALVACCINESSYG4150．IMMUNING20DAYOLDGOSLINGSWITHGPV98DJ5STRAINORSYG4150，ANTIBODYLEVELRISESCEASELESSLY，REACHEDAPEAKATFIFTHWEEKS．ANDTHENDECLINESLOWLYBYELISA，AGARDIFFUSIONTESTANDNEUTRALIZATIONTEST．ANTIBODYLEVELOFGPV98D15IMMUNEGROUPISSLIGHTLYLOWCOMPAREDWITHCOMMERCIALVACCINESYG41～50，BUTTHEREISNOSIGNIFICANTDIFFERENCEFPD．05．DETECTIONOFIMMUNEGPV．98D15STRAINTOMAKESMALLGOOSEPRODUCESGPVSPECIFCNEUTRALIZINGANTIBODYBYNEUTRALIZATIONTEST．THEGOSLINGSACQUIREDPROTECTIVEIMMUNITY．THEREFORE，THERESEARCHPROVIDEDASAFE，EFFECTIVE，NOSEASONLIMITATIONOFCANDIDATESTRAINS，ITALWAYSTHEMATERIALFOUNDATIONFORGOSLINGPLAGUEVIRUSAFIENUATIONMECHANISMRESEARCH．．KEYWORDSGOSLINGPLAGUE；ATTENUATEDSTRAIN；SAFETY；IMMUNOGENICITYII

簡介：中山大學博士學位論文石斑魚虹彩病毒（SGIV）囊膜蛋白組學及兩個新結構蛋白基因的鑒定和功能初步研究姓名萬晴姣申請學位級別博士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師秦啟偉20090606萬晴姣石斑魚虹彩病毒SGIV囊膜蛋自組學及兩個新結構蛋自基兇的鑒定和功能初步研究VP90在病毒感染過程中可能起重要作用。為了弄清病毒結構蛋白在病毒感染中的作用，結合生物信息學分析，我們選取ORF038L作為候選基因進行研究，SGIVORF038L編碼170個氨基酸，含有一個保守的RGD結構域。從SGIV全基兇組中克隆了ORF038全長基因，進行了原核表達，并免疫小鼠制備出抗體。轉錄表達時序分析表明，SGIVORF038L在感染細胞后8H開始轉錄，24H開始表達。結合藥物抑制實驗，揭示ORF038是一個晚期基因。免疫熒光顯微鏡觀察，結果顯示VP38在感染細胞中主要聚集在病毒加工廠周圍。WESTERNBLOT和免疫電鏡結果表明VP38定位于病毒衣殼，是一種病毒衣殼蛋白?？贵w中和試驗和PUL1DOWN實驗結果表明SGIVVP38在病毒感染過程中可能起重要作用。關鍵詞SGIV；蛋白質組學；囊膜蛋白；衣殼蛋白；亞細胞定位；抗體中和N

簡介：山東農業(yè)大學博士學位論文鴨圓環(huán)病毒的分子流行病學調查及診斷方法的建立姓名張興曉申請學位級別博士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師柴同杰姜世金20090616鴨圓環(huán)病毒的分子流行病學調查及診斷方法的建立3、櫻桃谷鴨人工感染鴨圓環(huán)病毒的病理動態(tài)變化本研究以已經完成全基因組序列測定的LY0701株DUCV為研究材料，利用感染LY0701株的陽性病料人工接種DUCV陰性的3周齡健康雛鴨，分別于攻毒后第2、4、6、8周對發(fā)病鴨進行病理觀察。結果表明，與對照組相比，LY0701株陽性病料感染的雛鴨臨床癥狀均出現發(fā)育不良，消瘦，羽毛凌亂等現象。剖檢顯示胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟不同程度出血、腫脹，其它內臟器官病變不明顯。病理切片顯示胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟出血，淋巴細胞壞死、崩解等變化。4、DUCVCAP蛋白基因原核表達及產物免疫原性研究根據已發(fā)表的DUCVLY0701株CAP基因序列，設計一對引物，以測序正確的LY0701株CAP基因質粒為模板，擴增出相應的基因片段，以PGEX6P1為載體進行連接，轉化大腸桿菌BL21株，挑選陽性克隆，測序驗證正確后，分別進行原核表達。SDSPAGE電泳表明，表達產物的條帶大小與理論值相符。利用原核表達產物免疫BALB／C小鼠，制備抗CAP蛋白的血清，標記為ABCAP。以FITC標記的羊抗鼠IGG為二抗，建立了間接免疫熒光染色法IFA。利用ABCAP對人工感染病料的檢測表明，在脾臟、法氏囊、胸腺、肝臟的冷凍切片中可檢測到被熒光染色的完整的細胞；在心臟、肺臟、腎臟等病料中未檢測到熒光染色的陽性細胞。為進一步確定IFA檢測的敏感性，臨床上分別收集疑似DUCV感染的96只鴨子的胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟、骨髓，利用IFA進行DUCV檢測。結果表明，當鴨子感染DUCV后，脾臟的病毒檢出率最高，達到1875％，其它臟器的病毒檢出率從高到低依次為法氏囊、肝臟、胸腺。利用ABCAP對臨床病例檢測表明，該方法更適合用于8周齡以上鴨子的脾臟檢測。5、DUCV在不同組織及細胞中培養(yǎng)的探討對PCR檢測DUCV強陽性的5份病料LQ76，LQ66，LQL4，LY5，WS23進行處理并1通過鴨胚的卵黃囊、絨毛尿囊膜、尿囊腔等組織進行接種，2鴨胚成纖維細胞、鴨胚肝細胞、鴨胚腎細胞、鴨胚脾細胞接種陽病料組織，將收獲的組織和細胞2

簡介：揚州大學博士學位論文感染馬立克氏病病毒SPF雞法氏囊蛋白質組學研究姓名盧占軍申請學位級別博士專業(yè)基礎獸醫(yī)學指導教師秦愛建20090501II揚州大學博士學位論文重萎縮，濾泡內淋巴細胞排列松散，濾泡間質增寬，肌細胞層彌漫性增生。同時利用半定量RTPCR技術檢測不同階段法氏囊中MDV的GB和MEQ基因的MRNA相對表達水平。結果顯示MDVMEQ基因的MRNA水平在7DPI、21DPI時明顯增高，21DPI時達到差異極顯著；MDVGB基因在4DPI和21DPI時顯著性增高，而在潛伏期7DPI和14DPI時則明顯下降，這些數據顯示MDV在感染雞法氏囊中復制正常，也為后期的病毒感染宿主差異蛋白質組學研究提供了條件。3馬立克氏病病毒感染后法氏囊組織的蛋白質組學研究采用2DE技術，對RBLB感染的SPF雞和對照組雞的法氏囊在不同感染階段4DPI、7DPI、14DPI和2LDPI的組織樣品進行了蛋白質組分離，利用PDQUEST801軟件對2一DE圖譜進行分析，對其中的部分差異點進行質譜鑒定。結果平均每塊膠能檢測到800900個蛋白點，四個階段共有77個差異蛋白點，利用統(tǒng)計分析方法篩選出差異極顯著且變化有規(guī)律的蛋白點29個，其中表現為持續(xù)上調的有13個，持續(xù)下調的有10個，先期上調后期下調的2個，先期下調后期上調的4個。對這些蛋白點進行切膠消化，用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜MATRIXASSOCIATEDLASERDISSOCIATION／IONIZATIONTIMEOFNIGLL仃NASSSPEC仃OMETMMALDITOFMS進行鑒定分析。共鑒定出24個蛋白，它們是載脂蛋白AIAPOAI、白血病相關蛋白18LAPL8、癌蛋白18OPL8、脅相關蛋白RABLLA、兩種熱休克蛋白27HSP27、BUB同系蛋白、含硫氧還蛋白域5TNDC5、伴侶素蛋白CCT、D2微球蛋白BMG、熱休克蛋白40HSP40、磷酸甘露糖變位酶蛋白、慢骨骼肌肌鈣蛋白T、蛋白質二硫化物異構酶A3前體、DUTP焦磷酸酶蛋白、D樣不均一核核糖核蛋白、醛縮酶C蛋白、胰蛋白、LOCL29607類似蛋白、含錯配修復酶假定蛋白、含GTP嬲E假定蛋白、兩種含GAL‰E1樣結構域假定蛋白。另外，還發(fā)現了兩個數據庫中沒有的禽源蛋白，這有待于更進一步的研究。通過數據庫查詢和生物信息學分析，證實這些已知的差異蛋白與新陳代謝相關的占19％，與蛋白質折疊相關的占15％，與細胞增殖和調亡相關的占15％，與信號轉導相關的占22％，與免疫相關的占15％，與細胞骨架結構相關蛋白的占7％，其它占7％。在此基礎上結合現有的文獻報道，對這些差異蛋白質的功能、與病毒感染發(fā)病關系以及腫瘤相關方面進行分析討論。提出APOAI持續(xù)的過量表達可能與MDV病毒粒子跨膜感染機制有關，同時以APOAI過表達為主導的脂類代謝紊亂可能是最終導致MDV感染易引起動脈粥樣硬化的主要原因；L廿18和OPL8的波動性調節(jié)可能與MDV引起的腫瘤形成早期有關；RBLB誘導的HSP27蛋白過量表達可能有利于其子代病毒大量產生持續(xù)上調表達的R盈B11A蛋白可能與MDV細胞內轉運，囊泡出芽，逃避免疫或復制機制有關，RABLLA也有

簡介：河南農業(yè)大學碩士學位論文河南省豬乙型腦炎血清流行病學調查及乙型腦炎病毒河南地方株的分離鑒定姓名崔光輝申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師陳陸20090501河南農業(yè)大學2009屆獸醫(yī)碩士畢業(yè)論文IDENTIFICATIONANDISOLATIONOFJAPANESEENCEPHALITISVIRUSANDTHEPIGBLOODSERUMEPIDEMIOLOGYINVESTIGATIONOFHENANPROVINCESUPERVISORPROFCHENLUMASTERCANDIDATECUIOUAN曲UIABSTRACTJAPANESEENCEPHALITISWASONEKINDOFCENTRALNERVOUSSYSTEM’SACUTEINFECTIOUSDISEASEAFTERMOSQUITOBITEDISSEMINATIONTHREATENSERIOUSLYHUMANANDANIMALSHEALTH111EPIGWASJAPANESEENCEPHALITISVIRUS’SIMPORTANTSTORAGEHOSTANDINCREASESTHEHOST，ANDWASIT’SMAINORIGINOFINFECTIONTOPREVENTJAPANESEENCEPHALITIS’SUNPOPI_TLARITYEFFECTIVELYPROTECTSTHEHUMANANDANIMALSSECURITYHASCONDUCTEDTHEINVESTIGATIONANDSTUDYTOTHEHENANPROVINCEPIGINFECTIONENCEPHALITISVIRUSSITUATIONTHISEXPERIMENTMAKEDTHEAPPRAISALFIRSTFROMTHESEROLOGYASPECTTOJAPANESEENCEPHALITISVIRUS’SIMMUNITYPROTECTIONSITUATION，ALSOHADCARRIEDONTHISVIRUS’SSEPARATIONAPPRAISALFROMTHEMOLECPLARBIOLOGYASPECTTOTHESUSPICIOUSCASESINCEMAY’2008，MYLABORATORYHADCOLLECTED801BLOODSERUMSFROM12CITYCERTAINPIGFARMSWHICHALREADYIMMUNITIEDJAPANESEENCEPHALITISOFHENANPROVINCE，THEJEVIGGIMMUNEBODYWEREEXAMINATIEDBYPIGJAPANESEENCEPHALITISVIRUSELISAIMMUNEBODYEXAMINATIONREAGENTBOXANDCARRIEDONTHEANALYSISPIGJAPANESEENCEPHALITISPOPTLARSITUATIONSOFHENANPROVINCEDURING2008YEARTHE22DOUBTFLALJAPANESEENCEPHALITIS’SMATERIALWERESEPERATEDANDCHARACTRIZEDFROMSICKNESSMORBIDITYPIGFARM’SOFTHEHENANPROVINCEVARIOUSAREAWITHCELLCLALTURE’SMETHODSEPARATIONVIRUS，CARRIESONTHERTPCRAPPRAISALTOTHENEWSEPARATION’SVIRUSTHERESULTISASFOLLOWS1GTHEJAPANESEENCEPHALITISANTISERUMBODYMASCI_TLINERATEWAS4794％OFOUTPROVINCE，INSOMEAREASPIGFARMSTHEIMMUNEBODYMASCLALINERATEWASONLY1O00％BECAUSEAFTEREXAMINESTHEBLOODSERUMISTHEVACCINEIMMUNITYBLOODSERUM，THEREFORE，ENTIREPROVINCEPIGFARMIMMUNITYPROTECTIONRATIOINSUFFICIENT50％，ISGENERALLYLOWWHICHALEINHIGHRISKSENDTHEAREAT至DIFFERENTSEASONSFROMTHECONTRAST，IN56MONTHTHEPOSITIVERATEOFJAPANESEENCEPHALITISWASLOWLESSTHAN40％，ANDINAUGUSTTHEHIIGHESTSERUMANTIBODYPOSITIVERATE，REACHING5599％，FOLLOWEDINJPLYREACHING4750％，WHICHAREPROBABLYFARMSINGENERALINTHE

簡介：福建農林大學碩士學位論文雙生病毒的檢測及對煙粉虱生物學特性的影響姓名歐陽智剛申請學位級別碩士專業(yè)植物病理學指導教師王聯德20100401福建農林大學碩士學位論文STUDYOILDETECTIONOFGEMINIVIRUSANDITSIMPACTONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFBEMISIATABACIABSTRACTGEMINIVIRUSESTESTEDINTHISPAPERINVOLVEDRAMIEMOSAICVIRUSRAMOV，PAPAYATEAFCURLGUANGDONGVIRUSPALCUGUVANDAGERATUMYELLOWVEINVIRUSAYVV．WESTUDIEDTHETRANSMISSIONOFTHOSETHREEGEMINIVIRUSBYBEMISIATABACIBBIOTYPE．WESTUDIEDTHEIMPACTSOFPALCUGUVONTHEDEVELOPMENTTIME，FECUNDITY,LONGEVITYANDFEEDINGAMOUNTOFB．TABACIUNDERTHEDIFFERENTTEMPERATURESANDHOSTPLANTS．THEMAJORFINDINGSAREASFOLLOWS1B．TABACICANTRANSMITRAMOV,PALCUGUV,AYVVANDAVVVPEFFICIENTLY,THOSEGEMINIVIRUSESCOULDINJECTEDDIFFERENTSPECIESOFHEALTHYTOBACCOAFTERTRANSMISSION，ANDTHENTOBACCOSHOWEDTHESYMPTOMOFGEMINIVIRUSES．2THEDEVELOPMENTTIMESOFINFECTEDB．TABACIWERELONGERTHANTHATOFHEALTHYB．TABACIUNDERTHETEMPERATURESTESTED．THEDIFFERENCESWERESIGNIFICANTUNDERTHEFORMERFOURTEMPERATURES．THEOPTIMUMTEMPERATURESOFINFECTEDANDHEALTHYB．TABACIWEREBOTH25TO28℃，ANDDEVELOPMENTTIMESWERESHORTERTHANTHATOFOTHERTEMPERATURES．3THEDEVELOPMENTTIMESOFDIFFERENTSTAGESOFINFECTEDB．TABACIONAGERATUMCONYZOIDESWERELONGERTHANTHATOFHEALTHYB．TABACIONIPOMOEABATATASLAM，RESPECTIVELYEXCEPTED2加INSTARNYMPHS，ANDTHERESULTOFHEALTHYB．TABACIWASSAME．4THEHATCHINGRATEOFINFECTEDB．TABACIWEREHIGHERTHANTHATOFHEALTHYB．TABACI，HOWEVERTHEREWASNOSIGNIFICANTDIFFERENCEEXCEPTEDUNDERTHECONDITIONOF31℃．THELIFETIMEOFINFECTEDFEMALEB．TABACIWASLONGERTHANTHATOFHEALTHYFEMALEB．TABACI,ANDTHEFECUNDITYOFINFECTEDFEMALEB．TABACIWASALSOMORETHANTHATOFHEALTHYFEMALEB．TABACIAT26。C．THEAREAOFHONEYDEWOFINFECTEDB．TABACIWEREALLSMALLERTHANTHATOFHEALTHYB．TABACIUNDERDIFFERENTTEMPERATURECONDITIONSONAGERATUMCONYZOIDES．THEE位CTSOFVIRUSANDTEMPERATUREONFEEDINGAMOUNTOF2

簡介：山東農業(yè)大學碩士學位論文兩個馬鈴薯Y病毒分離物的生物學和分子特性姓名王彪申請學位級別碩士專業(yè)植物病理學指導教師李向東20090608兩個馬鈴薯Y病毒分離物的生物學和分子特性ABSTRACTPOTATOVIRUSYIFVⅥISONEOFTHEMOSTWIDESPREADVIRUSESANDCAUSESHUGELOSSESTOSOLANACEOUSCROPSINCLUDINGPOTATO，TOBACCO，EGGPLANTANDTOMAT0TWOPVYISOLATES，AQ4ANDFZ10，WEREISOLATEDFROMTOBACCOPLANTSINAIQIUANDTAI’ANOFSHANDONGPROVINCEBOTHISOLATESCOULDINDUCEMOSAICANDMOTTLEIN12TOBACCOCULTIVARSINCLUDINGZHONGYAN100THECOMPLETEGENOMICSEQUENCESOFAQ4ANDFZIOWEREDETERMINEDFROMSEVENOREIGHTOVERLAPPINGCDNACLONESOBTAINEDFROMRTPCRAND5RACEEXCLUDINGTHEPOLYATAIL，THEGENOMEOFAQ4ANDFZL0WERE9700AND9699NUCLEOTIDESINLENGTH，RESPECTIVELYBOTHOFTHEMENCODEDAPOLYPROETINOF3061AMINOACIDS，WHICHWASTHENCLEAVEDINTOTENPRODUCTSBYTHREEVIRUSENCODEDPROTEASESAQ4SHAREDHIGHESTIDENTITYOF973％WITHISOLATE2614ATNUCLEOTIDELEVEL，WHILEFZL0SHAREDHIGHESTIDENTITYOF952％WITHPVY12BOTHAQ4ANDFZL0WERERECOMBINANTSOFNANDOPARENTSTHENUCLEOTIDESNT1496AND24979700OFAQ4GENOMEWEREFROMISOLATEOZPVF’，WHILENT4972496FROMISOLATECH605PVYSTHENT1496AND24976533OFFZ10GENOMEWEREFROMISOLATESASA110PVN，WHILENT4972496AND65349699WERE￡舊MISOLATECH605PVYN碭EPHYLOGENETICANALYSISRESULTSSHOWEDTHATAQ4WASCLUSTEREDTOSTRAINPVYN0WHILEFZL0PVYN州BOTHOFTHEMHADN邯EHCPROHOWEVER，NEITHEROFTHEMINDUCEDNECROSISONTOBACCOTHESEREULSTSIMPLIEDTHATTHEREEXISTEDOTHERMOTIFBESIDESHCPREGULATINGTHEVEINALNECROSISSYMPTOMINPVYGENOMEKEYWORDSPOTATOVIRUSY；GENOME；MOTIFIREEOMBINANTION；HCPRO2

簡介：東北農業(yè)大學碩士學位論文表達牛輪狀病毒VP7蛋白重組干酪乳桿菌的構建及其免疫學初步分析姓名張冠群申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師李一經20090620東北農業(yè)大學農學碩士學位論文VICONSTRUCTIONOFRECOMBINANTLACTOBACILLUSCASEIEXPRESSIONVP7OFBOVINEROTAVIRUSIMMUNOGENICITYANALYSISABSTRACTBOVINEROTAVIRUSBELONGEDTOREOVIRIDAEFAMILYROTAVIRUSGENUSITWASTHEMAJPATHOGENOFCALFNONBACTERIALDIARRHEATHEVIRUSUSUALLYINFECT1540DAYAGECALVESTHECLINICALSYMPTOMAREDEPRESSEDEMESIALOSEAPPETITEDIARRHEASEVEREDEHYDRATIONACIDPOISONINGIFITWASACCOMPANYINFECTEDBYBOVINECONAVIRUSBACTERIATHEMTALRATECANREACHUPTO80THISDISEASEHASCOSTCATTLEPRODUCERSSERIOUSLOSSTHISDISEASEBELONGEDTOINTESTINALINFECTIONITSPREADTHROUGHFECALALROUTESODESIGNINGAVACCINEASTHEFIRSTLINEOFDEFENSEETIOLOGICALFACTINVADINGGANISMBYSTIMULATINGMUCOSAIMMUNITYHASIMPTANTSIGNIFICANCEINTHISSTUDYLACTOBACILLUSCASEI393WASEDASANANTIGENDELIVERYVEHICLETHEMAINPROTECTIVEANTIGENVP7WASEDASTHETARGETGENETHEIVEGENEVP7WASDIRECTIONALEDINTOTHESURFACEEXPRESSIONVECTPPG1SECRETARYEXPRESSIONVECTPPG2CONSTRUCTEDRECOMBINANTSTRAINSPPG1VP7LCASEI393PPG2VP7LCASEI393RECOMBINANTLACTOBACILLUSCASEICANEXPRESSTRANSMITEXOGENOUSANTIGENITSELFCANATTACHTOTHEININTESTINALTRACTBEARBILESALTPANCREATICENZYMESOITCANSTIMULATEMUCOSAIMMUNOLOGICSYSTEMOFINTESTINALTRACTTHERECOMBINANTSTRAINSCONSTRUCTEDINTHISSTUDYUSEDASALVACCINECANPREVENTCALFINFECTINGBOVINEROTAVIRUSTHISSTUDYAMPLIFICATEDVP7GENEOFBOVINEROTAVIRUSINTHEDIARRHEASTOOLOFCALFTHERESULTOFSEQUENCINGWASTHATTHEGENEBELONGEDTOG6SEROTYPESPREADWIDELYATFIRSTWEUSEECOLIEXPRESSIONSYSTEMTOEXPLETHEEXPRESSIONCONDITIONINPROKARYOTICEXPRESSIONSYSTEMTHEIMMUNITYEFFECTIVETHERESULTISTHAT51254POSITIONSOFVP7PROTEINWHICHINCLUDEDMAJANTIGENSCANEXPRESSWELLMEOVERTHEANTISERUMOFMOUSEHADHIGHERELISATITER（16400）NEUTRALIZINGANTIBODYTITER（1316）INTHISFOUNDATIONWECONSTRUCTEDSURFACEEXPRESSIONSYSTEMPPG1VP7LCASEI393SECRETARYEXPRESSIONSYSTEMPPG2VP7LCASEI393THATCANEXPRESSVP7PROTEINOFBOVINEROTAVIRUSTHERECOMBINANTSTRAINSCONSTRUCTEDINTHISSTUDYWEREINDUCEDBYLACTOSETHEBACTERIALYSATECULTIVATESUPERNATANTWASDETECTEDBYWESTERNBLOTSHOWEDTHATPURPOSEPROTEINWASDETECTEDONTHEBACTERIALYSATEOFPPG1VP7LCASEI393PPG2VP7LCASEI393WEALSODETECTEDTHEPROTEINONTHECULTIVATESUPERNATANTOFPPG2VP7LCASEI393THEINDIRECTIMMUNOFLUESCENCETESTSHOWEDTHATTHEEXPRESSEDPROTEINWASONTHESURFACEOFPPG1VP7LCASEI393TOIDENTIFYWHETHERTHERECOMBINANTSTRAINSHAVETHEABILITYTOINDUCESYSTEMICMUCOSAL

簡介：MOLECULAREPIDEMIOLOGYSURVEYOFCANINEDISTEMPER，CANINEPARVOVIRUSINFECTIONANDCANINECORONAVIRUSINBEIJINGBYZHANGJINSUPERVISORSPROFHOUJIAFAASSOCIATERESEARCHERYANGBINGATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFTHEAGRONOMYCOMPLETEDINAPR，2009COMMENCEMENTINJUN，2009原創(chuàng)性聲明JJLLLLL11LLLL1LLLIIJ＼1763105本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者需親筆簽名編葉每移6具帕學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權南京農業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。保密口，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于不保茸西請在以上方框內打“√”學位論文作者需親筆簽名勿錈導師需親筆簽刎年毛只|7黽緲呷年彩月，孑日

簡介：西南大學碩士學位論文豬瘟病毒E2基因RTPCR檢測方法的建立及病毒分子流行病學研究姓名湯波申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師黃偉王琴20090601組織器官進行免疫組化檢測抗原；同時進行臨床觀察、體溫測定并給予進行臨床計分。RTPCR檢測結果顯示，感染后第一天有7種組織器官CSFV檢測為陽性，至第五天34種急性樣品全部檢測為陽性，整個感染病程中血液的CSFV核酸檢出數最多，檢出率93．70／015／16其次是各種與免疫相關的淋巴結和淋巴樣組織，而肌肉和皮膚檢出數最少；4種體外樣品糞、尿、眼分泌物、鼻拭子分別在3．5天內檢出陽性。免疫組化檢測結果顯示，22種組織器官切片中有19種觀察到陽性信號，這19個組織器官與CSFVRTPCR檢測結果相符合；而皮膚、肌肉和喉頭的組織切片中未觀察到陽性信號。結果表明在CSFV人工急性感染模型中，病毒感染后能在24小時間內出現病毒血癥，持續(xù)整個急性感染病程；病毒對血液和與免疫相關的組織器官表現出更高的親和性，并且在3．5天內開始出現體外排毒；CSFVRTPCR和免疫組化兩種方法在急性感染模型的檢測中具有較高的符合性，符合率為86．36％。上述研究對CSFV臨床診斷具有重要的指導意義，臨床急性感染豬應首先采集血液和免疫器官，其次為空腸、回腸段等組織器官。但是在對感染豬只進行處理時必須嚴格控制對感染豬胴體的處理，以防止疾病擴散。運用本研究所建立的CSFVRTPCR對我國18省市644份疑似豬瘟樣品進行檢測，再將檢測為陽性的樣品序列進行分析，以研究國內豬瘟流行態(tài)勢和地理分布。結果644份疑似樣品中檢出CSFV陽性74份，測回序列73條經過DNASTAR分析，發(fā)現73株流行株分別為基因1．150．68％、2．142．47％、2．25．48％等3個亞群，與HCLV核苷酸同源性在75．7％100％之間與SM核苷酸同源性在74．3％一10006之間，流行株推導氨基酸序列與HCLV和SM株氨基酸序列同源性均在85．5％一100％之間；73株野毒以“北京、天津、河北湖北廣東”軸東西發(fā)散式分布在我國中東部地區(qū)；研究顯示目前無基因3群流行株存在。本研究成功建立了CSFVRTPCR檢測方法，為CSFV的臨床診斷提供了重要的技術支持，臨床應用顯示本研究所建立的方法也可以用于CSF流行態(tài)勢的監(jiān)測；同時通過對急性感染的研究得到人工感染模型中病毒的組織分布和排毒規(guī)律，為進一步研究CSFV的致病機理增添了新的數據。關鍵詞豬瘟RTPCR；免疫組化；分布；遺傳進化II

簡介：東北農業(yè)大學碩士學位論文共表達豬細小病毒VP2與大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位重組乳酸桿菌構建及其免疫學初步評價姓名王相清申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師李一經20090620東北農業(yè)大學農學碩士學位論文II作為一種安全有效的佐劑，具有極大的應用潛力。共表達VP2LTB重組干酪乳桿菌免疫組與單獨表達VP2重組干酪乳桿菌免疫組相比，PPG1VP2LTBLCASEI393或PPG2VP2LTBLCASEI393中小鼠血清中IGG的效價高于PPG1VP2LCASEI393或PPG2VP2LCASEI393組，與免疫對照組比較，差異顯著，并且分泌型的重組菌免疫性更好。在本研究中，口服免疫表達VP2LTB的重組乳酸菌不僅能誘導產生黏膜免疫，而且誘導產生了系統(tǒng)免疫，并且通過口服免疫產生的黏膜免疫反應不只局限于胃腸道，也引起了其他黏膜部位的免疫反應，而且共表達VP2LTB組的重組乳酸菌免疫后的SIGA抗體水平高于單獨表達VP2組的重組乳酸菌。機體通過分泌性IGA抗體在黏膜表面對病原體進行排斥和清除，這對預防細小病毒感染是至關重要的。中和試驗結果表明，PPG1VP2LCASEI393組、PPG2VP2LCASEI393組、PPG1VP2LTBLCASEI393組、PPG2VP2LTBLCASEI393組在免疫后49D血清的抗體中和效價分別為1304、1317、1338、1352。本研究首次構建了重組大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位和豬細小病毒主要免疫保護性抗原VP2蛋白的干酪乳桿菌細胞表面表達和分泌表達系統(tǒng)。本研究所獲得的結果表明，干酪乳桿菌可用做口服免疫傳遞抗原引起黏膜和系統(tǒng)免疫。當VP2蛋白與LTB共表達時，加強了黏膜免疫反應，LTB具有較好的免疫原性、抗原性和佐劑特性，可被用于基因工程疫苗的研制，很適合于用做黏膜疫苗的免疫佐劑。本研究為進一步研究新型、有效的豬細小病毒口服疫苗奠定了基礎。關鍵詞關鍵詞豬細小病毒VP2蛋白；干酪乳桿菌；大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位；共表達；免疫學評價

簡介：中國農業(yè)科學院碩士學位論文小反芻獸疫病毒抗體、抗原免疫學檢測方法和納米金核酸檢測方法的建立姓名邱文英申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師李剛201106ABSTRACTPESTEDESPETITSRUMINANTSPPIT，ISAHIGLYCONTAGIOUSVIRALDISEASEAFFECTINGDOMESTICANDWILDSMALLRUMINANTSINRECENTYEARS，ITSPREADTONEWAREASINTHEWORLDPPRWAGFIRSTLYOUTBROKENINTIBETOFCHINAINJULY2007ITBECOMESMORENECESSARYANDCRITICALFORUSTEINFORCESTUDIESONDIAGNOSISANDCONTROLOFTHEDISEASEUSINGTHEPLASMIDWHICHCONTAINSTHECOMPLETEPPR、，NGENEANDFIVEPAIRSOFDESIGNEDPRIMERSACCORDINGTOTHECONSERVATISMOFNGENE，THEFIVESUBUNITSWEREAMPLIFIEDBYPCRTHENTHESUBUNITSWERECLONEDINTOPET32AEXPRESSIONVECTORSUCCESSFULLYTHESUBUNITSPROTEINWEREPURIFIEDTHERESULTSBYWESTERNBLOTSHOWEDTHATFOUROFTHESUBUNITSOFNPROTEINHADIMMUNOREACTIVITYWITHPPRVANTIBODIESONLYONEDIDNOTHAVETHERESULTSBYELISASHOWEDTHATTHEMAINBCELLEPITOPESSITEDONTHEFIFTHSUBUNITINOTHERWORDSSITEDONWZONETHEFIFTHSUBUNITPROTEINPETPPRVN5WHICHHADSTRONGIMMUNOREACTIVITYANDHIGHSPECIFICITYWASPURIFIEDANDUSEDASCOATINGANTIGENTODEVELOPEDAINDIRECTELISATODETECTTHEANTIBODIESAGAINSTPPRVTHEESTABLISHEDINDIRECTELISAWASSENSITIVEANDSPECIFICCOMPAREDWITHSTANDARDCOMPETITIVEELISA，THECOINCIDENCERATEBETWEENTWOMETHODSWAS98鐋TODEVELOPAGOLDIMMUNOCHROMATOGRAPHICASSAYGICAFORDETECTIONOFPPRVANTIGEN，POLYELONEANTIBODYWASPURIFIEDFROMHYPERIMMUNESERUMANDCONJUGATEDWITHCOLLOIDALGOLDPARTICLESPREPAREDBYTHETRISODIUMCITRATEREDUCTIONMETHODMEANWHILE，PURIFIEDRECOMBINANTPPRVNPROTEINANDTHEANTIGOATIGGWERESTRIPEDINTESTLINEPOSITIONANDINTHECONTROLLINEPOSITIONRESPECTIVELYTHEMINIMUMANTIGENDETECTEDBYDEVELOPEDGICAWAS10NGTHERESULTSSHOWEDTHATTHEGICAWASPECIFICANDEASYTOPERFORMITWASANACCEPTABLEALTERNATIVEFORTHENEINFIELDDIAGNOSISTODETECTMICROAMOUNTOFPPRVNUCLEOTIDEMOLECULES，AGOLDNANOPARTICLEBASEDMETHOD謝TLLSILVERSTAININGENHANCEMENTWASESTABLISHEDAPAIROFPROBESWHICHWERECOMPLEMENTARYTOTARGETNUCLEOTIDESWEREDESIGNEDANDLABELEDWITHBIOTINSANDNANOPATICLESRESPECTIVELYTHENTWOKINDSOFPROBESWEREHYBRIDIZEDWITHTARGETNUCLEOTIDES，THEHYBRIDIZATIONPRODUCTSWEREIMMOBILIZEDTOMICROPLATEVIAAVIDINBIOTINSYSTEM，ANDTHESIGNALSOFGOLDNANOPARTICLESWEREAMPLIFIEDWITHSILVERSTAININGSOLUTIONTHISMETHODCOULDDETECTASFEWAS1PMOL／LOFTARGETPPRVNUCLOTIDESINGENERAL，THREEMETHODSWEREESTABLISHEDTODETECTTHEANTIBODYANTIGENANDNUCLEOTIDESOFPPRⅥTHESEMETHODSWOULDBEUSEFULINTHEDETECTINGOFPPRVKEYWORDSPPRVSUBCLONE；INDIRECTELISA；GOLDIMMUNOCHOMATOGRAPHICASSAY；GOLDNANOPATICLEBASEDPROBEIII

簡介：THEIDENTIFICATIONANDMOLECMLARBIOLOGICALCHARACTEIUSTICSANALYSESOFJA剛ESEENCEPHAI。ITISVIRUSISOLATEDFROM2008TO2009BYMAKUNSUPER訂SORPROFCHENPUYANADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFUMLLMENT0FTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYVBTERINARYMEDICINECOMPLETEDINNOVEMBER，2009COMMENCEMENTINDECEMBER，2009原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者需親筆簽名溯7年肜月7日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權南京農業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。／保密口，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于不保密口。請在以上方框內打“√“學位論文作者需親筆簽名別滁射銘燃日日戶，D，●月月2≯年年冉77仃陽如加