簡介：目的骨組織再造和骨缺損修復(fù)一直是臨床上骨科醫(yī)生面臨的難題之一，組織工程學(xué)的創(chuàng)立為解決這一難題提供了新的思路和方法。骨組織工程BOISSUEENGINEERING是目前組織工程研究的熱點問題之一，內(nèi)容主要包括①細(xì)胞種植基質(zhì)材料的研究與開發(fā)；②種子細(xì)胞性質(zhì)的研究；③與促進骨再生有關(guān)的生長因子方面的研究。其中，細(xì)胞種植基質(zhì)材料的研究是骨組織工程研究的核心內(nèi)容，也是能否應(yīng)用于臨床的重要因素之一。本研究采用NAOH消蝕脫細(xì)胞技術(shù)制備出豬的長骨密質(zhì)骨及松質(zhì)骨骨細(xì)胞外基質(zhì)簡稱骨基質(zhì)材料作為支架，以自體新鮮紅骨髓作為骨形成的促進因子，對家兔進行了骨缺損修復(fù)的實驗研究。方法1取豬的長骨的骨密質(zhì)及髂骨的骨松質(zhì)，經(jīng)2％戊二醛4％多聚甲醛混合液交聯(lián)后，室溫下經(jīng)過6％NAOH水溶液化學(xué)消蝕脫細(xì)胞7天，蒸餾水超聲震蕩清洗，徹底清除細(xì)胞碎片及殘存藥液，直至清澈透明為止，PH值＜7，烘干。對制備好的兩種骨基質(zhì)材料進行掃描電鏡SCANNINGELECTRICMICROSCOPE，SEM觀察、生物力學(xué)檢測、埋植于家兔體內(nèi)觀察其生物相容性。2骨基質(zhì)支架復(fù)合自體紅骨髓修復(fù)家兔脛骨局部性骨缺損的實驗研究將兩種支架與自體紅骨髓復(fù)合后，植入保留有骨膜的兔脛骨干12MM長，深度達脛骨直徑的13厚度的前壁骨缺損動物模型中。分為A、B兩個實驗組，A組移植密質(zhì)骨基質(zhì)支架COMPACTBONEMATRIXFRAME，CBMF，B組移植松質(zhì)骨基質(zhì)支架SPONGYBONEMATRIXFRAME，SBMF，對照組D組為空白對照組。紅骨髓自髂嵴處抽取，每處注入約010ML，注入缺損處密質(zhì)骨支架周圍或松質(zhì)骨支架孔隙內(nèi)，骨膜原位縫合。分別于術(shù)后4周、8周、12周觀察X線表現(xiàn)及組織學(xué)變化。結(jié)果1骨基質(zhì)支架特征11骨基質(zhì)材料的SEM特征骨組織經(jīng)NAOH消蝕及超聲震蕩清洗后，細(xì)胞成分被徹底消蝕掉。密質(zhì)骨骨基質(zhì)的主要成分膠原纖維和骨鹽仍維持原有形態(tài)及結(jié)構(gòu)特征，膠原纖維聚集、排列成規(guī)則的網(wǎng)狀支架。骨鹽沿膠原纖維排列。松質(zhì)骨呈疏松的絨毛樣結(jié)構(gòu)，表面略粗糙，可見膠原纖維紋理。12生物力學(xué)測試結(jié)果密質(zhì)骨基質(zhì)材料的三點抗彎曲強度結(jié)果為01016±00231N，抗壓縮強度為02308±0059N，對照組結(jié)果分別為01244±00159N和03610±01082N，經(jīng)NAOH消蝕后，力學(xué)強度略低于正常骨組織分別為P＜005，P＜001。13生物相容性實驗結(jié)果將埋植于家兔背部肌肉中的兩種支架材料分別于術(shù)后1周、2周和4周取出?？梢娒苜|(zhì)骨周圍有纖維結(jié)締組織包裹，少許淋巴細(xì)胞浸潤和新生毛細(xì)血管；松質(zhì)骨材料于埋植一周后即有結(jié)締組織長入松質(zhì)骨基質(zhì)的孔隙內(nèi)。隨著埋植時間的延長密質(zhì)骨支架結(jié)構(gòu)逐漸疏松，松質(zhì)骨支架逐漸減少，被降解吸收。2骨支架移植實驗結(jié)果21X線檢查結(jié)果術(shù)后4周，實驗組圍繞缺損區(qū)骨膜下形成連續(xù)性致密骨痂跨越缺損區(qū)，有早期成骨現(xiàn)象，其中B組最明顯，A組骨痂密度稍低于B組，D組骨痂，不連貫，無成骨現(xiàn)象；術(shù)后8周，A組、B組骨痂貫穿骨支架，出現(xiàn)骨性連接并開始塑形，D組成骨現(xiàn)象較A組B組慢。術(shù)后12周，B組可見清晰的骨紋理，形成新的骨皮質(zhì)且較光滑，骨缺損修復(fù)較完善；A組骨小梁通過，骨修復(fù)、塑型較B組出現(xiàn)晚，由于缺損部位尚小，D組也被新生骨痂填充塑形。A組與B組對比，術(shù)后4周，骨痂B組多于A組；術(shù)后8周，B組較A組成骨增多，塑形現(xiàn)象出現(xiàn)早；術(shù)后12周，B組可見清晰骨小梁，骨皮質(zhì)較光滑，骨缺損修復(fù)完善，A組見部分骨小梁通過，骨修復(fù)、塑型較B組出現(xiàn)晚。由于缺損區(qū)較小，D組到12周時骨痂填充塑形亦較完全。22組織學(xué)觀察術(shù)后4周，實驗組在移植物表面及孔洞內(nèi)有新生骨組織形成，B組多于A組，新生骨組織B組成熟，D組新骨形成少。8周，三組成骨現(xiàn)象均增多，移植物被新生骨組織分隔為不規(guī)則狀，骨缺損基本修復(fù)；A組較B組修復(fù)程度稍差，D組新骨較前增多。12周，A組B組骨細(xì)胞成熟，造血細(xì)胞減少；D組骨痂亦填補缺損處。B組因移植物為松質(zhì)骨骨基質(zhì)材料，孔隙率高，因此，新骨形成分布均勻，支架與周圍組織結(jié)合緊密且降解吸收多。結(jié)論1經(jīng)NAOH消蝕后的骨組織具有以下優(yōu)點①膠原纖維不受損傷且保持正常結(jié)構(gòu)，骨鹽成分羥基磷灰石未被破壞，使該支架仍具有一定的生物力學(xué)強度，適宜修復(fù)較大的骨缺損；NAOH去除了骨組織中的細(xì)胞、脂類及雜蛋白，降低了支架的免疫原性，組織相容性好；②在體內(nèi)易于降解吸收；③制作工藝簡便，可根據(jù)缺損形狀而塑形。因而可將其作為種子細(xì)胞和生長因子的載體用于骨組織工程。2將采用NAOH消蝕技術(shù)制作的骨細(xì)胞外基質(zhì)材料與自體紅骨髓復(fù)合，可用于修復(fù)較大的骨缺損，是良好的組織工程載體。骨髓具有成骨潛能，將其復(fù)合于具有三維支架結(jié)構(gòu)的載體上，可促進骨缺損修復(fù)。

簡介：目的探討PTH134對于活體疲勞后大鼠骨微損傷修復(fù)，靶向骨重建、骨轉(zhuǎn)換、骨密度的影響，并探討可能的作用機制。方法7月齡雌性SD大鼠46只，隨機抽取6只大鼠作為基線組，剩余40只大鼠隨機平均分為PTH組和空白對照組。大鼠去卵巢建模成功并進行右側(cè)前肢活體疲勞后，基線組大鼠處死，其余組大鼠分別按照體重每日給予甲狀旁腺素PTH13440ΜGKG及相等體積生理鹽水皮下注射，活體雙標(biāo)后在用藥2周和3周分別處死。取各組大鼠雙側(cè)尺骨、腰椎骨、股骨、脛骨測量骨密度，右側(cè)尺骨行品紅染色并包埋切片，顯微鏡下測量微損傷參數(shù)右側(cè)及左側(cè)橈骨使用免疫組化及WESTERNBLOT方法檢測成骨指標(biāo)RUNX2及OPG，破骨指標(biāo)NFATC1血清用ELASA法檢測Ⅰ型原膠原氨基端前肽PINP、抗酒石酸酸性磷酸酶5B（TRAP5B）以及骨鈣素OC椎骨灰化后檢測灰重及礦物質(zhì)含量百分比。結(jié)果1PTH134治療3周后大鼠的骨微破裂密度CRDN及微破裂面密度CRSDN較空白組減少P＜005，平均微損傷長度CRLE，皮質(zhì)骨厚度CRTH等無差異。而PTH治療2周后微損傷及結(jié)構(gòu)學(xué)參數(shù)較空白組無統(tǒng)計學(xué)差異2PTH134組經(jīng)疲勞負(fù)載的右側(cè)尺骨密度高于空白組，而左側(cè)未經(jīng)疲勞的尺骨骨密度無統(tǒng)計學(xué)差異3PTH134組右側(cè)經(jīng)疲勞的橈骨表達成骨指標(biāo)RUNX2及破骨指標(biāo)NFATC1高于自身未經(jīng)疲勞的左側(cè)橈骨，而OPG表達低于左側(cè)橈骨4PTH134治療2周后血清PINP及OC濃度較空白組顯著增加P＜001，治療3周后PINP濃度顯著增加P＜001，而TRAP5B濃度較空白組無差異5對于未經(jīng)疲勞負(fù)載的骨骼，PTH134治療可顯著增加股骨、脛骨、腰椎骨骨密度P＜001顯著增加腰椎骨的礦物質(zhì)含量，但礦物質(zhì)含量百分比無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論1PTH134能促進骨微損傷修復(fù)，可能機制是通過增強靶向骨重建的修復(fù)過程2疲勞負(fù)載與PTH134可協(xié)同作用，提高皮質(zhì)骨骨密度，這種作用可能與局部骨的成骨、破骨分化增加有關(guān)3PTH134可增加大鼠骨密度，但不能使其腰椎礦物質(zhì)含量百分比增加。

簡介：點擊查看更多生肌白玉膏對大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面EGF、VEGF表達的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分新型多發(fā)性骨性連接綜合征致病基因的定位與功能研究多發(fā)性骨性連接綜合征SYNS是一類罕見的骨關(guān)節(jié)發(fā)育不全綜合征呈常染色體顯性遺傳表現(xiàn)為多處關(guān)節(jié)強直或融合多發(fā)性骨性連接綜合征存在遺傳異質(zhì)性迄今已報道的多發(fā)性骨性連接綜合征有二種類型均為常染色體顯性遺傳病分別為由17號染色體的NOG基因突變引起的SYNS1MIM186500型和20號染色體的生長分化因子5基因突變引起的SYNS2MIM610017型本研究報道的家系來自青海省一個由五代共58人組成的SYNS大家系呈顯性遺傳具有與以往國內(nèi)外報道相同的臨床表型本研究對這一SYNS大家系進行了候選基因連鎖分析和測序分析排除了由NOG基因和GDF5基因致病的可能性為此提出SYNS存在第三種遺傳異質(zhì)性并命名為SYNS3型經(jīng)全基因組掃描和單倍型分析將致病基因定位在13Q11Q12并通過精細(xì)定位將范圍縮小至D13S175D13S221之間約86MB其中D13S1236的LOD值最高為370Θ00這一范圍包括22個己知的候選基因通過文獻檢索候選基因的功能發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞生長因子9FIBROBLASTGROWCHFACT9FGF9參與骨發(fā)育過程對家系成員的FGF9基因進行突變檢測在所有病人中發(fā)現(xiàn)了該基因的突變而在正常家系成員中未發(fā)現(xiàn)在100個無血緣關(guān)系的人群中也未發(fā)現(xiàn)FGF9基因突變因此這一家系的SYNS是由FGF9基因突變導(dǎo)致這是首次在人類中發(fā)現(xiàn)該基因突變也是第一次發(fā)現(xiàn)FGF9是第三個與SYNS有關(guān)的基因FGF9基因是成纖維細(xì)胞生長因子家族的成員之一共有3個外顯子組成產(chǎn)生一種含208個氨基酸的分泌性糖蛋白突變發(fā)生在FGF9蛋白的一個保守的氨基酸基序上EFISIA該基序?qū)GF9蛋白的分泌及與受體結(jié)合具有重要作用在COS7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染正常及突變FGF9CDNA培養(yǎng)上清中檢測到突變FGF9蛋白的表達證實突變并未阻礙FGF9蛋白的分泌蛋白質(zhì)三維模擬MOLPROGRAM顯示突變后的FGF9蛋白與其受體FGFR3IIIC的結(jié)合更為緊密用正常及突變FGF9作用大鼠顱骨問充質(zhì)細(xì)胞株RCJ31C518軟骨細(xì)胞前體和新生小鼠肋軟骨細(xì)胞顯示在軟骨增殖階段突變FGF9促進軟骨的增殖能力弱于正常FGF9阿利辛蘭ALCIANBLUE染色也證實突變FGF9作用的軟骨細(xì)胞的染色低于正常對照這些結(jié)果提示FGF9的突變可能減少了成熟軟骨細(xì)胞的數(shù)量檢測小鼠關(guān)節(jié)FGF9的表達顯示FGF9在生長板的增殖區(qū)和肥大區(qū)軟骨中表達因此突變FGF9可能通過影響軟骨細(xì)胞的增殖及終末分化進而影響了軟骨內(nèi)骨化的過程最終導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)融合為進一步研究FGF9在SYNS3型發(fā)生中的作用本研究建立了在軟骨組織中特異性表達正常及突變FGF9CDNA的轉(zhuǎn)基因小鼠為在體研究提供實驗?zāi)Ｐ偷诙糠秩N單基因遺傳病的遺傳學(xué)分析一、COLLA1基因新的剪接突變導(dǎo)致I型成骨不全成骨不全OSTEOGENESISIMPERFECTAOI是一種常染色體顯性遺傳病以骨脆性增加及結(jié)締組織異常為特點90﹪的病人是由編碼I型膠原鏈的COLLA1和COLLA2基因突變所引起的兩個基因分別由51個和52個外顯子組成本研究對國內(nèi)一個成骨不全家系進行基因突變檢測及突變效應(yīng)分析為研究中國人群成骨不全基因突變的特點提供線索通過對成骨不全I型膠原基因COLLA1和COLLA2所在的17號染色體和7號染色體分別進行連鎖分析對致病基因做初步判斷由于OI基因突變位點與臨床表型有一定相關(guān)根據(jù)家系病人臨床表現(xiàn)選擇部分致病基因外顯子進行初步突變篩選發(fā)現(xiàn)該家系所有患者在COL1A1基因的第8個內(nèi)含子剪切受體位點處發(fā)生AG→GGIVS82AG對比人類Ⅰ型和Ⅲ型膠原突變數(shù)據(jù)庫HUMANTYPETYPECOLLAGENMUTATIONSDATABASE和人類基因組突變數(shù)據(jù)庫HUMANGENOMEMUTATIONSDATABASE以及文獻檢索未發(fā)現(xiàn)關(guān)于該突變的報道本研究結(jié)合病人臨床表型首先選取部分外顯子進行突變篩查這種策略為OI的致病基因突變篩查提供了一個新的思路表現(xiàn)型與突變類型的相關(guān)性研究對產(chǎn)前診斷及基因治療具有一定參考價值二、Ⅰ型糖原累積癥家系的分子遺傳學(xué)分析Ⅰ型糖原累積癥GSDIA；MIM232200是常染色體隱性遺傳病是由葡萄糖6磷酸酶GLUCOSE6PHOSPHATASEG6PASE缺陷引起目前已有80多種突變類型被報道不同種族有不同的突變熱點G6PASE基因第5外顯子是突變高發(fā)區(qū)域本研究在一個GSDIA家系發(fā)現(xiàn)一新的突變提取病人及其父母和家系中其他正常人的外周血基因組DNA擴增G6PASE基因編碼區(qū)并直接測序結(jié)果顯示病人為第5外顯子發(fā)生復(fù)合性突變第727位核苷酸發(fā)生GT顛換727GT同時第1071位核苷酸發(fā)生CA顛換使第331位氨基酸由丙氨酸突變?yōu)楣劝彼酇331E第5外顯子727GT是中國人中常見的突變類型而A331E突變?yōu)槭状螆蟮肋@一復(fù)合基因突變的發(fā)現(xiàn)豐富了中國人G6PASE基因突變譜并又一次證實中國人的突變熱點區(qū)域在第5外顯子為縮小G6PASE基因突變篩查范圍提供了依據(jù)三、老年高膽固醇血癥人群中PCSK9基因序列變異的研究高膽固醇血癥是常見的復(fù)雜性疾病其中一部分是由單基因突變所致而大多數(shù)是多個基因和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果本研究使用PCR產(chǎn)物測序方法對PCSK9基因外顯子、外顯子一內(nèi)含子交界區(qū)及5UTR區(qū)、3UTR區(qū)進行測序綜合正反向測序結(jié)果以識別和鑒定基因內(nèi)的各種序列變異所測PCSK9基因片段總長度5548個堿基有22個SNP其中有5個SNP為首次報道在首次報道的SNP中發(fā)生氨基酸改變的有2個R93C、A168V另外已報道與LDLC水平有相關(guān)性的1474V及E670G在該群體中也有發(fā)現(xiàn)此次篩查為進一步研究這些變異在中國老年高膽固醇血癥群體中與LDLC水平的相關(guān)性提供了線索

簡介：第一部分復(fù)灌Ⅰ號注射液對大鼠肢體缺血再灌注骨骼肌損傷保護機制的研究。第一章復(fù)灌Ⅰ號注射液對大鼠肢體缺血再灌注氧化損傷的保護機制。目的探討復(fù)灌Ⅰ號注射液對大鼠肢體缺血再灌注骨骼肌氧化損傷的保護機制。方法選用SD雄性大鼠56只，隨機分為對照組CONTROL組、缺血再灌注組IR組和復(fù)灌Ⅰ號藥物干預(yù)組ⅠIR組三大組。對照組8只未造成缺血再灌注損傷；缺血再灌注組24只，再分為再灌注后2HIR2、4HIR4和8HIR8三小組，每小組8只；復(fù)灌Ⅰ號藥物干預(yù)組24只，再分為再灌注后2HⅠIR2、4HⅠIR4和8HⅠIR8三小組，每小組8只。對照組所有大鼠用橡皮筋松弛環(huán)繞雙后肢不阻斷血流；IR組和ⅠIR組，按張連元所報道的方法復(fù)制SD大鼠后肢缺血再灌注模型。對照組動物不給藥物；IR組于造成缺血前12小時、造成缺血時和再灌注時于腹腔內(nèi)各注射生理鹽水1ML；ⅠIR組于造成缺血前12H、缺血時和再灌注時腹腔各注射復(fù)灌Ⅰ號注射液1ML。各組動物于相應(yīng)時間點切取約1000MG右側(cè)腓腸肌中部肌肉，冰鹽水中快速洗去血液，濾紙吸干水份，剪碎制成勻漿，用于骨骼肌MDA、SOD、MPO的檢測，另切取部分腓腸肌，固定于福爾馬林溶液中行組織切片檢查，再切取左后肢腓腸肌行干濕重比值的檢查，然后于下腔靜脈穿刺取血，離心，行血清MDA、SOD、MPO、NO檢測。結(jié)果1MDA的檢測結(jié)果IR與ⅠIR各組MDA含量均較對照組為高其差異有統(tǒng)計學(xué)意義P005，其余各組與對照組比，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P005外，其余各時間點其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P和SERCA的RTPCR檢測。結(jié)果1骨骼肌型RYRMRNA的RTPCR結(jié)果在肢體缺血再灌注損傷再灌注8H內(nèi)，IR組骨骼肌型RYRMRNA在再灌注0H、2H表達上調(diào)，與對照組相比，其差異有顯著性意義P005，缺血2H時其表達也最強，但要比IR為弱，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義P005，8H也表現(xiàn)為降低，但降幅要比IR組為小，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義PMRNA的RTPCR。結(jié)果對于SERCAMRNA的表達，再灌注8H內(nèi)隨時間的延長其表達逐漸下降，與對照組相比，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義PMRNA早期表達上調(diào)，后期表達下降，SERCAMRNA表達隨時間的延長而逐漸下降。這可能是肢體缺血再灌注骨骼肌損傷的重要原因之一。2復(fù)灌Ⅰ號對缺血再灌注損傷中骨骼肌的保護作用可能是通過雙向調(diào)節(jié)RYR以使早期減輕胞漿鈣超載，后期保護細(xì)胞器的作用來實現(xiàn)的。這可能是其防治肢體缺血再灌注損傷，減輕骨骼肌損傷的主要分子機制之一。

簡介：目的制備一種新型的殼聚糖聚合物水凝膠，并使其具備以下功能和特性對細(xì)胞分裂增值有促進作用可成為多種細(xì)胞、藥物、生物活性物質(zhì)的載體能作為活性組織細(xì)胞生長的支架促進骨組織再生愈合。方法1）以天然殼聚糖、明膠為原料，先按多種配比與化學(xué)交聯(lián)劑京尼平、離子交聯(lián)劑甘油2磷酸二鈉進行雙重交聯(lián)，再把可在符合初始設(shè)計要求規(guī)定時間范圍內(nèi)成膠的殼聚糖水凝膠樣品制備成多個不同配比的水凝膠細(xì)胞培養(yǎng)基，然后對所有培養(yǎng)基樣品進行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種，最后以相差顯微鏡觀察水凝膠培養(yǎng)基中生長情況為標(biāo)準(zhǔn)，初步篩選出適合細(xì)胞生長的殼聚糖水凝膠制備方案。2）選用多種常用的骨生物工程材料檢測方法對初篩制備出的水凝膠進行理化特性方面檢測，包括對水凝膠進行表面電鏡掃描、振蕩剪切流變學(xué)、體外釋放動力學(xué)檢測，測定剛度及表面結(jié)構(gòu)。在生物學(xué)特性檢測方面，對水凝膠細(xì)胞巢細(xì)胞培養(yǎng)進行熒光染色激光共聚焦掃描、細(xì)胞活力增殖實驗、細(xì)胞誘導(dǎo)遷移實驗、實時PCR測定人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨基因的表達、免疫組化法測定ALP表達，以及新西蘭大白兔橈骨缺損修復(fù)模型實驗，根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)及體內(nèi)外成骨特性，進一步篩選出更好的水凝膠配比。結(jié)果1）通過水凝膠理化特性檢測和體內(nèi)外成骨實驗的篩選實驗，篩選后的水凝膠制備流程和配比為185％殼聚糖溶液、純水、18％明膠溶液，按4∶1∶1比例混勻攪拌30MIN后加熱至35℃，再加入濃度為50MMOL8UL、體積比35∶1的京尼平溶液化學(xué)交聯(lián)20MIN，再加入濃度08G％ML、體積比160∶1的甘油2磷酸二鈉離子交聯(lián)劑混勻攪拌5MIN實現(xiàn)離子交聯(lián)過程，放置37度溫箱孵育120MIN。2）水凝膠表面電鏡掃描顯示，水凝膠表面呈多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，孔表面欠光滑，孔徑隨水凝膠中京尼平濃度的增加而逐漸增大。水分子含量高，利于液體交換，可提供適合細(xì)胞生長的微環(huán)境。3）流變學(xué)檢測中發(fā)現(xiàn)，水凝膠剛性模量變化范圍在01437±00100KPA和35787±03200KPA之間粘彈性模量在00026±00005KPA和00150±00085KPA之間。水凝膠原位成膠的時間在10133MIN之間。隨著京尼平濃度的增加，水凝膠原位成膠速度加快，成膠明顯縮短，剛性模量GKPA增加、粘彈性模量G”KPA增加。配比41NX12X，16X，8X成膠時間、表面剛度更符合要求。4）激光共聚焦掃描顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，所有配比為41NX系列的水凝膠培養(yǎng)基均能支持細(xì)胞正常增殖、分化。配比為4112X的水凝膠，細(xì)胞分化、生長狀態(tài)最好，細(xì)胞增殖速度最快。5）采用ELISA法檢測到攜載不同濃度RHBMP2的水凝膠均有良好的體外釋放動力學(xué)效果，所有濃度的水凝膠載體均能穩(wěn)定持續(xù)地釋放不同濃度的BMP2，早期表現(xiàn)為爆發(fā)性釋放，7天后呈持續(xù)穩(wěn)定的緩慢釋放，28天時仍達640％±055％。釋放濃度、釋放速度與載體BMP2原始濃度呈正相關(guān)。6）接種于水凝膠培養(yǎng)基中的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用MTT法觀察發(fā)現(xiàn)實驗組第17天的增殖速度明顯超過對照組，且增殖峰值提前。7采用小室法觀察法觀察細(xì)胞遷移實驗顯示，所有攜載活性誘導(dǎo)因子RHBMP2的水凝膠培養(yǎng)基對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞都有誘導(dǎo)作用，但不同RHBMP2濃度的水凝膠載體對同種細(xì)胞，誘導(dǎo)作用不同，實驗組中RHBMP2濃度500NGML的水凝膠載體，誘導(dǎo)作用最強。8）實時PCR檢測培養(yǎng)于攜帶不同濃度BMP2的水凝膠上的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨基因MRNA的表達時發(fā)現(xiàn)，所有攜載BMP2的實驗組與空白對照組相比，低濃度的BMP2對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨基因的表達即有顯著的促進作用，隨攜載濃度增加促進作用加強。9）在新西蘭大白兔橈骨骨缺損模型的體內(nèi)動物實驗中，術(shù)后4周、8周、12周成骨情況觀察，X線照片、MICROCT掃描三維重建成像及特殊成骨染色三個方面均顯示攜帶BMP2及自體成骨細(xì)胞的水凝膠實驗組與對照組相比有明顯統(tǒng)計學(xué)差異、實驗組在骨形成及修復(fù)方面有明顯優(yōu)勢。結(jié)論制備、篩選出了新型水凝膠，以生物工程材料評價方法對其理化特性、體、內(nèi)外生物學(xué)特性進行檢測、評估，認(rèn)為其制備方案及流程合理，達到初始設(shè)計目標(biāo)及要求，能為活性組織細(xì)胞生長提供多功能支持的微環(huán)境，對細(xì)胞增殖分化有促進作用并可作為多種細(xì)胞、藥物、生物活性物質(zhì)的載體，可作為骨細(xì)胞生長支架，促進骨組織再生，為解決臨床中長段骨缺損、骨不連的治療難題，提供一個新的思路和方法。

簡介：肌醇屬維生素產(chǎn)品，廣泛存在于各種天然動物、植物及微生物組織中。肌醇主要應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飼料、日化等行業(yè)，是一種高附加值的精細(xì)化工原料。近年來該產(chǎn)品由于一些新用途的不斷開發(fā)而成為國際市場上緊俏的化工商品之一。本研究以自育南瓜品種一錦繡為材料，對其生長發(fā)育過程中營養(yǎng)物質(zhì)和肌醇的動態(tài)變化趨勢進行了分析，對溶劑法、微波法和超聲波法等肌醇粗提法提取效果進行了對比，以確定最佳粗提工藝。在提純過程中，經(jīng)由傳統(tǒng)的沉淀法和大孔吸附樹脂提純，高效液相色譜分段收集，制備得到肌醇樣品。通過薄層層析色譜、特征掃描、示差折光高效液相色譜、紅外光譜、質(zhì)譜對所制備的肌醇特性進行了研究，本研究將對南瓜中肌醇的深加工和綜合利用提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。主要結(jié)果如下1對南瓜果實在不同發(fā)育時期和采摘后的儲藏期間，其中一些營養(yǎng)成份和肌醇的含量變化進行研究，結(jié)果表明水分、粗纖維、總酸、VC、Β胡蘿卜素以及氨基酸等在南瓜發(fā)育到35D～40D期間處于積累期，均沒有達到峰值。南瓜多糖、還原糖和蛋白質(zhì)南瓜授粉后第35D其含量分別為45395MGG、18820MGG、5932MGG，處于積累上升期，因此這個時間比較適合作為提取肌醇用的南瓜采摘期，可減少營養(yǎng)物質(zhì)對后期肌醇提取純化的影響。對授粉后20D～65D發(fā)育期間的南瓜，以及儲藏15D期間的南瓜中肌醇含量的變化進行研究，研究表明南瓜授粉后35D肌醇達到峰值1304MGG，在授粉后65D采摘時僅剩669MGG，肌醇含量變化相差近一倍，所以南瓜發(fā)育過程中肌醇含量的變化明顯，并對后期的提取量影響顯著。2在對肌醇粗提實驗中，對比了溶劑法、微波法、超聲波法三種方法對肌醇提取率的影響。溶劑法提取南瓜肌醇的優(yōu)化實驗中，得出的最佳工藝參數(shù)為選擇乙醇作為提取溶劑，溫度為50℃，料液比為140GML，提取時間為2H，提取級數(shù)為2級，得到最高肌醇提取率為6376％。微波法提取南瓜肌醇的優(yōu)化實驗，正交實驗研究表明，最佳提取條件為微波頻率為中火，時間為35S，乙醇濃度為65％，料液比為120GML。通過方差分析發(fā)現(xiàn)時間和溫度對實驗結(jié)果的影響是顯著的。在此提取條件下，南瓜肌醇的最大提取率為6764％。超聲波法最佳提取條件為乙醇濃度為50％，料液比115GML，超聲波作用時間為60MIN，提取溫度為70℃。從肌醇提取率比較，超聲波法提取效果最佳，提取率可達7158％。3對比了三種蛋白酶的用量及處理時間對除蛋白效果的影響，并與SEVAGE法除蛋白的效果進行對比，研究表明利用中性蛋白酶除蛋白為最佳除蛋白方法，除蛋白后肌醇最高提取率達到7651％；中性蛋白酶除蛋白的最佳作用時間為4H，溫度45℃，用量為2UMG。針對活性炭脫色的條件，選擇均勻?qū)嶒炞鳛閮?yōu)化實驗方法。根據(jù)回歸方程，參數(shù)優(yōu)化后確定即活性炭用量為45％，溫度為60℃，時間為30MIN為最佳脫色條件。在沉淀多糖方面選擇以乙醇丙酮31、提取液沉淀劑14效果最好，沉淀后多糖含量僅為482％?？疾炝舜罂孜綐渲瑢兓挠绊?，優(yōu)化了其提取條件，得出洗脫劑流量為4BVH，乙醇濃度為85％，洗脫次數(shù)為7次，達到的最高提取率為9023％，大孔樹脂易于操作，去除雜質(zhì)效率高，在分離純化南瓜肌醇方法中具有一定的推廣價值。4經(jīng)過超聲波提取，純化后的肌醇其理化性質(zhì)顏色、溶解性、熔點、相對密度、水分和一些鹽類的測定分析，指標(biāo)均符合中華人民共和國藥典中關(guān)于肌醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。定性分析經(jīng)過薄層層析色譜和特征掃描光譜分析，在與標(biāo)樣的對比后，確定了南瓜中提取的肌醇與標(biāo)準(zhǔn)肌醇的性質(zhì)相同。示差折光高效液相色譜分析，肌醇標(biāo)樣出峰時間為9528MIN與樣品出峰時間9676MIN相近，并排除了葡萄糖等雜質(zhì)的影響。確定了由南瓜中提取的肌醇符合中華人民共和國藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。通過質(zhì)譜分析，確定肌醇的分子量為180。肌醇標(biāo)樣與樣品經(jīng)紅外光譜分析，匹配度達到9345％。

簡介：分類號R7835密級⑧◆∥▲單位代碼學(xué)號10422200813180茹辦；碩士學(xué)位論文SA力DO療GU力JYERSJFY朋ASFE，’SRES，S論文題目濟南地區(qū)男I生兒童骨面型與上氣道形態(tài)及舌骨位置關(guān)系的研究CORRELATIONSOFSKELETALFACIALTYPEⅥTHUPPERAIRWAYMORPHOLOGYANDHYOIDBONEPOSITIONOFMALECHILDRENINJNAN作者姓名專業(yè)導(dǎo)師2011年04月28日目錄中文摘要1英文摘要4符號說明8前言9日LJ舌V材料方法13結(jié)果17討論30結(jié)論35附圖36參考文獻37病例報告41致謝58攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章目錄59

簡介：目的探討上瞼提肌縮短聯(lián)合部分瞼板切除矯正中、重度上瞼下垂的方法和療效。資料和方法對13例（2012年7月～2014年2月）（17只眼）中、重度上瞼下垂患者行上瞼提肌縮短聯(lián)合部分瞼板切除。其中男性4例，女性9例；單側(cè)9例，雙側(cè)4例。年齡4～76歲，平均年齡22歲。術(shù)后隨訪3～12個月（平均6個月），采用以下指標(biāo)進行檢查、評價及分析手術(shù)療效⑴上瞼緣的位置⑵上瞼緣弧度⑶上瞼緣高度對稱度⑷眼瞼閉合程度⑸雙重瞼皺璧⑹上瞼遲落現(xiàn)象⑺額肌活動度⑻患者滿意度⑼暴露性角膜炎。結(jié)果本組13例（17只眼）中、重度上瞼下垂均矯正滿意（外觀滿意，弧度自然）。早期均有不同程度的眼瞼閉合不全的情況，一般術(shù)后3～6個月內(nèi)完全恢復(fù)。除1例（1只眼）在用力狀態(tài)下無法完全閉合外，大部分眼瞼能自然閉合。其中1例因術(shù)后復(fù)發(fā)，重瞼皺璧變淺、消失，其余均明顯。有2例（2只眼）過矯，有1例（1只眼）可以觀察到明顯的上瞼遲滯現(xiàn)象，余均獲得良好效果。均未出現(xiàn)暴露性角膜炎，且上瞼緣弧度均基本滿意。結(jié)論上瞼提肌縮短聯(lián)合部分瞼板切除術(shù)，此手術(shù)操作簡單，并發(fā)癥少、療效確切。能達到既符合眼瞼生理功能，又改善美觀的效果，是治療該疾病的比較滿意術(shù)式。

簡介：碩士學(xué)位論文CSSICKIP1修飾的功能化種植體的成骨功效及體內(nèi)應(yīng)用研究修飾的功能化種植體的成骨功效及體內(nèi)應(yīng)用研究張力培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型專業(yè)學(xué)位一級學(xué)科專業(yè)類口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科專業(yè)口腔修復(fù)學(xué)研究方向種植體表面優(yōu)化指導(dǎo)教師張玉梅教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院修復(fù)科二O一五年五月分類號R7831UDC61631密級公開第四軍醫(yī)大學(xué)THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略語表1中文摘要3英文摘要7前言11文獻回顧13正文27第一部分CSSICKIP1功能化種植體的制備及表面性狀分析271材料、試劑和儀器272實驗方法283實驗結(jié)果304討論335結(jié)論35第二部分CSSICKIP1功能化種植體對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（RBMMSC）行為影響的研究361材料、試劑和儀器362實驗方法373實驗結(jié)果394討論435結(jié)論44第三部分CSSICKIP1功能化種植體對骨質(zhì)疏松大鼠種植體骨結(jié)合效應(yīng)的評價451材料、試劑和儀器452實驗方法463實驗結(jié)果48

簡介：點擊查看更多補益肝腎、活血通絡(luò)法治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的隨著工業(yè)發(fā)展及人們出行逐漸增多，周圍神經(jīng)損傷有明顯上升趨勢，且多發(fā)生在青壯年，其預(yù)后差，致殘率高，給患者及社會造成極大危害。由于周圍神經(jīng)解剖和功能上的特殊性，周圍神經(jīng)損傷后的神經(jīng)再生、功能恢復(fù)、失神經(jīng)骨骼肌萎縮后的修復(fù)是一個復(fù)雜的過程。周圍神經(jīng)損傷不但包括周圍神經(jīng)軸索及髓鞘損傷，還包括神經(jīng)周圍結(jié)締組織及支持結(jié)構(gòu)損傷兩大部分。臨床上常采用保守治療及手術(shù)治療。保守治療包括藥物治療、物理治療及康復(fù)治療。手術(shù)治療包括神經(jīng)探查松解術(shù)、神經(jīng)減壓術(shù)、神經(jīng)修復(fù)術(shù)、神經(jīng)移植術(shù)等。盡早促進受損神經(jīng)功能修復(fù)、避免失神經(jīng)肌肉萎縮、恢復(fù)肢體運動和感覺功能成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點，其中電刺激療法應(yīng)用最為廣泛，刺激方法有經(jīng)皮植入式、術(shù)中超強電刺激等。經(jīng)皮電刺激通過興奮神經(jīng)肌肉、改善微循環(huán)、加速神經(jīng)纖維再生和軸突生長，從而起到促進神經(jīng)功能恢復(fù)的作用，具有方便無創(chuàng)，易被廣大患者接受等特點。避免了植入式電極埋置體內(nèi)及以后再次取出造成的醫(yī)療創(chuàng)傷，其臨床療效與治療中定位、參數(shù)、治療時機選擇有著密切的關(guān)系。故本課題旨在對周圍神經(jīng)損傷患者，通過肌電圖精確定位定量電刺激治療，探討其治療效果及作用機制，以達到提高治愈率、降低致殘率的目的。方法選取自2011年5月至2013年4月在我院診治的臨床及肌電圖ELECTROMYOGRAM，EMG檢查證實為上肢不完全周圍神經(jīng)損傷的患者86例，其中男性50例，女性36例年齡17～55歲，平均年齡（430±1199）歲病史（336±1214）D神經(jīng)損傷原因勞損30條、摔傷46條、牽拉傷10條、砸傷18條。根據(jù)入組標(biāo)準(zhǔn)按隨機數(shù)字法分為治療組43例，受損神經(jīng)54條和對照組43例，受損神經(jīng)50條。兩組患者在給予營養(yǎng)神經(jīng)藥物、康復(fù)訓(xùn)練基礎(chǔ)上，對照組患者給予低頻電刺激治療，治療組患者給予肌電圖定位定量經(jīng)皮電刺激治療，療程6個月。治療方法治療組選用（四通道VIKINGQUEST型，美國尼高力公司）肌電圖誘發(fā)電位儀電刺激器，治療前定位神經(jīng)損傷位置，正極置于損傷部位近端神經(jīng)體表投影處、負(fù)極置于損傷部位遠端，對損傷神經(jīng)行經(jīng)皮神經(jīng)肌電刺激治療。電流0～100MA電壓0～100V刺激模式重復(fù)脈寬01～02MS頻率1～2HZ，刺激強度自0MA開始逐漸加大刺激量達到超強刺激為標(biāo)準(zhǔn)，即當(dāng)刺激強度增加到一定程度，復(fù)合肌肉動作電位不再增加時，再將刺激強度增加20％為超強刺激。對照組采用DLZⅡ直流感應(yīng)電療機（汕頭市醫(yī)用設(shè)備有限公司生產(chǎn)）行低頻電刺激治療，主要參數(shù)直流輸出電流0～50MA電壓0～60V頻率10～400HZ脈沖寬度60～400US。正極置于受損神經(jīng)近端，負(fù)極置于遠端，刺激強度以受損神經(jīng)支配肌肉可見收縮為準(zhǔn)，不能引起肌肉明顯收縮時則以不引起鄰近神經(jīng)所支配肌肉收縮作為原則。分別于治療3個月、6個月行神經(jīng)功能評定及EMG檢測，對比治療前后兩組患者神經(jīng)功能恢復(fù)情況和EMG變化特點，包括運動傳導(dǎo)速度MOTCONDUCTIONVELOCITYMCV、潛伏期LATENCYLAT、波幅（AMPLITUDE，AMP）變化。療效評定從臨床與肌電圖檢測結(jié)果兩方面進行療效評定，①臨床療效評定標(biāo)準(zhǔn)痊愈功能完全恢復(fù)，EMG檢查無異常顯效運動功能基本恢復(fù)，EMG檢查少許纖顫電位、正銳波，基本正常好轉(zhuǎn)運動功能部分恢復(fù)，EMG檢查有纖顫電位、正銳波，運動單位減少無效治療前后無明顯改變。②肌電圖主要檢測MCV、LAT、AMP。結(jié)果1一般資料共入組病例89例，脫落3例，治療組1例，對照組2例，共完成有效病例86例，治療組43例，受損神經(jīng)54條對照組（43例，受損神經(jīng)50條），兩組患者性別、年齡、神經(jīng)損傷部位等資料比較，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。2兩組患者臨床療效比較治療6個月后，痊愈率治療組為465％（20例），對照組為1627％7例，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義X2912，P＜005顯效率治療組為4186％（18例），對照組為4883％（21例），兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（X2288，P＞005）總有效率（痊愈顯效好轉(zhuǎn)）治療組9302％（40例），對照組為7907％（34例），兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義X2487，P＜005。3兩組患者EMG情況比較治療6個月后，正中神經(jīng)MCV治療組為5235±405MS，對照組為4776±624MS，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義T236，P＜005LAT治療組為331±087MS，對照組為464±074MS，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T443，P＜005）AMP治療組為762±104MV，對照組為518±113MV，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T61，P＜005）。橈神經(jīng)MCV治療組為5498±579MS，對照組為4624±624MS，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T517，P＜005）LAT治療組為354±152MS，對照組為479±117MS，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T337，P＜005）AMP治療組為378±106MV，對照組為206±141MV，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T479，P＜005）。尺神經(jīng)LAT治療組為306MS，對照組為391MS，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（T404，P＜005）MCV治療組為5052MS，對照組為4624MS，兩組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（T167，P＞005）AMP治療組為414MV，對照組為367MV，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（T124，P＞005）。結(jié)論1經(jīng)皮神經(jīng)肌電刺激治療周圍神經(jīng)損傷是一種安全有效的治療方法。2經(jīng)皮神經(jīng)肌電刺激治療上肢周圍神經(jīng)損傷，選擇適當(dāng)刺激參數(shù)、電流、電壓、脈寬、模式及刺激范圍治療效果較好。3周圍神經(jīng)損傷患者經(jīng)皮神經(jīng)肌電刺激療效明顯優(yōu)于低頻電刺激。4周圍神經(jīng)損傷后，積極給予營養(yǎng)神經(jīng)藥物、康復(fù)訓(xùn)練、合適的經(jīng)皮神經(jīng)肌電刺激等綜合治療，可明顯提高治愈率，降低致殘率。

簡介：點擊查看更多子宮動脈栓塞術(shù)治療子宮腺肌病臨床療效分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任?！巍?、。一，豢／／。_羔≥I0、研究生簽名僵敏導(dǎo)師簽章穿穆甏蘭級學(xué)籬攀導(dǎo)辯T、；I，砷，壚年歹，月繡日、|、一、∥‘河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名痊敝導(dǎo)師簽章。美譬舅漕港萼刈中年歲月西中文摘要特發(fā)性炎癥性肌病的臨床及病理學(xué)特點分析摘要目的特發(fā)性炎癥性肌病IDIOPATHICINFLAMMATORYMYOPATHIES，IIMS是一組獲得性自身免疫相關(guān)的骨骼肌疾病，炎細(xì)胞浸潤是其重要的骨骼肌病理特點之一。IIMS主要包括多發(fā)性肌炎POLYMYOSITIS，PM、皮肌炎DERMATOMYOSITIS，DM、散發(fā)性包涵體肌炎SPORADICINCLUSIONBODYMYOSITIS，SIBM、非特異性肌炎NONSPEIFICMYOSITIS，NSM以及近期研究的熱點免疫介導(dǎo)的壞死性肌病IMMUNEMEDIATEDNECROTIZINGMYOPATHY，IMNM?？剐盘栕R別顆粒抗體相關(guān)壞死性肌病ANTISIGNALRECOGNITIONPARTICLEASSOCIATEDNECROTIZINGMYOPATHY，ASANM屬于IMNM的一種主要亞型。ASANM的臨床表現(xiàn)、實驗室檢查和肌電圖檢查結(jié)果多類似于PM，但病情較嚴(yán)重，且對糖皮質(zhì)激素治療抵抗。常規(guī)組織病理學(xué)檢查表現(xiàn)為廣泛的肌纖維壞死、再生和間質(zhì)增生，無或較少炎癥細(xì)胞浸潤?？剐盘栕R別顆粒SIGNALRECOGNITIONPARTICLE，SRP抗體屬于肌炎特異性自身抗體MYOSITISSPECIFICAUTOANTIBODIES，MSAS，是診斷該病的重要依據(jù)，主要表達于壞變的肌纖維胞漿中。由于IIMS各亞型間的臨床表現(xiàn)和常規(guī)組織病理學(xué)相似，因此僅僅依據(jù)臨床表現(xiàn)和常規(guī)組織病理學(xué)檢查極易誤診、漏診，延誤治療時機。本實驗分別利用肌肉組織常規(guī)病理學(xué)染色和免疫組織化學(xué)染色方法對診斷為IIMS的病人肌肉標(biāo)本進行檢測，包括肌肉炎細(xì)胞浸潤情況、浸潤的炎細(xì)胞亞群及SRP抗體表達情況，并總結(jié)其臨床和病理特點，對常見的特發(fā)性炎癥性肌病類型進行進一步分析，為日后更準(zhǔn)確的鑒別及分型診斷提供臨床及病理理論依據(jù)，也對疾病治療及判斷預(yù)后提供指導(dǎo)。方法研究分為2組一實驗組和對照組，實驗組27例，選取我院2010年8月至2014年1月間臨床和病理資料保存完整并診斷為特發(fā)性炎癥性肌病的患者，其中符合經(jīng)BOHANPETER診斷標(biāo)準(zhǔn)或DALAKAS診斷標(biāo)準(zhǔn)的PM患者12例、DM患者12歹LJ和經(jīng)GRIGGS標(biāo)準(zhǔn)診斷的MM患者3例，對照組為肌肉病理檢查正常者8例?？偨Y(jié)其發(fā)病年齡、性別、病程、家族史及個人史、

簡介：目的為了加速骨溶解后新骨的形成、礦化及與假體達成骨性結(jié)合，將具有特異性促進成骨分化及礦化功能的NELL1因子應(yīng)用于小鼠顱骨骨溶解模型，研究NELL1因子對顱骨骨溶解后的影響，從而為臨床上治療關(guān)節(jié)置換后磨屑致骨溶解尋找一種新的有效治療方法。方法構(gòu)建同時攜有綠色熒光蛋白GFP報告基因和NELL1基因的重組腺病毒載體ADGFPNELL1，經(jīng)擴增、純化后轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞BMSCS對重組腺病毒進行鑒定及確認(rèn)。進一步應(yīng)用ADGFPNELL1轉(zhuǎn)染小鼠成骨細(xì)胞MC3T3E1，觀察ADGFPNELL1對MC3T3E1細(xì)胞增殖分化的影響；并轉(zhuǎn)染到體內(nèi)小鼠聚乙烯PE顆粒致顱骨骨溶解模型中，具體如下將76只SD大鼠隨機分為4組N19，即假手術(shù)組SHAM、顆粒組PE、NELL1組PEADGFPNELL1及GFP組PEADGFP，各組于術(shù)后1天分別于術(shù)區(qū)皮下注射01ML生理鹽水、01ML生理鹽水、01MLADGFPNELL1、01MLADGFP，于術(shù)后10天，各組取5只采用小動物活體熒光成像系統(tǒng)檢測NELL1及GFP表達情況。所有動物于術(shù)后10天取材行MICROCT、組織學(xué)及免疫組化，PCR和生物力學(xué)檢測。結(jié)果①成功構(gòu)建出ADGFPNELL1重組腺病毒，用構(gòu)建好的病毒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCS后，NELL1蛋白及GFP均陽性表達。②構(gòu)建成功的ADGFPNELL1對小鼠成骨細(xì)胞MC3T3E1無明顯的毒性作用，促進了MC3T3E1細(xì)胞的分化及礦化作用；③ADGFPNELL1局部應(yīng)用于小鼠顱骨骨溶解模型，術(shù)后10天可見骨溶解區(qū)GFPNELL1蛋白表達。④術(shù)后10天MICROCT觀察小鼠骨溶解模型顯示NELL1組小鼠顱骨骨量明顯增加，表現(xiàn)為骨礦密度增加，骨質(zhì)增厚，骨表面光滑，連續(xù)性好。組織學(xué)切片顯示顆粒組及GFP組顱骨中央?yún)^(qū)于術(shù)后10天有明顯的骨量丟失及結(jié)構(gòu)破壞，而NELL1組可見明顯的新生骨填補了骨溶解致的骨量丟失。免疫組化結(jié)果顯示NELL1組骨橋蛋白OPN表達高于其他組。PCR結(jié)果示成骨相關(guān)基因OPN、骨鈣素OCN表達明顯上調(diào)，生物力學(xué)測試NELL1組小鼠顱骨彈性模量明顯優(yōu)于顆粒組及GFP組。結(jié)論①構(gòu)建并純化后的重組腺病毒載體ADGFPNELL1可高效轉(zhuǎn)染細(xì)胞并穩(wěn)定表達NELL1和GFP兩種蛋白；②ADGFPNELL1仍具有較強的促成骨功能；③ADGFPNELL1能有效局部轉(zhuǎn)染到小鼠體內(nèi)促進成骨平衡磨屑致骨溶解引起的骨量丟失。NELL1不僅促進了局部新骨形成，而且促進了骨痂的礦化、改建，形成結(jié)構(gòu)及生物力學(xué)強度更佳的骨痂結(jié)構(gòu)。提示我們，NELL1因子用于磨屑致骨溶解的防治，可以加速成骨填補骨溶解后的骨量丟失，從而與假體形成骨性結(jié)合，進而避免松動的發(fā)展減少翻修的機會，具有一定的實用價值。