簡(jiǎn)介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文脛骨干骺端松質(zhì)骨游離植骨對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名彭沖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王予江20070607ABSTRACTABSTRACTOBJECTIVEUSINGTHEDEVELOPMENTSTAGEEXPERIMENTALANIMALTOINVESTIGATEAUTOGENOUSCANCELLOUSBONEHARVESTINGFROMTIBALPROXIMALMETAPHYSESTOINFLUENCEONTIBIALGROWTHMETHODSRANDOMDIVIDTWOGROUPSOFEIGHTTHREEMONTHOLDLOCALGOATSUSINGONESIDEPOSTERIORLIMBTIBIA弱SUPPLYBONESOURCEANDANOTHERSIDEASBLANKBONEHARVESTWASCARRIEDOUTINONEGROUPWITHHALFOFTOTALAMOUNTOFMETAPHYSESCANCELLOUSBONEANDWITHTWOTHIRDOFTOTALAMOUTINANOTHERGROUPTOUNLOADBOTHSIDESTIBIASINTWELVEWEEKSOFPOSTPOSTOPERATIVEANDOBSERVEGROWTHANDDEVELOPMENTINDEX，EVALUATEDBYXRAYANALYSISANDMEASURETIBIALENGTH，WIDTHANDTIBIALANGLEANDHISTOLOGYRESULTNOSIGNIFICANTDIFFERENCEAMONGGROUPSANDEXPERIMENTSANDBLANKSABOUTLENGTH，WIDTHANDTIBIALANGLEPO05～LSHOWNORMALBONEFORMATIONINHISTOLOGYCONCLUSIONTHEREISNOSIGNIFICANTINFLUENCEOILTIBIALGROWTHTHATBONEHARVESTINGSTRICTCONTROLLEDINTWOTHIRDOFTOTALAMOUNTFROMTIBIALPRXIMALMETAPHYSESKEYWORDSTIBIA；METAPHYSES；CANCELLOUS；BONE；GROWTH；GOATⅢ

簡(jiǎn)介：背景骨缺損是臨床上常見(jiàn)的并發(fā)癥，也是臨床上較為棘手的問(wèn)題，多由于創(chuàng)傷、感染及腫瘤切除后等因素所導(dǎo)致。骨不連引發(fā)的骨缺損多為原始創(chuàng)傷嚴(yán)重、急診處理不當(dāng)引起，若伴有骨感染時(shí)治療會(huì)更為困難。臨床上多伴有肌肉萎縮、骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)僵硬等并發(fā)癥其他并發(fā)癥如疼痛、肢體功能障礙等不僅給患者帶來(lái)了極大身體和心理上的負(fù)擔(dān)，同時(shí)也給患者帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。由于創(chuàng)傷后部分骨缺損的治療效果欠佳，過(guò)去截肢常成為此類疾病的最終治療方式。大量松質(zhì)骨移植對(duì)該病的治療是一個(gè)重大突破。骨搬運(yùn)與骨牽引主要用于210CM骨缺損，但存在骨折對(duì)接部分延遲愈合，治療時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題游離骨皮瓣則用于512CM的缺損，常見(jiàn)的臨床并發(fā)癥為移植物不穩(wěn)和術(shù)后易再骨折。骨替代材料為另一個(gè)研究熱點(diǎn)，但仍不能達(dá)到治療創(chuàng)傷后部分骨缺損的目的。雖然傳統(tǒng)方法能在一定程度促進(jìn)骨折的愈合，且獲得一定程度的成功，但治療操作難度較大，治療周期較長(zhǎng)，需反復(fù)多次手術(shù)等并發(fā)癥限制了其廣泛應(yīng)用。組織工程骨在解決移植骨的問(wèn)題上是一個(gè)重大的突破。但就目前而言，尚無(wú)將組織工程骨成功轉(zhuǎn)化為自體骨的核心技術(shù)。所以必須尋找一種新的方法促進(jìn)骨生成。BMP2因能有效地促進(jìn)骨折端的愈合而被廣泛應(yīng)用于臨床，但存在需要量大，供應(yīng)不足，本身制備困難，價(jià)格高昂等問(wèn)題，嚴(yán)重限制了其臨床的廣泛應(yīng)用。辛伐他汀為臨床上主要的調(diào)血脂的藥物，研究發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可促進(jìn)成骨細(xì)胞表達(dá)BMP2，進(jìn)而促進(jìn)骨折的愈合。但小分子的游離辛伐他汀應(yīng)用存在水溶性低、易在肝臟代謝、穩(wěn)定性差、臨床應(yīng)用劑量大和局部注射細(xì)胞毒性大等問(wèn)題，也限制了其應(yīng)用。RNAI技術(shù)自從其機(jī)制被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已被廣泛被沉默各種靶基因的的治療，具有廣闊應(yīng)用前景。本課題也運(yùn)用RNAI技術(shù)，通過(guò)下調(diào)NOGGIN基因的表達(dá)，去除其抑制BMP2的作用，從另一個(gè)方面促進(jìn)MC3T3E1細(xì)胞成骨。如何將小分子SIRNA輸送到細(xì)胞也是現(xiàn)階段必須解決的問(wèn)題，過(guò)去常運(yùn)用病毒載體進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，結(jié)果表明病毒載體的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率雖高，但存在生物安全性問(wèn)題。另外，SIRNA分子在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)存在體內(nèi)循環(huán)不穩(wěn)定，容易被巨噬細(xì)胞吞噬、被核酸酶降解等問(wèn)題，且分子量較大、本身帶有負(fù)電荷也使得其難以穿過(guò)帶同樣負(fù)電的細(xì)胞膜，不能發(fā)揮沉默目的基因的作用，故必須尋找一種新的有效的方式來(lái)促進(jìn)其作用。本課題提出利用多功能納米藥物傳輸技術(shù)，索出一種臨床適用、安全經(jīng)濟(jì)的聯(lián)合重建成骨的治療方案。首先，根據(jù)辛伐他汀先誘導(dǎo)VEGF促進(jìn)血管化再通過(guò)誘導(dǎo)BMPS促進(jìn)成骨的順序作用機(jī)理，應(yīng)用辛伐他汀促進(jìn)植入骨的成骨其次，利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)BMPS的拮抗蛋白基因NOGGIN的表達(dá)，辛伐他汀與NOGGINSIRNA（針對(duì)NOGGIN的SIRNA）聯(lián)用，從而在BMPS轉(zhuǎn)錄和蛋白相互作用兩個(gè)水平同時(shí)促進(jìn)骨生成。但SIRNA和辛伐他汀直接用于治療存在給藥效率低和易降解的問(wèn)題，也很難被共同傳輸?shù)焦切纬蓞^(qū)。因此，利用多功能納米載體將NOGGINSIRNA和辛伐他汀同時(shí)靶向傳輸?shù)匠晒菂^(qū)，促進(jìn)成骨的發(fā)生，發(fā)揮其11＞2的協(xié)同增效作用，同時(shí)也提高辛伐他汀的給藥效率，達(dá)到減少辛伐他汀劑量和避免可能的副作用。因此，本課題設(shè)計(jì)合成了一種新型的三元嵌段聚合物聚乙二醇支化聚乙烯亞胺聚天冬氨酸（N，N二異丙基乙二胺芐胺）MPEGBPEIPASPDIPBA的酸性敏感納米載體，可用于聯(lián)合傳輸辛伐他汀和NOGGINSIRNA。從而可同時(shí)發(fā)揮藥物及基因治療的雙重效果。辛伐他汀作用于成骨細(xì)胞后會(huì)促進(jìn)BMP2的表達(dá)，而NOGGIN作為BMP2的特異性拮抗劑，會(huì)抑制BMP2的促進(jìn)成骨的作用。利用NOGGINSIRNA可下調(diào)BMP2誘導(dǎo)的NOGGIN升高水平，將藥物治療和RNA干擾療法有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，利用二者協(xié)同作用以達(dá)到促進(jìn)成骨治療骨不連的目的。本文主要通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證酸敏響應(yīng)性雙載體對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的作用，探討其在治療骨缺損方面的應(yīng)用潛力。目的本文的研究目的為設(shè)計(jì)一種酸敏納米載體，對(duì)其結(jié)構(gòu)和形狀進(jìn)行表征，進(jìn)一步研究其負(fù)載辛伐他汀和NOGGINSIRNA的能力，空白納米載體對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的毒性作用，負(fù)載辛伐他汀的納米載體對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的增殖作用同時(shí)研究其體外細(xì)胞內(nèi)吸收定位情況，進(jìn)入細(xì)胞后的釋放情況最后在基因、蛋白和堿性磷酸酶染色等方面研究納米載體同時(shí)負(fù)載辛伐他汀和SIRNA對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的作用情況。方法1、化學(xué)方法合成聚合物MPEGBPEIPASPDIPBA，1HNMR核磁譜對(duì)聚合物進(jìn)行測(cè)試表征2、BI200SM動(dòng)態(tài)光散射系統(tǒng)BROOKHAVENINSTRUMENTS對(duì)不同NP比的納米載體復(fù)合物進(jìn)行粒徑與ZETA電位測(cè)量，所得的每組樣品數(shù)據(jù)，取5次測(cè)量的平均值3、通過(guò)電鏡和繪制時(shí)間累積釋放量圖分別驗(yàn)證PH值為50和74時(shí)，在只負(fù)載辛伐他汀或同時(shí)負(fù)載辛伐他汀和SIRNA的納米復(fù)合物中，辛伐他汀從納米載體中釋放的體外實(shí)驗(yàn)4、瓊脂糖凝膠實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證不同NP比納米載體與NOGGINSIRNA的復(fù)合情況，按照納米載體是否負(fù)載辛伐他汀將其分為兩組5、CELLCOUNTINGKIT8法（CCK8法）檢測(cè)不同濃度無(wú)負(fù)載辛伐他汀納米載體BMPBP對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的毒性作用CCK8法檢測(cè)游離不同濃度辛伐他汀和負(fù)載辛伐他汀納米載體DMPBP對(duì)MC3T3E1細(xì)胞增殖的影響6、應(yīng)用激光共聚焦CLSM定性和流式細(xì)胞術(shù)定量分析檢測(cè)納米載體的細(xì)胞內(nèi)吸收情況7、REALTIMEPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DMPBP中不同濃度辛伐他汀和當(dāng)濃度1UM時(shí)，不同作用時(shí)間對(duì)NOGGIN及BMP2基因表達(dá)的影響DMPBP中辛伐他汀濃度為10UM時(shí)，不同濃度NOGGINSIRNA對(duì)NOGGIN及BMP2基因表達(dá)的影響8、REALTIMEPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NOGGINSIRNA濃度為120NM時(shí)，DMPBP中辛伐他汀濃度為1，10UM時(shí)，NOGGIN及BMP2基因表達(dá)情況，同時(shí)用WESTERNBLOTTING實(shí)驗(yàn)、堿性磷酸酶和茜素紅成骨染色進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果1、成功合成了聚合物MPEGBPEIPASPDIPBA，1HNMR核磁譜圖顯示聚合物被成功合成2、通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射系統(tǒng)對(duì)不同NP比的DMPBPSIRNA納米載體復(fù)合物進(jìn)行粒徑和表面電位測(cè)定。當(dāng)NP10時(shí)，納米載體復(fù)合物具有相對(duì)較小粒徑40NM和較弱的表面正電荷8MV。因此，當(dāng)納米載體復(fù)合物的NP為10時(shí)，其具有較高的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率3、透射電鏡表征和辛伐他汀體外釋放實(shí)驗(yàn)表明在PH74時(shí)，粒徑較為均勻、分布在40NM左右，此時(shí)藥物呈緩慢釋放狀態(tài)當(dāng)PH50時(shí)，膠束膨大聚集，表現(xiàn)出快速釋放行為4、瓊脂糖凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)結(jié)果當(dāng)NP比為10時(shí)，SIRNA被完全復(fù)合而無(wú)條帶跑出，陽(yáng)離子納米載體無(wú)論是否負(fù)載辛伐他汀都不會(huì)影響其負(fù)載SIRNA的能力5、CCK8法驗(yàn)證空白納米載體細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)以NP10與SIRNA進(jìn)行復(fù)合時(shí)，當(dāng)空白納米載體的濃度高達(dá)430UGML時(shí)，MC3T3E1細(xì)胞的存活率仍高達(dá)905％，此時(shí)納米載體復(fù)合了SIRNA，中和了一部分正電，從而降低了其對(duì)細(xì)胞的毒性作用6、不同濃度的游離辛伐他汀對(duì)細(xì)胞并無(wú)毒性或增殖作用負(fù)載辛伐他汀的納米載體對(duì)細(xì)胞增值有一定作用，但當(dāng)濃度為10UM時(shí)卻抑制細(xì)胞的增殖7、激光共聚焦實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果證實(shí)納米載體復(fù)合物能被MC3T3E1細(xì)胞高效內(nèi)吞，轉(zhuǎn)染率高達(dá)864％，進(jìn)入細(xì)胞溶酶體后藥物緩慢釋放，結(jié)果顯示納米載體復(fù)合物是緩慢進(jìn)入細(xì)胞的，10MIN時(shí)部分進(jìn)入細(xì)胞，30MIN時(shí)進(jìn)入更多，到60MIN時(shí)已大部分進(jìn)入并開(kāi)始釋放分離，120MIN時(shí)基本完全釋放8、熒光定量PCR結(jié)果納米載體負(fù)載辛伐他汀的濃度為1UM時(shí)的作用效果最好，且最佳作用時(shí)間為48H當(dāng)NOGGINSIRNA的濃度越高，對(duì)NOGGIN的抑制作用越好，當(dāng)高達(dá)為120NM時(shí)，對(duì)NOGGIN的抑制作用最好結(jié)論本文主要通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)探討酸敏響應(yīng)性雙載體在治療骨缺損方面的應(yīng)用潛力。本課題成功合成了聚乙二醇支化聚乙烯亞胺聚天冬氨酸（N，N二異丙基乙二胺芐胺）MPEGGBPEIGPASPDIPBA的酸性敏感納米載體，運(yùn)用透射電鏡、粒徑電位儀等測(cè)試了聚合物納米載體的形貌和粒徑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，我們成功制備了粒徑較小、分布均勻的具有酸敏內(nèi)核的納米載體，其粒徑約為40NM，可以避免其快速地被腎臟排除和被RES攝取。從另一方面也增加了藥物的水溶性、延長(zhǎng)了藥物的血液循環(huán)時(shí)間以及改善治療效果。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果強(qiáng)有力地證明應(yīng)用PH敏感性陽(yáng)離子納米載體協(xié)同運(yùn)輸辛伐他汀和NOGGINSIRNA能夠協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞成骨發(fā)生。這種協(xié)同作用主要體現(xiàn)在辛伐他汀誘導(dǎo)BMP2的表達(dá)，從而引發(fā)的NOGGIN的上調(diào)可被同時(shí)運(yùn)輸?shù)腘OGGINSIRNA有效地降低，從而降低了NOGGIN抑制成骨的作用，二者協(xié)同更好地促進(jìn)了成骨的發(fā)生。結(jié)果進(jìn)一步表明酸敏納米雙載體為骨組織工程的發(fā)展和骨缺損的治療提供了一個(gè)新的思路，我們將進(jìn)一步通體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)觀察多孔金屬鉭棒植入術(shù)后患者臨床表現(xiàn)及HARRIS評(píng)分探討多孔金屬鉭棒植入手術(shù)治療早期ONFH的短期臨床效果評(píng)估手術(shù)療效。方法選擇2010年08月至2011年12月山東中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的非創(chuàng)傷性O(shè)NFH患者ARCO分期Ⅰ、Ⅱ期29例44髖其中男18例28髖女11例16髖年齡29～59歲平均384歲。對(duì)其中12例17髖平均年齡357歲采用多孔鉭金屬棒植入手術(shù)治療17例27髖采用髓芯減壓植骨術(shù)治療。記錄兩種手術(shù)方式的手術(shù)時(shí)間根據(jù)術(shù)前及術(shù)后HARRIS評(píng)分及短期內(nèi)患者的臨床表現(xiàn)及影像學(xué)表現(xiàn)觀察股骨頭無(wú)塌陷的生存時(shí)間。結(jié)果所有病例均獲得術(shù)后隨訪9～18個(gè)月平均1390個(gè)月。實(shí)驗(yàn)組患者術(shù)前HARRIS評(píng)分平均6111分6111±1174對(duì)照組患者術(shù)前HARRIS評(píng)分平均6584分6584±1273兩組患者年齡、性別及術(shù)前HARRIS評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。實(shí)驗(yàn)組手術(shù)時(shí)間明顯短于對(duì)照組手術(shù)時(shí)間P000005兩組生存率在平均1333個(gè)月的隨訪中無(wú)顯著性差異。結(jié)論多孔鉭棒植入術(shù)與髓芯減壓植骨術(shù)治療早期ONFH都有一定的療效但多孔鉭金屬棒植入術(shù)對(duì)早期ONFHARCO分期Ⅰ、Ⅱ期髖關(guān)節(jié)功能有明顯的改善且該手術(shù)具有創(chuàng)傷小、術(shù)后恢復(fù)快、短期內(nèi)療效較好的特點(diǎn)但其延緩股骨頭塌陷促進(jìn)壞死修復(fù)的作用需要更長(zhǎng)時(shí)間、更大規(guī)模的研究有待于進(jìn)一步探討。

簡(jiǎn)介：本研究的目的是觀察染料木素和小劑量17Β雌二醇對(duì)去卵巢大鼠松質(zhì)骨骨微結(jié)構(gòu)的作用及其差異。方法90只7月齡SD大鼠中隨機(jī)選出10只作為基線組并在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)處死，余下隨機(jī)分為OVX組、SHAM組、小劑量17Β雌二醇干預(yù)組10UGKG／DEST組和染料木素干預(yù)組5MG／KG／DGEN組。每組于第3周和第15周各處死10只大鼠，分離左脛骨行顯微CT掃描；掃描后選取距生長(zhǎng)板遠(yuǎn)端16MM、層厚O5MM骨組織為感興趣區(qū)域，進(jìn)行三維重建，用顯微CT自帶軟件對(duì)松質(zhì)骨體積骨密度、組織骨密度、骨小梁厚度、骨小梁間隔等指標(biāo)進(jìn)行分析，并建立骨小梁三維結(jié)構(gòu)圖像和二維最大密度投射圖像。結(jié)果去卵巢后第3周，GEN組的組織骨密度和骨小梁厚度明顯大于OVX組和EST組P005；EST組的骨小梁數(shù)目顯著性多于GEN組P005，骨小梁間隔則明顯小于GEN組P005OVX組、GEN組和EST組三組的體積骨密度和骨體積分?jǐn)?shù)無(wú)顯著性差異，但均明顯小于SHAM組P005。去卵巢后第15周，OVX組、EST組和GEN組三組間的體積骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目和聯(lián)接密度無(wú)明顯差異，但都顯著性小于SHAM組P005，結(jié)構(gòu)模型指數(shù)和骨小梁間隔大于SHAM組P005。體積骨密度、骨表面積分?jǐn)?shù)和骨小梁厚度的結(jié)果在四組間無(wú)顯著性差異?？v向觀察發(fā)現(xiàn)，OVX組、GEN組和EST組三組的體積骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨表面積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目和聯(lián)接密度隨時(shí)間出現(xiàn)下降P005；而組織骨密度、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)、骨小梁厚度和骨小梁間隔等參數(shù)隨時(shí)間增加P005，其中OVX組和EST組組織骨密度和骨小梁厚度在第3周和第15周之間出現(xiàn)明顯增長(zhǎng)P005，GEN組組織骨密度增長(zhǎng)主要發(fā)生在去卵巢后的第3周內(nèi)，骨小梁厚度則在3周和15周均有增長(zhǎng)P005。SHAM組骨小梁厚度和間隔亦隨時(shí)間增加，骨表面積分?jǐn)?shù)和聯(lián)接密度則下降，其他參數(shù)隨時(shí)間無(wú)明顯變化。結(jié)論去卵巢后大鼠松質(zhì)骨微結(jié)構(gòu)變化表現(xiàn)為骨密度下降，骨體積變小，小梁結(jié)構(gòu)趨向于桿狀，骨小梁變薄，數(shù)目減少，間隔增大，連接稀疏。染料木素能促進(jìn)松質(zhì)骨礦物質(zhì)沉積和骨小梁增厚，17Β雌二醇則對(duì)抗雌激素缺乏引起的骨小梁數(shù)目減少和骨小梁間隔增大。

簡(jiǎn)介：論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5雙向隱雙向隱雙向隱雙向隱雙向隱答辯委員會(huì)主席陳忠委員卜歐陽(yáng)宏F委員2魏爾清委員3胡永洲委員4曾蘇委員5鄭高利教授教授教授研究員浙江大學(xué)藥學(xué)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院浙江大學(xué)藥學(xué)院浙江大學(xué)藥學(xué)院浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院答辯日期2011一6一8浙淚_人學(xué)博士學(xué)位論文致謝致謝首先衷心感謝我的導(dǎo)師何俏軍教授和楊波教授多年來(lái)對(duì)我的悉心指導(dǎo)和關(guān)懷。你們淵博的知識(shí)、高瞻遠(yuǎn)矚的科研思維、敏銳的洞察力和不懈奮斗的科研激情將是我今后學(xué)習(xí)的榜樣，你們開(kāi)闊的眼界、博大的胸襟和處事做人的氣度無(wú)不令我嘆服和欽佩。你們不僅教授了我做研究的方法，更教授了我做人的學(xué)問(wèn)，因?yàn)橛心銈兊慕逃鸵龑?dǎo)，我才幸運(yùn)地走上了藥理學(xué)的研究道路。轉(zhuǎn)眼已至畢業(yè)之時(shí)，縱使千言萬(wàn)語(yǔ)，也無(wú)法表達(dá)我對(duì)兩位恩師多年教誨的感激之情。衷心感謝美國(guó)南加州大學(xué)DRLINGTAOWLI對(duì)我在課題的上的指導(dǎo)和幫助衷心感謝胡永洲、周慧君、吳昊妹、朱虹、吳洪海、朱狄峰、施姍姍等各位老師對(duì)我實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的耐心指導(dǎo)以及生活上的幫助。諸位老師的敬業(yè)、執(zhí)著和高效給了我很大的啟迪。衷心感謝藥理實(shí)驗(yàn)室的羅沛華、楊曉春、張博、方亮、李瑩撤等多位師兄師姐對(duì)我的幫助和指導(dǎo)，方艷芬、張種、翁勤潔、張晶、徐丹青、王多多、林美麗、林美花、吳睿、涂崇興、曹戟、張蕾、張俊、錢石靜、趙玉勤、丁婉蜻、景慧、楊微、李琳、閏艷、薛濤、樓斯悅、鐘理科等同學(xué)對(duì)我的關(guān)心和幫助。在這個(gè)凝聚力極強(qiáng)的集體中，能夠與你們并肩作戰(zhàn)是我的榮幸。最后，我要特別感謝我的父母和家人在我求學(xué)生涯中給予的無(wú)私奉獻(xiàn)和關(guān)愛(ài)?；仡欉@段時(shí)光，我得到了太多人的幫助和關(guān)心，在這里我再次真誠(chéng)地向所有給與我?guī)椭鵁o(wú)法一一提及的師長(zhǎng)、同學(xué)和朋友致以最誠(chéng)摯的感謝。‘爭(zhēng)氣

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)對(duì)脊柱結(jié)核SPINALTUBERCULOSISSTB患者的骨代謝標(biāo)志物尿脫氧吡啶啉DEOXYPYRIDINOLINEDPD及血清堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASEALP的測(cè)定，觀察其變化與脊柱結(jié)核病的關(guān)系；評(píng)價(jià)檢測(cè)尿DPD和血清ALP在判定繼發(fā)于肺結(jié)核PULMONARYTUBERCULOSISPTB的脊柱結(jié)核的診斷方面的臨床意義，以便尋找一種比較客觀、快速、敏感、特異、臨床實(shí)用的早期篩選、發(fā)現(xiàn)脊柱結(jié)核的檢查方法。方法研究對(duì)象共分三組，脊柱結(jié)核組，肺結(jié)核組和健康對(duì)照組。采用自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析法及自動(dòng)化學(xué)分析法，通過(guò)檢測(cè)33例男16例，女17例脊柱結(jié)核患者尿DPD及血清ALP的水平，同時(shí)檢測(cè)33例男17例，女16例肺結(jié)核患者、30例男15例，女15例健康體檢者的尿DPD及血清ALP的水平作為對(duì)照，其中尿DPD以尿肌酐CREATININECR來(lái)校正由于體重指數(shù)及稀釋因素所導(dǎo)致的差異DPDCR，并將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果脊柱結(jié)核患者、肺結(jié)核患者、健康對(duì)照組DPD的測(cè)定值分別為149±98ΜMOLMOLCR、64±26ΜMOLMOLCR和63±20ΜMOLMOLCR，脊柱結(jié)核患者尿DPD較肺結(jié)核患者、健康成人對(duì)照組顯著增高，差異具有顯著性意義（P0001P0000。三組患者的ALP測(cè)定值分別為1215±419IUL、887±188IUL和894±241IUL，脊柱結(jié)核患者血清ALP較肺結(jié)核患者、健康成人對(duì)照組顯著增高，差異具有顯著性意義（P0001P0001。肺結(jié)核患者與健康對(duì)照組相比，尿DPD及血清ALP的檢測(cè)差異均無(wú)顯著性意義（P0751P0605）。所檢測(cè)的脊柱結(jié)核患者尿DPD比血清ALP有一個(gè)更好的接受者工作特性曲線（RECEIVEROPERATINGACTERISTICROC）。ROC曲線下面積分別為083和073。在ROC曲線下，DPD測(cè)定值以84ΜMOLMOLCR為截?cái)帱c(diǎn)時(shí)，診斷脊柱結(jié)核的敏感性是87％，特異性是73％。ALP測(cè)定值以110IUL為截?cái)帱c(diǎn)時(shí)，其診斷脊柱結(jié)核的敏感性是70％，特異性是68％。脊柱結(jié)核患者所測(cè)定的尿DPD和血清ALP的相關(guān)系數(shù)R＝0683，在001水平時(shí)，相關(guān)系數(shù)差異有顯著性意義（P＝0000）。結(jié)論脊柱結(jié)核可以引起骨代謝的改變，以骨吸收增強(qiáng)為著；新的骨代謝標(biāo)志物DPD和血清ALP在檢測(cè)脊柱結(jié)核的骨代謝變化時(shí)是有作用的，尤其以尿DPD為明顯；尿DPD是一項(xiàng)敏感的生化指標(biāo)，能客觀地反映脊柱結(jié)核患者體內(nèi)骨吸收的狀況；尿液DPD檢測(cè)可以作為一種在肺結(jié)核患者中早期發(fā)現(xiàn)脊柱結(jié)核的有價(jià)值的骨代謝觀測(cè)指標(biāo)，其測(cè)定優(yōu)于血清ALP，有助于繼發(fā)于肺結(jié)核的脊柱結(jié)核患者的早期篩選。

簡(jiǎn)介：第一部分兔矢狀縫牽引成骨模型的建立目的建立兔顱骨矢狀縫牽引成骨的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛻?yīng)用持續(xù)等張牽引及間斷牽引兩種不同的牽引方式驗(yàn)證該動(dòng)物模型的可行性。方法以微型牽引種植釘MSI作為支抗鎳鈦彈簧作為牽引力源建立MSI兔顱骨矢狀縫彈力牽引成骨模型。應(yīng)用此矢狀縫MSI彈力牽引系統(tǒng)對(duì)18只11周齡的新西蘭白兔作矢狀縫牽引成骨實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為三組持續(xù)等張牽引組N7間斷牽引組N7對(duì)照組N4。牽引周期29天于05111723及29天分別測(cè)量?jī)山M動(dòng)物微型牽引種植釘MSI牽開(kāi)距離及X線頭影片觀察骨縫牽開(kāi)情況第7天第27天注射四環(huán)素在第17天注射鈣黃綠素作為術(shù)后熒光組織切片觀察標(biāo)記。通過(guò)觀察動(dòng)物對(duì)該牽引成骨系統(tǒng)的耐受性比較各組骨縫牽開(kāi)的距離及觀察欠狀縫組織形態(tài)學(xué)變化驗(yàn)證兔顱骨矢狀縫牽引成骨模型的可行性。結(jié)果MSI彈力牽引系統(tǒng)成功率為86％接近即刻種植牽引文獻(xiàn)報(bào)告的成功率。持續(xù)等張牽引及間斷牽引成骨實(shí)驗(yàn)均可順利完成。50G力持續(xù)等張牽引組矢狀縫牽開(kāi)的距離隨著牽引持續(xù)時(shí)間的增加而遞增但骨縫牽開(kāi)率呈現(xiàn)先快后慢的趨勢(shì)。50G力間斷牽引組矢狀縫的牽開(kāi)距離隨牽引時(shí)間的增加而增大矢狀縫牽開(kāi)率基本保持恒定。骨組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)顯示兩組骨縫間均有新生骨組織形成說(shuō)明該牽引成骨模型既能有效牽開(kāi)骨縫也能誘導(dǎo)骨縫間成骨。結(jié)論1本實(shí)驗(yàn)采用自行研制的微型種植釘MSI彈力牽引系統(tǒng)成功建立了兔矢狀縫彈力牽引成骨模型。該模型經(jīng)持續(xù)等張牽引及間斷彈力牽引兩種牽引方式驗(yàn)證矢狀縫牽引成骨效果可靠具有可行性、可重復(fù)性價(jià)格便宜成功率較高的特點(diǎn)。2在相同牽引周期50G力牽引下持續(xù)等張牽引較問(wèn)斷彈力牽引能更大程度牽開(kāi)矢狀縫。第二部分兔顱縫牽引成骨中不同大小牽引力對(duì)顱縫改建的作用目的通過(guò)比較不同大小牽引力牽開(kāi)骨縫的大小及誘導(dǎo)骨縫成骨的能力探討不同大小牽引力對(duì)骨縫組織改建的影響。為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供合適的牽引力參考也可指導(dǎo)臨床應(yīng)用。方法37只6周齡的新西蘭白兔隨機(jī)分為四組50G力鎳鈦彈簧持續(xù)等張牽引組N11100G力鎳鈦彈簧持續(xù)等張牽引組N9200G力鎳鈦彈簧持續(xù)等張牽引組N9及對(duì)照組N8。各實(shí)驗(yàn)組兔矢狀縫行持續(xù)等張牽引42天對(duì)照組未對(duì)顱縫行牽引。在第01428及42天記錄微型牽引種植釘MSI牽開(kāi)距離及X線頭影片觀察骨縫牽開(kāi)情況第10天第30天注射四環(huán)素第20天注射鈣黃綠素作為術(shù)后熒光組織切片觀察標(biāo)記。通過(guò)比較各組欠狀縫牽開(kāi)的距離觀察各組欠狀縫牽引后組織切片并結(jié)合骨組織形態(tài)學(xué)測(cè)量方法研究不同大小牽引力、骨縫牽開(kāi)大小、及骨縫間成骨關(guān)系。結(jié)果MSI彈力牽引系統(tǒng)成功率為889％。各實(shí)驗(yàn)組矢狀縫牽開(kāi)距離隨牽引時(shí)間的增加而增大但骨縫牽開(kāi)率呈先快后慢的趨勢(shì)。本次實(shí)驗(yàn)中矢狀縫牽開(kāi)的距離S隨著牽引力的增加而明顯增大即S200G＞S100G＞S50G＞S0各組間牽開(kāi)距離差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。骨組織形態(tài)學(xué)測(cè)量發(fā)現(xiàn)在0G50G100G牽引力組新骨生成量隨牽引力的增加而遞增P＜005說(shuō)明在一定范圍內(nèi)骨縫間成骨率隨牽引力的增加而增加但在100G與200G組間新骨生成量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005說(shuō)明過(guò)大的牽引力未能有效提升成骨效率。研究結(jié)論1在一定牽開(kāi)范圍內(nèi)骨縫牽開(kāi)距離隨牽引力的增大而增加。2在一定范圍的牽張力下骨縫間新骨生成景隨牽張力的增大而增多但過(guò)大的牽引力或牽引速率末能有效促進(jìn)成骨。3在一定的牽引力及牽開(kāi)范圍內(nèi)骨縫牽引成骨誘導(dǎo)新骨生成的能力隨骨縫牽開(kāi)的增大而增強(qiáng)。第三部分局部應(yīng)用RHBMP2加速顱骨縫牽引成骨的實(shí)驗(yàn)研究目的在200G力持續(xù)快速等張牽引成骨作用下比較不同濃度的RHBMP2對(duì)顱縫改建的作用探索RHBMP2在加速顱縫牽引成骨種應(yīng)用加速成骨的可行性探討快速牽引成骨的同時(shí)加速骨縫間成骨縮短縫牽引成骨治療周期減少?gòu)?fù)發(fā)的可能。方法50只6周齡的新西蘭白兔行200G力持續(xù)快速等張矢狀縫牽引。按照接受RHBMP2的濃度不同隨機(jī)分為5組每組10只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。對(duì)照組即0MGMLRHBMP2組N10實(shí)驗(yàn)組001MGMLN100025MGMLN1001MGMLN10和04MGMLN10RHBMP2組。將不同濃度的RHBMP2與可吸收膠原海綿ACS充分結(jié)合后植入兔矢狀縫處骨膜下即刻給予200G持續(xù)等張牽引33天。在第01020及30天記錄微型牽引種植釘MSI牽開(kāi)距離及X線頭影片觀察骨縫牽開(kāi)情況在第10天第30天注射鈣黃綠素在第20天注射四環(huán)素作為術(shù)后熒光組織切片觀察標(biāo)記。牽引后第33天處死全部動(dòng)物采集所有兔矢狀縫標(biāo)本行MICROCT精細(xì)掃捕及三維重建再行組織切片制備后在熒光顯微鏡下觀察各組骨縫牽引后改建情況。結(jié)果MSI彈力牽引系統(tǒng)成功率為90％。根據(jù)骨縫牽開(kāi)距離的大小可分為兩大組骨縫持續(xù)牽開(kāi)組對(duì)照組及001MGMLRHBMP2組和骨縫牽開(kāi)受限組0025MGML01MGML04MGML組。各骨縫牽開(kāi)測(cè)量方法均顯示整個(gè)牽引周期內(nèi)對(duì)照組及001MGMLRHBMP2骨縫牽開(kāi)的趨勢(shì)相似牽引術(shù)后牽引33天兩組骨縫牽開(kāi)距離未見(jiàn)明顯差異P＞005。在0025MGML01MGML04MGML組牽引前后牽引33天骨縫在010天牽開(kāi)趨勢(shì)與對(duì)照組相似但1030天骨縫未見(jiàn)明顯牽開(kāi)牽引后牽引33天3組矢狀縫牽開(kāi)距離差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005各組骨縫牽開(kāi)數(shù)據(jù)行方差分析骨縫牽開(kāi)組對(duì)照組與001MGML組與骨縫牽開(kāi)受限組0025MGML01MGML04MGML組矢狀縫牽開(kāi)距離差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。MICROCT重建兔矢狀縫精細(xì)三維結(jié)構(gòu)及熒光組織學(xué)切片觀察顯示在較高濃度組0025MGML01MGML及04MGML各組均可見(jiàn)矢狀縫骨化閉合骨縫區(qū)骨密度與周圍骨組織相當(dāng)在001MGML組可見(jiàn)骨縫間新骨大量充填于矢狀縫間隙未見(jiàn)骨縫骨化閉合而對(duì)照組骨縫牽開(kāi)距離較大可見(jiàn)明顯骨縫間隙少量新骨沿應(yīng)力方向排列。MICROCT三維重建骨縫間隙體積顯示001MGML組骨縫間隙小于對(duì)照組P＜001說(shuō)明200G持續(xù)牽引下局部應(yīng)用001MGMLRHBMP2能誘導(dǎo)骨縫間新骨的生成未導(dǎo)致矢狀縫閉合。研究結(jié)論1在200G力矢狀縫持續(xù)快速牽引下骨縫開(kāi)始擴(kuò)張時(shí)局部應(yīng)用較高濃度RHBMP20025MGML01MGML04MGML會(huì)使矢狀縫間過(guò)量成骨致骨縫閉合牽引受限2在200G力矢狀縫持續(xù)快速牽引下局部應(yīng)用低濃度001MGMLRHBMP2能加速欠狀縫間新骨生成且牽引成骨順利未見(jiàn)骨縫閉合。3骨縫快速牽引時(shí)局部應(yīng)用低濃度RHBMP2能在快速牽開(kāi)骨塊的同時(shí)加快骨縫間新骨生成充填間隙縮短了牽引療程提高了成骨效率減少了術(shù)后復(fù)發(fā)的可能。第四部分富血小板血漿結(jié)合RHBMP2加速顱骨縫牽引成骨的實(shí)驗(yàn)研究目的探討富血小板血漿凝膠作為自體生長(zhǎng)因子來(lái)源局部應(yīng)用對(duì)骨縫組織改建的影響。并通過(guò)結(jié)合RHBMP2的應(yīng)用探討富血小板凝膠作為緩釋載體的可能性指導(dǎo)臨床應(yīng)用。方法30只6周齡的新西蘭白兔隨機(jī)分為三組在200G力鎳鈦彈簧持續(xù)等張下分別分為0對(duì)照組1富血小板血漿組2富血小板血漿結(jié)合10ΜGRHBMP2組PRPRHBMP2。各實(shí)驗(yàn)組兔矢狀縫行200G力持續(xù)等張牽引33天在第10天第30天注射鈣黃綠素在第20天注射四環(huán)素作為術(shù)后熒光組織切片觀察標(biāo)記。牽引后第33天處死全部動(dòng)物采集所有兔矢狀縫標(biāo)本行MICROCT精細(xì)掃描及三維重建再行組織切片制備后在熒光顯微鏡下觀察各組骨縫牽引后改建情況。結(jié)果MSI彈力牽引系統(tǒng)成功率為933％。整個(gè)牽引周期內(nèi)對(duì)照組及富血小板血漿組骨縫牽開(kāi)的趨勢(shì)相似牽引術(shù)后牽引33天兩組骨縫牽開(kāi)距離未見(jiàn)明顯差異P＞005。在PRPRHBMP2組牽引第10天后骨縫牽開(kāi)明顯受限。MICROCT重建兔矢狀縫精細(xì)三維結(jié)構(gòu)及熒光組織學(xué)切片觀察顯示PRPRHBMP2組可見(jiàn)矢狀縫骨化閉合骨縫區(qū)骨密度與周圍骨組織相當(dāng)在富血小板血漿組可見(jiàn)骨縫間新骨大量充填于矢狀縫間隙未見(jiàn)骨縫骨化閉合而對(duì)照組骨縫牽開(kāi)距離較大可見(jiàn)明顯骨縫間隙少量新骨沿應(yīng)力方向排列。研究結(jié)論1在200G力矢狀縫持續(xù)快速牽引下局部應(yīng)用自體血小板血漿凝膠能加速矢狀縫間新骨生成且牽引成骨順利未見(jiàn)骨縫閉合2在200G力矢狀縫持續(xù)快速牽引下局部應(yīng)用富血小板血漿結(jié)合10ΜGRHBMP2會(huì)使矢狀縫間過(guò)量成骨致骨縫閉合牽引受限3富血小板血漿不僅可作為自體來(lái)源的生長(zhǎng)因子來(lái)源亦可作為生物材料結(jié)合RHBMP2局部應(yīng)用提高成骨效應(yīng)。

簡(jiǎn)介：生物材料的應(yīng)用范圍及發(fā)展水平已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)衡量一個(gè)國(guó)家現(xiàn)代化醫(yī)療水平的重要標(biāo)志。隨著我們步入21世紀(jì)，尋找和人體組織天然結(jié)構(gòu)和性能相類似的生物材料，即可完全整合的、使受損組織可完全再生的生物材料成為當(dāng)今社會(huì)生物醫(yī)用材料研究的熱點(diǎn)。聚乳酸材料因具有良好的生物相容性和生物可降解性，被美國(guó)FDA批準(zhǔn)可以作為手術(shù)縫合線、人造血管、藥物載體和組織工程支架等材料，說(shuō)明聚乳酸在體內(nèi)是可以安全使用的。但是，聚乳酸缺乏人體細(xì)胞特異性識(shí)別的信號(hào)位點(diǎn)，不具有生物活性，限制了其在生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域的使用。因此，對(duì)聚乳酸進(jìn)行仿生改性設(shè)計(jì)和研究，無(wú)疑會(huì)對(duì)這種全生物降解無(wú)殘留的生物材料的發(fā)展產(chǎn)生重要的科學(xué)意義和深遠(yuǎn)的社會(huì)意義。本研究以馬來(lái)酸酐改性聚乳酸（MPLA）為原料，按照材料整體仿生修飾的思路，以1乙基（3二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N羥基琥珀酰亞胺（NHS）為縮合劑，通過(guò)酰胺鍵將生物活性多肽力生長(zhǎng)因子E結(jié)構(gòu)域24肽（即羧基端24肽，MGFCT24E）共價(jià)結(jié)合到MPLA的側(cè)鏈上，從而成功制備了一種新型聚乳酸基仿生骨組織工程支架材料（MGFCT24EMPLA）。該材料具有適合于骨組織工程應(yīng)用的力學(xué)性能和良好的生物相容性、生物降解性。本文以這種新型的聚乳酸基仿生骨組織工程支架材料為研究對(duì)象，以促進(jìn)骨損傷修復(fù)為研究目標(biāo)，利用傅立葉變換紅外光譜儀（FTIR）、X射線光電子能譜儀（XPS）、差示掃描量熱儀（DSC）、氨基酸分析儀（AAA）、元素分析儀（EA）以及常規(guī)化學(xué)分析方法對(duì)其基本結(jié)構(gòu)和性能進(jìn)行測(cè)試，并詳細(xì)考察了它們的基本物理性能及力學(xué)性能、體外降解性能、降解產(chǎn)物對(duì)炎癥反應(yīng)的影響和生物相容性。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下1在不改變MPLA主鏈結(jié)構(gòu)的前提下，以EDC和NHS為縮合劑，通過(guò)酸酐基團(tuán)與生物活性多肽MGFCT24E的氨基之間發(fā)生N?；磻?yīng)，成功將MGFCT24E引入到MPLA的酸酐分子骨架中從而制備出一種新型仿生聚乳酸基質(zhì)材料①FTIR、XPS、AAA和EA分析結(jié)果表明MGFCT24E成功接枝到MPLA中，并且MGFCT24E在MGFCT24EMPLA材料中的平均含量是105ΜMOLG，接枝效率是2991％；②DSC分析顯示，MPLA的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度（TG）為4273℃，而MGFCT24E改性MPLA的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度則升高到5585℃。2通過(guò)材料的分子量、靜態(tài)水接觸角、吸水率以及材料拉伸和壓縮性能的測(cè)試，考察了PDLLA、MPLA和MGFCT24EMPLA三種聚合物材料的基本物理性能和力學(xué)性能①三種聚合物的分子量大小依次為PDLLAMPLAMGFCT24EMPLA。這是因?yàn)殡S著馬來(lái)酸酐和MGFCT24E對(duì)PDLLA的相繼改性，PDLLA在反應(yīng)過(guò)程中也相繼發(fā)生了熱降解和氨解現(xiàn)象，使PDLLA的分子量不斷降低；②三種聚合物的親水性依次為PDLLA③馬來(lái)酸酐的引入使PDLLA拉伸和壓縮性能增強(qiáng)，而MGFCT24E改性MPLA則降低了MPLA的拉伸和壓縮強(qiáng)度。3研究MGFCT24EMPLA、PDLLA和MPLA三種聚合物材料的降解性能以及降解產(chǎn)物的炎癥反應(yīng)。聚合物降解性能的評(píng)價(jià)是通過(guò)體外降解實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)的，主要考察了降解過(guò)程中MGFCT24EMPLA、PDLLA和MPLA三種聚合物材料降解體系的PH值的變化以及它們的表面形貌、失重率和吸水率的變化。通過(guò)將巨噬細(xì)胞和MGFCT24EMPLA、PDLLA、MPLA三種聚合物材料的降解產(chǎn)物進(jìn)行共培養(yǎng)，研究它們對(duì)巨噬細(xì)胞的形態(tài)和TNFΑ、IL1Β和NO等炎癥因子分泌情況的影響①體外降解實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，與PDLLA和MGFCT24EMPLA相比，MPLA在降解過(guò)程中降解體系的PH值增長(zhǎng)最快，酸致自催化降解的程度最大，由此而引起的失重率最大，降解速率最快。而與MPLA和PDLLA相比，堿性多肽MGFCT24E的引入使MGFCT24EMPLA降解體系的PH呈上升趨勢(shì)，失重率減小，吸水率增大，酸致自催化降解引起的整體溶蝕降解的程度也降低。這說(shuō)明MGFCT24EMPLA具有良好的降解穩(wěn)定性；（2）炎癥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)表明，MPLA的降解產(chǎn)物能夠刺激巨噬細(xì)胞最大限度的鋪展，偽足增多、增長(zhǎng)，PDLLA的降解產(chǎn)物次之，MGFCT24EMPLA降解產(chǎn)物的效果則沒(méi)有那么明顯。同時(shí)，和PDLLA相比，MPLA的降解產(chǎn)物能夠提高巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的TNFΑ、IL1Β和NO，而MGFCT24EMPLA的降解產(chǎn)物則顯著降低了這三種炎癥因子的產(chǎn)生，說(shuō)明多肽MGFCT24E的引入能夠緩解PDLLA降解過(guò)程中引發(fā)的炎癥反應(yīng)。4通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，利用SD大鼠乳鼠的顱骨成骨細(xì)胞和MPLA、MGFCT24EMPLA混合物和MGFCT24EMPLA三組聚合物材料共培養(yǎng)的評(píng)估模型，對(duì)成骨細(xì)胞在上述三組材料上的形態(tài)、黏附、增殖、分化和礦化情況進(jìn)行了系統(tǒng)的評(píng)價(jià)和描述①與對(duì)照組MPLA材料相比，成骨細(xì)胞在MGFCT24EMPLA混合物和MGFCT24EMPLA材料上黏附的數(shù)目更多，細(xì)胞形態(tài)更好，且成骨細(xì)胞在這兩種材料表面的黏附和鋪展沒(méi)有明顯差異（P②與對(duì)照組MPLA材料相比，在細(xì)胞和生物材料相互作用的早期，MGFCT24EMPLA混合物和MGFCT24EMPLA兩種材料更有利于成骨細(xì)胞的增殖，但隨著細(xì)胞和生物材料相互作用時(shí)間的延長(zhǎng)（大于3天），MGFCT24EMPLA共混聚合物中的MGFCT24E大部分都已釋放出來(lái)，使其促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖的作用逐漸減弱，而MGFCT24EMPLA材料中的MGFCT24E則隨著MGFCT24EMPLA的降解緩慢的釋放出來(lái)，這使其在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能更好的促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。③與對(duì)照組MPLA材料相比，MGFCT24EMPLA混合物和MGFCT24EMPLA兩種材料抑制成骨細(xì)胞早期的分化，促進(jìn)后期的分化，其中MGFCT24EMPLA材料對(duì)成骨細(xì)胞的分化促進(jìn)效果更明顯。針對(duì)MGFCT24EMPLA材料對(duì)成骨細(xì)胞分化的這種雙重作用，我們得出MGFCT24EMPLA材料并不是抑制成骨細(xì)胞的早期分化，而是延遲了其分化過(guò)程。④與對(duì)照組MPLA材料相比，MGFCT24EMPLA具有顯著的促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化的能力，而MGFCT24EMPLA混合物和MPLA材料影響成骨細(xì)胞礦化的水平是相似的。

簡(jiǎn)介：該研究應(yīng)用離體骨骼肌灌流技術(shù)以及基本的分子生物學(xué)技術(shù)系統(tǒng)地觀測(cè)了懸吊1、2與4周大鼠比目魚肌SOL和趾長(zhǎng)伸肌EDL收縮功能和疲勞性改變的動(dòng)態(tài)過(guò)程并探討了萎縮SOL強(qiáng)直收縮疲勞性增加的可能機(jī)理實(shí)驗(yàn)證明在尾部懸吊大鼠以模擬失重狀態(tài)的條件下抗重力肌SOL出現(xiàn)明顯萎縮隨懸吊時(shí)間延長(zhǎng)萎縮SOL單次收縮最大張力的降低較收縮時(shí)程的縮短出現(xiàn)晚高頻強(qiáng)直收縮疲勞性的增加也較其PO的降低出現(xiàn)早間斷強(qiáng)直收縮的PO在懸吊第4周才降低而在懸吊的第1周疲勞性的增加與張力恢復(fù)的減緩即已完成對(duì)SOL收縮功能降低機(jī)理的探討表明收縮蛋白含量降低特別是肌球蛋白重鏈異構(gòu)體的轉(zhuǎn)化是引起強(qiáng)直收縮最大張力降低的主要原因萎縮SOL細(xì)胞膜上NA、K與CA通道性質(zhì)的變化可能是引發(fā)SOL強(qiáng)直收縮疲勞性增加的重要因素而肌漿網(wǎng)CA轉(zhuǎn)運(yùn)功能的改變不僅影響疲勞性而且可能主要影響萎縮SOL疲勞后收縮張力的恢復(fù)速度

簡(jiǎn)介：脂質(zhì)沉積性肌病LIPIDSTAGEMYOPATHYLSM是一種由于長(zhǎng)鏈脂肪酸代謝障礙LCFA引起甘油三酯在肌肉組織異常沉積的代謝性肌病。多為常染色體隱性遺傳。LSM臨床表現(xiàn)多種多樣主要表現(xiàn)為漸進(jìn)性肌無(wú)力及反復(fù)發(fā)作的橫紋肌溶解癥。肌無(wú)力以近端為主。不同基因變異導(dǎo)致脂肪代謝的不同環(huán)節(jié)受累而出現(xiàn)器官脂肪沉積。目前LSM中LCFA主要包括以下兩種外源性脂肪酸FA向線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)及Β氧化障礙如原發(fā)性肉堿缺乏、脂酰肉堿轉(zhuǎn)移酶缺乏、肉堿脂酰肉堿轉(zhuǎn)位酶缺乏等和胞漿內(nèi)生性甘油三酯的分解障礙中性脂質(zhì)沉積病、肌病型脂質(zhì)沉積病等。LSM分型診斷仍有賴于復(fù)雜的生化檢測(cè)和基因突變檢測(cè)不易常規(guī)臨床應(yīng)用。其確診必須依賴肌肉活檢。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體PEROXISOMEPROLIFERATACTIVATEDRECEPTΑPPARΑ是核激素受體超家族PPARS中的一員其他成員還包括PPARΒ和PPARΓ。PPARS是一類配體調(diào)控的核轉(zhuǎn)錄因子。脂肪酸及其代謝產(chǎn)物為PPARΑ的內(nèi)源性配體貝特類調(diào)脂藥作為PPARΑ的合成配體貝特類調(diào)脂藥被廣泛用于高脂血癥的治療。PPARΑ主要調(diào)節(jié)過(guò)氧化物酶體、線粒體等細(xì)胞器的Β氧化途徑中的一些酶類如乙酰輔酶A氧化酶、脂酰輔酶A合酶、酮乙酰輔酶A硫解酶、肉堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶等。PPARΑ已經(jīng)作為一種重要的核受體廣泛參與機(jī)體脂類代謝、炎癥、心肌病、肝脂肪樣變及肝癌的形成。脂酰輔酶A硫脂酶2ACYLCOATHIOESTERAS2ACOT2又稱脂酰輔酶A水解酶曾命名為線粒體硫脂酶1MITOCHONDRIALTHIOESTERASE1MTE1。ACOT家族廣泛分布于具有高脂肪酸氧化能力的組織中如肝臟心臟、棕色脂肪組織及骨骼肌。ACOT家族包括ACOT1ACOT12。其中ACOT2分布在線粒體中它可以水解線粒體內(nèi)長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A分子LCFACOA生成對(duì)應(yīng)的脂肪酸陰離子LCFA和游離輔酶ACOA。2006年LAMARK提出脂肪酸線粒體內(nèi)生成和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的假說(shuō)。該系統(tǒng)由ACOT2和解偶聯(lián)蛋白3UNCOUPLINGPROTEIN3UCP3共同組成。線粒體內(nèi)的LCFACOA在ACOT2的作用下水解成LCFA和游離COALCFA被定位于線粒體內(nèi)膜上的UCP3轉(zhuǎn)運(yùn)出線粒體游離COA可自由穿出線粒體繼續(xù)參與線粒體外的LCFA轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)線粒體。這一系統(tǒng)被認(rèn)為是促進(jìn)了Β氧化。國(guó)外一些試驗(yàn)結(jié)果也在不斷驗(yàn)證上述假說(shuō)。另外實(shí)驗(yàn)證實(shí)PPARA既可以調(diào)控ACOT2的表達(dá)又可以調(diào)控UCP3的表達(dá)國(guó)外圍繞上述三者的關(guān)系進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究。LSM屬于基因突變的常染色體隱性遺傳病故近年關(guān)于該病的報(bào)道主要關(guān)注在基因分型和病理診斷上LSM中LCFA代謝障礙己為人熟知而LSM病人體內(nèi)LCFA究竟發(fā)生了哪些代謝障礙則很少關(guān)注。CLAUDIO將LSM分為外源性FA轉(zhuǎn)運(yùn)及Β氧化障礙和內(nèi)生性甘油三酯分解障礙。本實(shí)驗(yàn)中我們提出一種新的LSM分型依據(jù)即通過(guò)檢測(cè)LCFA線粒體內(nèi)生成及轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的某些指標(biāo)來(lái)初步判斷LSM分型推測(cè)LSM是屬于LCFA向線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)減少一型還是轉(zhuǎn)運(yùn)增多一型。上述線粒體內(nèi)LCFA生成和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)ACOT2UCP3是我們研究LSM中FA代謝障礙的一個(gè)很好的切入點(diǎn)。另外可結(jié)合LSM中PPARA的表達(dá)更進(jìn)一步探索LSM中LCFA代謝障礙的情況。目的本實(shí)驗(yàn)用LSM作為研究對(duì)象檢測(cè)脂質(zhì)沉積性肌病中ACOT2和PPARΑ的表達(dá)觀察二者在LSM病人LCFA代謝障礙中所起的作用根據(jù)二者的表達(dá)情況推測(cè)LSM中LCFA究竟發(fā)生了哪些代謝障礙LCFA線粒體內(nèi)生成及轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)是否受損初步判斷LSM的分型。方法本研究分兩組觀察組為病理診斷為脂質(zhì)沉積性肌病的患者共10例對(duì)照組為肌肉病理正常的患者共10例。選取活檢取材的肌肉組織為研究對(duì)象。應(yīng)用WESTERNBLOT方法測(cè)定肌肉組織中PPARΑ和ACOT2蛋白的表達(dá)。結(jié)果110例LSM患者鏡下均表現(xiàn)為肌纖維內(nèi)脂質(zhì)沉積。HE染色肌纖維胞漿中可見(jiàn)散在空泡和裂隙三磷酸腺苷酶ATPASE染色可見(jiàn)兩型肌纖維正常鑲嵌分布空泡和裂隙可累及兩型肌纖維以Ⅰ型肌纖維為著。油紅“O”染色O見(jiàn)胞漿內(nèi)空泡或裂隙呈深紅染PAS染色正常。2LSM表達(dá)線粒體硫脂酶1ACOT2水平上調(diào)顯著高于正常人P＜005而過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體ΑPPARΑ表達(dá)與對(duì)照組比較差異不明顯P＞005。結(jié)論1LSM存在LCFA代謝障礙ACOT2參與了LSM中LCFA代謝障礙的過(guò)程。2LSM中LCFA線粒體內(nèi)生成及轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)受損。3該10例LSM病人轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)線粒體的LCFA增加。4PPARΑ表達(dá)不變提示其與LSM中FA代謝障礙的病理生理過(guò)程關(guān)系不大。

簡(jiǎn)介：目的觀察骨傷Ⅰ號(hào)方結(jié)合關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)治療早中期膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床療效，并對(duì)手術(shù)前后患者關(guān)節(jié)液中IL1Β的水平進(jìn)行測(cè)定，以探討骨傷Ⅰ號(hào)方治療早中期膝骨性關(guān)節(jié)炎的可能作用機(jī)理。方法將120例膝骨性關(guān)節(jié)炎患者隨機(jī)分為試驗(yàn)組、對(duì)照組Ⅰ組和對(duì)照Ⅱ組，每組各40例。試驗(yàn)組在膝關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)后1周予以中藥骨傷Ⅰ號(hào)方熱熨治療，對(duì)照組Ⅰ組在術(shù)后1周予以TDP治療，對(duì)照Ⅱ組只進(jìn)行關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)。在手術(shù)后第1、2、4周對(duì)患者癥狀、體征積分、關(guān)節(jié)炎影響指數(shù)和安全性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，并對(duì)手術(shù)前和手術(shù)后4周患者關(guān)節(jié)液中白細(xì)胞介素1的水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果三組術(shù)后4周總療效比較，試驗(yàn)組總有效率為925％，對(duì)照Ⅰ組總有效率為850％，對(duì)照Ⅱ組有效率為775％，三組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，顯示三組均可明顯緩解患者癥狀，改善患者膝關(guān)節(jié)功能。同時(shí)，試驗(yàn)組患者關(guān)節(jié)液中IL1Β的含量同對(duì)照Ⅰ組和對(duì)照Ⅱ組相比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。在治療期間，未見(jiàn)明顯因藥物使用引起的不良反應(yīng)。結(jié)論關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)后配合骨傷Ⅰ號(hào)方熱熨治療早中期膝骨性關(guān)節(jié)炎的療效優(yōu)于TDP結(jié)合關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)及單純關(guān)節(jié)鏡清理術(shù)，尤其對(duì)患者術(shù)后關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、關(guān)節(jié)活動(dòng)度等癥狀體征改善明顯，但其作用機(jī)制及遠(yuǎn)期療效尚有待于通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察來(lái)驗(yàn)證和闡明。

簡(jiǎn)介：研究目的采用大鼠藥物流產(chǎn)后陰道出血過(guò)多的動(dòng)物模型，研究生化湯水提醇沉液對(duì)早孕大鼠RU486藥物流產(chǎn)后子宮肌組織勻漿中一氧化氮NO及血漿內(nèi)皮素ET1水平的影響，探討其治療藥物流產(chǎn)后出血的作用機(jī)理，另一方面觀察生化湯不同劑型對(duì)其療效的影響，以期進(jìn)一步提高生化湯的臨床效果。研究方法采用藥物流產(chǎn)藥米非司酮配伍米索前列醇造成早孕大鼠流產(chǎn)后出血過(guò)多或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的模型。將妊娠的SD大鼠50只隨機(jī)分成5組正常對(duì)照組；藥流模型組；生化湯水煎劑組；生化湯水提醇沉液組；縮宮素組。除正常對(duì)照組外，其余各組均于妊娠第七天早晨800給予米非司酮83MGKG，1800時(shí)給予米索前列醇100ΜGKG灌胃。造模成功后各組動(dòng)物開(kāi)始灌胃給藥，經(jīng)相應(yīng)處理用藥結(jié)束后即妊娠第13天處死大鼠，肉眼觀察子宮外觀及流產(chǎn)情況，硝酸酶還原法檢測(cè)子宮肌組織勻漿中的NO含量，放射免疫法檢測(cè)靜脈血漿中ET1水平。研究結(jié)果1肉眼觀察水提醇沉組大鼠流產(chǎn)后子宮復(fù)舊情況優(yōu)于水煎劑組大鼠，與縮宮素組比較無(wú)明顯差別；2縮宮素組，水提醇沉組，水煎劑組與模型組比較均有降低組織中的NO水平，使ET含量升高的作用P001；3水提醇沉組與水煎劑組比較有顯著性差異P001，說(shuō)明兩者治療藥流后異常陰道出血的功效有差異；4水提醇沉組與縮宮素組比較無(wú)顯著性差異P005。研究結(jié)論1采用米非司酮配伍米索前列醇的方法，成功建立了早孕大鼠不全流產(chǎn)病理模型，并從血管活性物質(zhì)調(diào)節(jié)失衡方面探討了藥流后出血量多出血時(shí)間延長(zhǎng)的發(fā)病機(jī)理2生化湯水提醇沉液的作用機(jī)理可能是通過(guò)降低藥流后大鼠子宮肌勻漿中NO水平，提高血漿中ET1水平，而加快了子宮內(nèi)膜、子宮肌組織及血管的收縮修復(fù)，達(dá)到止血，促進(jìn)子宮復(fù)舊的目的。3生化湯不同劑型對(duì)治療效果有一定影響，生化湯水提醇沉液優(yōu)于水煎劑組，且具有雜質(zhì)少，療效顯，服用量少，易存放不易變質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)。4實(shí)驗(yàn)中服用生化湯水提醇沉液及水煎劑組藥流模型大鼠未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。

簡(jiǎn)介：2DTWODIMENSIONAL／3DTHREEDIMENSIONAL醫(yī)學(xué)圖像配準(zhǔn)可應(yīng)用于脊柱手術(shù)導(dǎo)航、術(shù)后評(píng)估和膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)分析。本文的目的是研究脊柱或膝關(guān)節(jié)2DX線／3DCT配準(zhǔn)方法評(píng)估各算法對(duì)配準(zhǔn)結(jié)果的影響及其實(shí)用價(jià)值。本文采用剛性配準(zhǔn)方法度量骨組織的剛體運(yùn)動(dòng)針對(duì)多個(gè)關(guān)節(jié)聯(lián)接的骨組織我們研究了整體配準(zhǔn)后再分段配準(zhǔn)算法流程。首先我們對(duì)X線透視成像場(chǎng)景進(jìn)行標(biāo)定獲得成像設(shè)備的參數(shù)。然后根據(jù)這些參數(shù)我們采用射線跟蹤算法從CT體積數(shù)據(jù)生成仿真透視圖像DRRDIGITALLYRECONSTRUCTEDRADIOGRAPH圖像用差值圖像的熵、互信息、SLNCSUMOFLOCALNMALIZEDCRELATION或VLNCVARIANCEWEIGHTEDSUMOFLOCALNMALIZEDCRELATION以及在此基礎(chǔ)上提出的正交投影相似性測(cè)度函數(shù)計(jì)算相似性測(cè)度值最后用改進(jìn)粒子群算法在6維解空間內(nèi)搜索最優(yōu)解。分段配準(zhǔn)算法在配準(zhǔn)前手動(dòng)分割體數(shù)據(jù)分段DRR需要經(jīng)過(guò)插值和補(bǔ)齊處理。整體配準(zhǔn)后其結(jié)果作為分段配準(zhǔn)的初值用POWELL算法搜索得到分段配準(zhǔn)結(jié)果。為驗(yàn)證2D／3D配準(zhǔn)方法的正確性我們采用已知位置的DRR圖像作為參考圖像進(jìn)行整體配準(zhǔn)測(cè)試結(jié)果驗(yàn)證傳統(tǒng)單幅參考圖像相似性測(cè)度方法容易造成誤配采用正交投影相似性測(cè)度方法使解空間內(nèi)極值點(diǎn)減少可以得到較為精確的配準(zhǔn)結(jié)果。改進(jìn)粒子群算法加大解空間搜索范圍使粒子群算法全局和局部?jī)?yōu)化搜索能力均有所提高測(cè)試配準(zhǔn)結(jié)果誤差控制在平移15MM內(nèi)旋轉(zhuǎn)15°內(nèi)。用兩套相互正交的DRDIGITALRADIOGRAPHY設(shè)備拍攝的正交投影X線透視圖像作為參考圖像進(jìn)行整體配準(zhǔn)和分段配準(zhǔn)。本文以脊柱和膝關(guān)節(jié)標(biāo)本各自對(duì)應(yīng)的CT和X線圖像進(jìn)行配準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)并用三維激光掃描儀得到的點(diǎn)云數(shù)據(jù)進(jìn)行3D／3D配準(zhǔn)驗(yàn)證2D／3D配準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到配準(zhǔn)結(jié)果誤差控制在平移15MM內(nèi)旋轉(zhuǎn)15°內(nèi)。整體配準(zhǔn)時(shí)間均消耗約為40分鐘單段配準(zhǔn)均消耗時(shí)間約為3分鐘。從配準(zhǔn)結(jié)果融合圖效果及誤差上看本文算法取得了較好的2D／3D配準(zhǔn)效果。對(duì)有多個(gè)關(guān)節(jié)連接的脊柱分段配準(zhǔn)可以進(jìn)一步優(yōu)化整體配準(zhǔn)效果。

簡(jiǎn)介：目的建立新西蘭大白兔標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損的動(dòng)物模型利用組織工程方法在無(wú)外源性生長(zhǎng)因子的作用下將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的自體BMSCS定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處以修復(fù)兔子標(biāo)準(zhǔn)顱骨缺損同時(shí)闡明本實(shí)驗(yàn)的相關(guān)機(jī)制及可行性為臨床上尋找更好的顏骨缺損生物學(xué)修補(bǔ)方法提供基礎(chǔ)研究。材料及方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為純種新西蘭大白兔50只雌雄不限4月齡左右。分兩大組I實(shí)驗(yàn)組25只將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的自體BMSCS定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后接種于異體滅活多孔顱骨瓣并回植顱骨缺損處修復(fù)兔子顏骨標(biāo)準(zhǔn)缺損2常規(guī)對(duì)照組25只僅異體滅活多孔顱骨瓣回植顱骨缺損處修復(fù)兔子顱骨標(biāo)準(zhǔn)缺損。兩組于第10、15天對(duì)受區(qū)進(jìn)行成骨細(xì)胞內(nèi)源性BMP2的免疫組化檢查另兩組設(shè)2周、4周、8周、12周、16周5個(gè)時(shí)限于各個(gè)限點(diǎn)處死動(dòng)物取材對(duì)受區(qū)分別進(jìn)行大體形態(tài)、組織學(xué)、掃描電鏡觀察和最終所形成的骨瓣進(jìn)行骨密度的檢查每個(gè)限點(diǎn)5只動(dòng)物。結(jié)果骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)、體外擴(kuò)增經(jīng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后可轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞經(jīng)堿性磷酸酶檢測(cè)證實(shí)其為成骨細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組和常規(guī)對(duì)照組共50例除其中I例術(shù)后移植區(qū)發(fā)生感染和I例不明原因死亡外其它48例顱骨缺損區(qū)均得到較滿意的修補(bǔ)效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察1大體形態(tài)實(shí)驗(yàn)組與常規(guī)對(duì)照組無(wú)明顯差別16周時(shí)兩組受區(qū)均已基本為新生骨代替與缺損邊緣形成骨性愈合界面牢固。2組織學(xué)及電鏡檢查實(shí)驗(yàn)組受區(qū)內(nèi)可見(jiàn)有大量成骨細(xì)胞充填于死骨孔隙內(nèi)細(xì)胞增殖并見(jiàn)胞外基質(zhì)分泌見(jiàn)骨陷窩形成及血管長(zhǎng)入植骨區(qū)。大量骨化中心形成成骨細(xì)胞被固定在骨基質(zhì)中變?yōu)楣羌?xì)胞形成小梁狀不成熟的編織骨組織隨著骨基質(zhì)中礦物質(zhì)和有機(jī)物的增加骨基質(zhì)日趨成熟鈣化明顯從而使層板骨取代編織骨完成顱骨缺損的修補(bǔ)。常規(guī)對(duì)照組受區(qū)內(nèi)的成骨細(xì)胞數(shù)量、成骨活性及血管化均不如實(shí)驗(yàn)組且時(shí)間上成骨活動(dòng)比實(shí)驗(yàn)組慢4一6周。3內(nèi)源性BMP2免疫組織化學(xué)檢查第10天和第15天的兩次檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)源性BMP2免疫組織化學(xué)檢查見(jiàn)胞質(zhì)內(nèi)有深染的棕黃色顆粒陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度均比常規(guī)對(duì)照組強(qiáng)。4骨密度的測(cè)定實(shí)驗(yàn)組骨礦含量和骨密度BMC、BMD結(jié)果稍低于正常對(duì)照組但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而常規(guī)對(duì)照組骨礦含量和骨密度明顯低于正常對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1、骨髓可以成為骨組織工程中較常用的種子細(xì)胞來(lái)源。2、異體多孔顱骨瓣經(jīng)高溫滅活后可以成為骨組織工程中較常用的支架來(lái)源。3、自體成骨細(xì)胞復(fù)合異體滅活多孔顱骨瓣修補(bǔ)盧頁(yè)骨缺損主要是以膜內(nèi)化骨形式進(jìn)行的成骨活動(dòng)無(wú)論從速度上還是質(zhì)量上均明顯優(yōu)于單純多孔骨瓣修補(bǔ)結(jié)果骨礦含量、骨密度及外觀均達(dá)到正常顱骨的水平符合生物學(xué)修補(bǔ)的要求有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

簡(jiǎn)介：脂聯(lián)素（ADIPONECITN）作為一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞分泌因子，具有多種重要的生物學(xué)功能。它參與糖、脂代謝，具有改善胰島素抵抗、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低血糖、血脂等作用，與胰島素抵抗、2型糖尿病、代謝綜合征、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。近期研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素與骨代謝也有著密切的聯(lián)系。脂聯(lián)素及其受體在成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞均有表達(dá)。不同部位產(chǎn)生的脂聯(lián)素影響骨形成的途徑不同，局部產(chǎn)生的脂聯(lián)素可能通過(guò)自分泌或旁分泌途徑促進(jìn)骨形成，而循環(huán)中脂聯(lián)素既可直接抑制骨形成，亦可通過(guò)促進(jìn)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)間接促進(jìn)骨形成?？赡苁怯捎谶@三條途徑之間存在的相互平衡作用，致使該基因剔除小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠在基礎(chǔ)喂養(yǎng)狀態(tài)下均不出現(xiàn)骨生成發(fā)育障礙的現(xiàn)象。為進(jìn)一步闡明脂聯(lián)素在骨代謝調(diào)控中的作用，本研究利用課題組建立的脂聯(lián)素基因剔除小鼠（APN）模型，通過(guò)卵巢切除（OVX）的方式，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生骨質(zhì)疏松的表型，進(jìn)而在整體動(dòng)物水平研究脂聯(lián)素和骨代謝之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)小鼠按基因型和手術(shù)方式分四組進(jìn)行研究，分別是WTSO組（假手術(shù)野生組，N5）、WTOVX組（手術(shù)野生組，N6）、KOSO組（假手術(shù)基因剔除組，N6）和KOOVX組（手術(shù)基因剔除組，N7）。研究結(jié)果顯示，野生型小鼠經(jīng)過(guò)卵巢切除手術(shù)后，確實(shí)產(chǎn)生了骨質(zhì)疏松的表型，股骨和腰椎的BMD均有顯著下降。卵巢未切除時(shí)，KO小鼠股骨和腰椎BMD比WT小鼠稍有下降，差距并不顯著，而卵巢切除之后，KO小鼠的腰椎BMD比WT小鼠顯著上升（P001），股骨BMD則無(wú)顯著差異，提示在卵巢切除狀態(tài)下，脂聯(lián)素對(duì)小鼠腰椎的骨生成有顯著的抑制作用，而脂聯(lián)素基因剔除后，反而對(duì)小鼠腰椎的骨量丟失起到一定的保護(hù)作用。骨生物力學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果及腰椎成骨細(xì)胞AKP活性檢測(cè)結(jié)果顯示，在卵巢切除狀態(tài)下，脂聯(lián)素的缺失引起腰椎骨結(jié)構(gòu)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)上升，腰椎成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，更進(jìn)一步證實(shí)了脂聯(lián)素的缺失對(duì)腰椎的保護(hù)作用。本研究的意義在于雌性小鼠卵巢切除的狀態(tài)模擬了婦女絕經(jīng)后的體內(nèi)環(huán)境，由于小鼠在卵巢切除時(shí)，脂聯(lián)素對(duì)腰椎的骨生成有顯著的抑制作用，因此，降低脂聯(lián)素的分泌，破壞脂聯(lián)素的作用途徑將來(lái)很有可能成為治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的新靶點(diǎn)。本課題同時(shí)在細(xì)胞水平對(duì)脂聯(lián)素和骨生成之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCS），再用藥物誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞分化，進(jìn)而比較KO小鼠的MSCS與野生型小鼠的MSCS之間的增殖、分化和礦化能力。研究結(jié)果顯示，來(lái)自KO小鼠的MSCS的克隆形成能力顯著比WT小鼠的MSCS克隆形成能力強(qiáng)，且細(xì)胞蛋白裂解液經(jīng)過(guò)定量后測(cè)其AKP活性結(jié)果也顯示，其細(xì)胞活性要比WT小鼠的MSCS顯著增強(qiáng)。小鼠MSCS經(jīng)過(guò)藥物誘導(dǎo)定向向成骨細(xì)胞分化后，對(duì)其鈣結(jié)節(jié)形成能力進(jìn)行了檢驗(yàn)。用茜素紅S染液對(duì)鈣結(jié)節(jié)進(jìn)行染色，同樣證明，KO小鼠的MSCS經(jīng)藥物誘導(dǎo)后其鈣結(jié)節(jié)形成能力增強(qiáng)。本研究得出的結(jié)論是由于脂聯(lián)素的缺失，促使小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后，其成骨細(xì)胞活性升高。因此，體外實(shí)驗(yàn)亦證明脂聯(lián)素對(duì)成骨細(xì)胞具一定抑制作用，而其缺失反而增強(qiáng)了成骨細(xì)胞的活性，與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果完全吻合。深入研究脂聯(lián)素和骨代謝之間的作用和調(diào)節(jié)機(jī)制，有助于進(jìn)一步認(rèn)清肥胖與骨代謝之間的關(guān)系，為防治骨質(zhì)疏松與動(dòng)脈硬化提供新的理論依據(jù)。