簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文HABDBP復(fù)合物修復(fù)骨缺損的實驗研究姓名劉峰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔科學(xué)頜面外科學(xué)指導(dǎo)教師吳軍正200051第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文HAB／DBP復(fù)合材料修復(fù)骨缺損的實驗研究研究生劉峰導(dǎo)師吳軍正教授摘要＼植骨材料的研究是近百年來的熱點課題之一。許多研究者已經(jīng)認(rèn)識到，植骨材料的研究，不僅要從材料科學(xué)的角度考慮問題，更重要的是要從生命科學(xué)的角度進行探討和研究，尋求與人體組織結(jié)構(gòu)、生理功能相近似的植骨材料，使植入的人工骨與人體組織不僅具有良好的生物相容性，而且能夠與天然骨組織間形成骨性結(jié)合，植入材料成為機體的一部分，能夠長期發(fā)揮相應(yīng)的生理功能。人工合成材料如生物陶瓷、HA雖有良好的組織相容性和一定的生物活性，由于其不可降解性，作為異物長期存留體內(nèi)，而且受骨床的結(jié)合也不是骨性結(jié)合；異種脫礦骨DMB的骨膠原及其他非膠原蛋白均有抗原性，仍可引起免疫排斥反應(yīng)，脫蛋白處理后，抗原性去除了，但骨誘導(dǎo)性也隨之喪失，加之質(zhì)地硬而脆，難以塑性，不適合臨床應(yīng)用。同種異體DMB抗原性微弱，具有良好的骨誘導(dǎo)性，但存在著機械強度較低，降解吸收較快的缺陷。骨再生需要有骨傳導(dǎo)界面作為移植物支架，需要有被BMP誘導(dǎo)和多種生長因子調(diào)節(jié)的骨生成細胞分化、增殖，在這一基礎(chǔ)上合成骨基質(zhì)，而后鈣化形成新骨。基于上述理論，理想的骨移植材料應(yīng)該是由生物活性支架如HA等、生物活性蛋白如膠原等、骨誘導(dǎo)物質(zhì)如BMP等、骨生長因子復(fù)合而成。這種復(fù)合物與天然骨的成分相似，植入后既具有骨引導(dǎo)、骨誘導(dǎo)能力，又具有骨傳導(dǎo)性，滿足了骨再生的物質(zhì)需求?？ㄒ槐狙芯客ㄟ^對多種材料進行機械強度實驗、材料皮下埋植及肌袋誘導(dǎo)骨形成和細胞相容性實驗，選定以生物活性陶瓷轉(zhuǎn)化的HAB作為同種異體DBP的可吸收性載體，制備成HAB／DBP復(fù)合材料。將其植入兔橈骨中段L5MM人工缺損處，以單純的HAB、異體DMB植入和空白作為對照，在不同時間點進行大體觀察、X線攝片、組織切片、骨組織四環(huán)素?zé)晒?

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簡介：異體骨移植的臨床應(yīng)用已經(jīng)有120余年的歷史在開始的100年左右的時間里異體骨的應(yīng)用較少而且獲取困難障礙了其應(yīng)用推廣進入80年代之后隨著異體骨應(yīng)用的增多骨移植導(dǎo)致的艾滋病、肝炎等疾病的傳播使移植的安全性問題受到關(guān)注敏感的血清學(xué)檢驗和骨庫制度的建立為異體骨的安全性提供了保障當(dāng)前異體骨的獲取和安全問題已得到解決臨床醫(yī)師最關(guān)心的就是異體骨的有效性問題如何使異體骨快速整合到宿主的骨骼系統(tǒng)發(fā)揮承重的功能是目前研究的方向異體皮質(zhì)骨用于頸椎前路減壓后椎體間融合可避免植骨并發(fā)癥、維持頸椎的生理前凸弧度并且有較高的植骨界面融合率是自體髂骨的有效替代材料之一但是存在替代緩慢的缺點他汀類藥物在體外可促大鼠顱骨成骨細胞的增殖和礦化功能同時可促進成骨細胞VEGF的表達體內(nèi)局部作用于顱骨可促進局部的骨形成和血管新生使顱骨結(jié)構(gòu)發(fā)生重建在頸椎異體皮質(zhì)骨移植動物模型實驗中服用辛伐他汀可抑制機體對異體骨的免疫排斥反應(yīng)促進植骨表面同宿主骨小梁的早期骨性結(jié)合并通過增加植骨內(nèi)部血管形成和骨質(zhì)新生促進植骨骨宿主骨骼的整合

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簡介：我國作為人口資源的大國目前對成骨不全的研究主要還停留在臨床病例的報告和流行病學(xué)的調(diào)查至今尚無對成骨不全病因?qū)W方面的深入研究本課題的研究目的在于對Ⅰ型成骨不全的家系進行COL1A1易感基因的掃描包括已知的和尋找新的COL1A1基因突變位點不僅完善中國漢族人在Ⅰ型成骨不全的分子遺傳學(xué)方面所欠缺的資料也為研究其它有關(guān)骨和結(jié)締組織疾病的遺傳病因?qū)W提供實驗依據(jù)研究對象Ⅰ型成骨不全家系Ⅰ型成骨不全家系患者的臨床特點研究方法1根據(jù)GENBANK人的COL1A1基因共有的52個外顯子設(shè)計引物序列2實驗方法PCR擴增目的基因片段、純化經(jīng)體外PMD18TVECT質(zhì)?；蛑亟M與轉(zhuǎn)化獲得目的基因的重組質(zhì)粒DNA采用PE公司ABI377測序儀進行DNA測序應(yīng)用生物信息學(xué)專業(yè)軟件BLAST、BIOEDIT及GEOOL等工具對所測得的序列進行分析與GENBANK上公布的標(biāo)準(zhǔn)序列進行比較分析從而判定變異的位點及編碼氨基酸序列的變化結(jié)論本課題是首個對中國人成骨不全家系進行COL1A1易感基因的掃描初步結(jié)果顯示在COL1A1基因的第39外顯子區(qū)域的第38位點的G→A突變使原來編碼甘氨酸的密碼子GGT變成了門冬氨酸的密碼子GAT與目前國外已報導(dǎo)的COL1A1基因突變不同可能為一新的COL1A1基因突變

簡介：目的①研究兔的前頜縫、鼻額縫、顴顳縫、腭橫縫的交錯性及納米彈性性能及其縫的生物力學(xué)特性的增齡性變化，為縫牽引成骨技術(shù)的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。②探索鈦鎳記憶合金牽引系統(tǒng)在縫牽引成骨技術(shù)的效能、縫牽引技術(shù)在不同年齡段患者的應(yīng)用、效果評價及其對縫生長發(fā)育和腭咽閉合功能的影響。方法⑴選取3月齡及6月齡同種日本大耳白兔各8只，切取顴顳縫、鼻額縫、前頜縫及腭橫縫組織，觀察縫大體交錯性并應(yīng)用原子力顯微鏡檢測縫的微觀形貌和生物力學(xué)特性，并比較不同年齡組動物之間的差異。⑵16例患者均為唇腭裂術(shù)后面中部發(fā)育不全，單側(cè)唇腭裂12例，雙側(cè)唇腭裂患者4例，患者年齡最小的10歲，最大者195歲，平均126歲。采用自行設(shè)計制作的鈦鎳記憶合金牽引系統(tǒng)進行縫牽引成骨治療。牽引前后進行照相、拍X片、牙模、CT及鼻咽纖維鏡檢查及測量分析，并進行統(tǒng)計學(xué)分析，以進行術(shù)前診斷、術(shù)后效果評價。結(jié)果①幼年組兔的各個面顱骨縫之間的微觀形貌不同，ZTS及其對應(yīng)礦化前緣的表面形貌與PMS、NFS、TPS相比，表面較為平坦。成年組兔的各個面縫之間的微觀形貌不同，ZTS、NFS、TPS及其對應(yīng)礦化前緣的表面形貌與PMS相比，表面較為平坦。成年組兔NFS、TPS及其對應(yīng)礦化前緣的表面形貌與幼年組對應(yīng)縫相比較為平坦。②共治療16例患者，其中14例患者完成治療、且牽引治療成功，有2例患者已經(jīng)結(jié)束牽引期、正在保持期中。對完成治療的14例患者進行術(shù)后隨訪，隨訪時間最短4月多，最長3年多，11例患者效果非常滿意，2例患者由于沒有過枉矯正、術(shù)后保持時間短、保持裝置不可靠，術(shù)后有輕微復(fù)發(fā)、前牙恢復(fù)到對刃合，不過面型改善效果基本滿意。這13例患者術(shù)后療效穩(wěn)定，通過對術(shù)后1年以上的患者跟蹤觀察揭示出隨年齡的增長面中部骨縫具有生長發(fā)育潛能，在停止?fàn)恳竺嬷泄趋辣３窒蚯皡f(xié)調(diào)生長。有1例患者因為固定時間不到1個月，在拆除固定裝置同時行唇裂繼發(fā)畸形矯正術(shù)，致術(shù)后完全復(fù)發(fā)。結(jié)論⑴通過應(yīng)用原子力顯微鏡可以觀察骨縫及其礦化前緣的微觀形貌和測定其彈性模量，可以觀察到面縫的微觀生物力學(xué)的增齡性改變，認(rèn)識縫的生物力學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)行為對面顱縫生長發(fā)育的研究和縫牽引成骨的臨床應(yīng)用具有重要的意義，也可作為必備數(shù)據(jù)用于數(shù)學(xué)模型的生物力學(xué)模擬。⑵縫牽引成骨術(shù)是一種微創(chuàng)、輔助骨骼生長的再生醫(yī)學(xué)技術(shù)。通過縫牽引可使縫恢復(fù)或具有了生長發(fā)育的潛能，在停止?fàn)恳?，上頜骨復(fù)合體能夠隨年齡的增長與面部協(xié)調(diào)生長前移。采用鈦鎳記憶合金牽引系統(tǒng)進行持續(xù)牽引成骨治療面中部骨骼發(fā)育不全具有簡單、方便、安全、可靠、效率高、經(jīng)濟的特點，有著良好的應(yīng)用前景。

簡介：第一部分骨微損傷的鑒別方法建立及不同種屬動物生理狀態(tài)下微損傷的初步觀察目的建立骨微損傷的診斷和鑒別方法觀察不同種屬動物生理狀態(tài)下的骨微損傷結(jié)論用大塊組織堿性品紅染色法可很好地鑒別骨的微損傷不同骨組織在生理狀態(tài)下的微損傷發(fā)生情況存在不同第二部分應(yīng)用骨疲勞損傷試驗建立骨微損傷模型目的應(yīng)用疲勞損傷法建立大鼠椎體骨微損傷模型結(jié)論用疲勞損傷方法和自制的骨疲勞損傷試驗機可建立大鼠骨微損傷的動物模型第三部分大鼠骨微損傷與骨生物力學(xué)、骨密度、骨計量學(xué)及生化指標(biāo)的相關(guān)分析目的探討影響骨微損傷的相關(guān)指標(biāo)和間接判斷微損傷的方法結(jié)論骨微損傷與松質(zhì)骨關(guān)系密切受骨微結(jié)構(gòu)影響較大但判斷微損傷的無創(chuàng)方法有待進一步研究第四部分17Β雌二醇對不同時期去卵巢SD大鼠骨微損傷的影響目的觀察17Β雌二醇對不同時期去卵巢SD大鼠離體骨微損傷的影響評定雌激素對骨質(zhì)疏松的防治效果為評價藥物對骨結(jié)構(gòu)性能的影響選取較好的指標(biāo)結(jié)論10月齡SD大鼠去卵巢后早期無骨結(jié)構(gòu)性能下降早期應(yīng)用17Β雌二醇可提高骨結(jié)構(gòu)性能在去卵巢后較晚期應(yīng)用亦可防止骨結(jié)構(gòu)性能下降單位骨小梁面積百分率的微破裂長度和數(shù)目可用于抗骨質(zhì)疏松藥物療效的評價觀測時間以去卵巢后21周較佳

簡介：目的1構(gòu)建人骨形態(tài)發(fā)生蛋白7HBMP7逆轉(zhuǎn)錄病毒載體并制備重組病毒液檢測經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)HBMP基因轉(zhuǎn)染的兔骨髓基質(zhì)干細胞BMSC中外源HBMP7MRNA和蛋白的表達2探討HBMP7基因轉(zhuǎn)染對BMSC增殖和向成骨細胞分化的調(diào)節(jié)作用3對重組病毒液和經(jīng)基因轉(zhuǎn)染的BMSC與左旋聚丙交酯POLYLLACTIDEPLLA生物材料復(fù)合后修復(fù)兔橈骨15CM缺損的能力進行評價從而探討基因轉(zhuǎn)移技術(shù)在骨組織工程中應(yīng)用的可行性并建立利用經(jīng)HBMP基因轉(zhuǎn)染的BMSC構(gòu)建組織工程化骨組織的方法結(jié)論1采用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的方法可以將HBMP7轉(zhuǎn)染至BMSC中并有外源HBMP7的表達2PLNCXBMP基因轉(zhuǎn)染能夠促進體外培養(yǎng)的BMSC向成骨細胞轉(zhuǎn)化并對其增殖能力沒有顯著影響3采用PLNCXBMP重組病毒液與生物材料復(fù)合的方法能夠修復(fù)兔橈骨15CM缺損4PLNCXBMP基因轉(zhuǎn)染能夠提高BMSC形成組織工程化骨組織和修復(fù)骨缺損的能力5采用基因轉(zhuǎn)染的方法能夠提高BMSC體內(nèi)外成骨能力可用于以BMSC為種子細胞的組織工程化骨組織的構(gòu)建和進一步應(yīng)用

簡介：點擊查看更多骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨細胞的膠原表型.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的構(gòu)建大鼠腎上腺髓質(zhì)素真核表達質(zhì)粒PVAX1ADM，注射入大鼠腓腸肌，通過檢測肢體缺血再灌注后，注射部位腓腸肌組織中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），血清中的肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）的水平，及組織形態(tài)學(xué)檢查來判斷重組質(zhì)粒對骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用。方法1取雄性SD大鼠腎上腺組織進行總RNA的提取，RTPCR方法得到ADM基因，克隆到T載體上，進一步亞克隆到PVAX1真核表達載體上，得到重組質(zhì)粒PVAX1ADM。2雄性SD大鼠32只，體重200±10G，按體重隨機分為4組，每組8只，即空載體組（PVAX1）、300ΜG重組質(zhì)粒組、500ΜG重組質(zhì)粒組和700ΜG重組質(zhì)粒組。四組腓腸肌注射含重組質(zhì)粒（PVAX1ADM）的量分別為0ΜG、300ΜG、500ΜG和700ΜG，每周1次，共4周。取注射部位腓腸肌組織，RTPCR和免疫組織學(xué)檢查，測定重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平，獲取重組質(zhì)粒最適注射劑量。3雄性SD大鼠32只，體重200±10G，按體重隨機分為4組，每組8只，即正常對照組、缺血再灌注（IR）模型組、陽性藥物組（維拉帕米組）、重組質(zhì)粒組。術(shù)前，重組質(zhì)粒組腓腸肌注射重組質(zhì)粒700ΜG，其他三組注射與質(zhì)粒溶液等量的生理鹽水，每周1次，共4周。4周后進行缺血再灌注實驗，缺血3H，再灌注2H。術(shù)中，維拉帕米組于再灌注前10分鐘，腹腔注射維拉帕米溶液2MGKG，其他三組注射等量生理鹽水。術(shù)畢，取腓腸肌組織測定MDA的含量、SOD的活力，取血清測定CK、LDH的含量，及腓腸肌組織進行組織學(xué)檢查。結(jié)果1獲得的大鼠腎上腺髓質(zhì)素基因的測序結(jié)果與GENEBANK中序列進行比對，完全一致。真核表達質(zhì)粒經(jīng)PCR、XBAⅠ和HINDⅢ雙酶切鑒定顯示，重組質(zhì)粒為陽性。分光光度法對提取的重組質(zhì)粒進行測定，結(jié)果為OD2600901，OD2800487，OD2602801850，質(zhì)粒濃度為45MGML。2定量RTPCR和免疫組織化學(xué)方法對注射重組質(zhì)粒的大鼠腓腸肌組織進行測定，結(jié)果顯示，組織中的表達量隨重組質(zhì)粒注射量的增加而增加。3與IR模型組組相比，重組質(zhì)粒組腓腸肌組織中MDA的含量降低3221％（P005），SOD的含量增加了2371％（P005）；血清中CK的含量增加了2061％（P005），LDH的含量增加了3617％，有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）。骨骼肌組織學(xué)檢查結(jié)果顯示重組質(zhì)粒組和維拉帕米組骨骼肌肌纖維少量斷裂和炎性細胞浸潤，骨骼肌水腫，間質(zhì)水腫明顯減輕。結(jié)論1目的基因ADM成功連接到真核表達載體中，提取的重組質(zhì)粒濃度為45MGML。2重組質(zhì)粒的注入可使大鼠腓腸肌ADM表達量提高，其中700ΜG重組質(zhì)粒組為最佳劑量組。3大鼠骨骼肌組織ADM表達量提高，可以減輕缺血再灌注過程中肌肉組織的損傷程度，對骨骼肌缺血再灌注損傷有保護作用。

簡介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文兔骨髓基質(zhì)細胞的培養(yǎng)及成骨的實驗研究姓名武和明申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔頜面外科指導(dǎo)教師邢樹忠200271I型膠原凝膠復(fù)合制成復(fù)合體，修復(fù)顱骨缺損，為L組；4只兔單純以I型膠原凝膠修復(fù)顱骨缺損為2組；剩下2只顱骨缺損不修復(fù)為3組。分別于術(shù)后4周、8周處死，臨床觀察骨修復(fù)面積；制作標(biāo)本，行常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察；測量修復(fù)骨灰重與濕重。結(jié)果實驗L細胞懸液接種后24小時有細胞貼壁，72小時貼壁細胞成紡錘樣、梭形等，7天后細胞形成分散的大小不等集落，細胞呈多種多種形態(tài)，鱗片狀、多角形、長梭形等，帶有長短數(shù)目不一的突起。14天左右融合成單層，可呈復(fù)層生長，無密度抑制現(xiàn)象。傳代細胞條件培養(yǎng)組ALP活性與骨鈣素含量明顯高于對照組。VONKOSSA染色條件培養(yǎng)組為陽性，對照組陰性。實驗2骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)加入5組不同濃度的BFGF，7日后CFU．F計數(shù)顯示BFGF可明顯增加CFU．F的數(shù)目，濃度在0一LON∥ML時，CFU．F數(shù)目隨濃度的增高而增多，在10NG／ML時達到最大。但濃度為100NG／ML時，CFU．F計數(shù)反而降低，與LNG／ML時無顯著性差異。傳代細胞蛋白測定顯示，每組細胞培養(yǎng)6天蛋白含量均高于培養(yǎng)3天時。于3天、6天分別對比各組蛋白含量顯示BFGF作用后，細胞蛋白含量有明顯增多，濃度在0一10NG／ML時，蛋白含量隨濃度的增高而增多，在10NG／ML時達到最大。而濃度為100NG／MI，細胞蛋白含量反而有下降，與LNG／ML時無顯著性差異。各組MTT檢測光吸收值，每組細胞培養(yǎng)6天光吸收值均高于培養(yǎng)3天時．于3天、6天分剮對比各組光吸收值顯示BFGF作用后，MTT光吸收值有明顯增高，濃度在010NG／ML時，光吸收值隨濃度的增高而增多，而濃度為100NG／ML時，光吸收值反而有下降，與濃度為LNG／ML時無顯著性差異．MTT光吸收值反映不同時間、不同BFGF濃度作用下骨髓基質(zhì)細胞數(shù)目的情況。ALP活性顯示在濃度為10NG／ML時上升，其它備組無顯著性

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