簡(jiǎn)介：青島大學(xué)碩士學(xué)位論文肌苷對(duì)缺血再灌注腦組織黏附分子ICAM1表達(dá)的影響及保護(hù)作用姓名邊立忠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師劉成玉20050524EFFECTSOFINOSINEONEXPRESSIONOFICAM1INCEREBRAAFTERISCHEM隊(duì)ANDREPERFUSIONABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATE山EEXPRESSIONOFINTERCELLULARADHESIONMOLECULELICAM．1ANDTHECHANGESOFICAMLINCEREBRAAFTERFOCALCEREBRALISCHEMIAANDREPERFUSION．TOSTUDYTHEEFFECTSOFINOSINEONTHEEXPRESSIONOFLCAM．1INCEREBRAANDTOEXPLORETHENEUROPROFCCTIVITYOFINOSINE．METHODSSOMEADULTFEMALESPRAGUEDAWLEYSDRATSWEREDIVIDEDRANDOMLYINTOSHAMOPERATIONGROUPSG，ISCHEMIAREPERFUSIONGROUPIGCONSISTEDOF7SUBGROUPSWITLL3RATSANDTHERAPYGROUPTGCONSISTEDOF7SUBGROUPSWITH3RATS，ANDTHEYWEREMADETOMIDDLECEREBRALARTERYOCCLUSIONMCAOMODELAT2H,6H，12H，24H,2D,3D,7DAND14DRESPECTIVELYAFTERISCHEMIC90RAIN．THEEXPRESSIONOFICAM一1ANDITSMRNAWEREMEASUREDBYMETHODSOFIMMUNOHISTOCHEMISTRYIHCANDINSITEHYBRIDIZEISHL．RESULTSATTHEIGTHELEVELOFICAM．1INCEREBRALCONTEXANDSTRIATURNVARIESWITHTHEHOURSOFISCHEMIAREPERFUSION．ANDTHEEYEABLEEXPRESSIONOFICAM．1ANDITSMRNAOCA21N“AT2HPOSSIBLY,AMARKEDINCREASEAT6H,THEPEAKAT24H，THEHEAPSREMAINEDFROM12HTO48HANDTHENDECREASEGRADUALLY,WHEREASTHEYWEREOBSERVEDHARDLYINTHESG；ATTHETGINDESPITEOFTHELEVELOFICAM．1ANDITSMRNAALSOVARIESWITHTHEHOURSOFISCHEMIAREPERFUSSION．THENUMBEROFCEREBRALPOSITIVECELLSARCFEWERTHANCORRESPONDEDHOURINTHEIGANDHIGHERNOTABLETHANTHESGTHEREISASIGNIFICANTDIFF啪NCEBETWEENTHEIGANDTHETGCONCLUSIONAPPROPDATECONCENTRATEOFINOSINENGGHTBEBENEFICIALTOCEREBRALTISSUEAFTERISCHEMIAREPERFUSION．KEYWOR蹦CEREBRALISCHEMIA；ISCHEMIAREPERFUSION；INTERCELLULARADHESIONMOLECULE1；INOSINE；LMMUNOHISTOEHEMISTRY；INSITUHYBRIDIZATIONPOSTGRADUATESTUDENTLIZHONGBIANCLINICALLABORATORYDIAGNOSTICSDIRECTEDBYPROF．CHENGYULIU

簡(jiǎn)介：本文通過(guò)研究納米羥基磷灰石聚酰胺NHAPA66復(fù)合材料用于修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)，用丙烯酸甲酯骨水泥PMMA和磷酸鈣骨水泥CPC進(jìn)行對(duì)照研究，力圖用影像學(xué)方法對(duì)移植區(qū)內(nèi)的成骨和血管化進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，為NHAPA66復(fù)合材料應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。方法48只新西蘭大白兔隨機(jī)分成三組，編號(hào)A、B、C每組16只。每只兔子行雙側(cè)脛骨髁鉆孔。A組雙側(cè)分別植入NHAPA66復(fù)合材料和PMMA，B組雙側(cè)分別植入NHAPA66復(fù)合材料和CPC，C組雙側(cè)分別植入CPC和PMMA。術(shù)后2、4、6、8、12周各時(shí)相點(diǎn)攝DR片、MRI檢查，并取材進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察和力學(xué)檢測(cè)。所得數(shù)據(jù)用SAS80統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。結(jié)果表明NHAPA66復(fù)合材料具有良好的生物相容性和骨傳導(dǎo)性。DR和MRI相互補(bǔ)充對(duì)移植區(qū)內(nèi)的成骨和血管形成具有良好的觀(guān)察效果，從而對(duì)早期骨移植的成功有良好預(yù)測(cè)作用，具有臨床可操作性。

簡(jiǎn)介：目的應(yīng)用人骨形成蛋白7HUMANBONEMPHOGEICPROTEIN7，HBMP7基因分別重組2型腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUSSEROTYPE2，AAV2和35型腺病毒ADENOVIRUS’SCONTAININGFIBERSDERIVEDFROMBGROUPSEROTYPE35，AD5F35，在體外轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS后與仿生型生物玻璃膠原蛋白磷脂酰絲氨酸透明質(zhì)酸BIOACTIVEGLASS，COLLAGENHYALURONICACIDPHOSPHATIDYLSERINE，BGCOLHYAPS復(fù)合支架材料復(fù)合，植入兔橈骨缺損模型中，觀(guān)察其在體內(nèi)成骨的能力，比較哪種病毒載體更適合介導(dǎo)HBMP7基因應(yīng)用于骨缺損的治療。結(jié)論1成功構(gòu)建了HBMP7基因重組2型腺相關(guān)病毒、35型腺病毒載體；成功在體外培養(yǎng)出表達(dá)均一、高純度的兔MSCS。2RAAV2EGFP和RAD5F35EGFP在體外均可高效轉(zhuǎn)染兔MSCS。前者在兔MSCS中表達(dá)的熒光強(qiáng)度與維持的時(shí)間比后者更強(qiáng)和更長(zhǎng)。3RAAV2HBMP7與RAD5F35HBMP7在體外均可促進(jìn)兔MSCS向成骨細(xì)胞定向分化。前者在堿性磷酸酶、鈣結(jié)節(jié)和骨鈣素等成骨細(xì)胞表型各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于后者。4RAAV2HBMP7與RAD5F35HBMP7轉(zhuǎn)染的兔MSCS與仿生型BGCOLHYAPS復(fù)合后植入SCID鼠后肢肌袋均能異位成骨，但前者成骨的時(shí)間早于后者。而RAAV2EGFP和RAD5F35EGFP轉(zhuǎn)染的兔MSCS與BGCOLHYAPS的復(fù)合體在早期未見(jiàn)明確成骨。5骨缺損模型畔RAAV2HBMP7轉(zhuǎn)染的兔MSCS與仿生型復(fù)合支架BGCOLHYAPS組成的復(fù)合體修復(fù)的橈骨早期在抗折彎能力上強(qiáng)于RAD5F35HBMP7組成的復(fù)合體，但均不如正常的橈骨。比較RAD5F35HBMP7修飾的組織工程骨，RAAV2HBMP7修飾的組織工程骨是更為理想的骨缺損修復(fù)材料。

簡(jiǎn)介：目的心房顫動(dòng)ATRIALFIBRILLATION，AF簡(jiǎn)稱(chēng)房顫，是臨床常見(jiàn)的快速心律失常，其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。隨著膜片鉗和分子生物學(xué)等技術(shù)在心血管疾病研究領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，人們?cè)诩?xì)胞和分子水平探索房顫發(fā)生和維持的機(jī)制，并為房顫的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)已成為可能。近年，人類(lèi)心房肌中出人意料的發(fā)現(xiàn)存在鈣激活鉀電流IKCA，并確定該電流由SK2通道SMALLCONDUCTANCECALCIUMACTIVATEDPOTASSIUMCHANNEL2，SK2介導(dǎo)。使用SK2通道特異性阻斷劑蜂毒明肽APAMIN后，細(xì)胞動(dòng)作電位復(fù)極期時(shí)程明顯延長(zhǎng)，提示SK2通道在動(dòng)作電位的復(fù)極期發(fā)揮作用。目前，有關(guān)房顫患者心房肌組織中SK2基因表達(dá)水平的檢測(cè)未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用TAQMAN探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)13例風(fēng)濕性心臟病竇性心律患者和15例風(fēng)濕性心臟病慢性房顫患者心房肌組織中SK2通道Α亞單位MRNA的表達(dá)水平，為探討SK2通道在房顫中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法標(biāo)本來(lái)自瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體外循環(huán)手術(shù)患者常規(guī)切除的右心耳組織，患者經(jīng)心臟彩超和心電圖證實(shí)為風(fēng)心病竇性心律或風(fēng)心病慢性房顫。將標(biāo)本分為竇律組SR組和房顫組AF組，兩組間患者年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)操作步驟為1心耳組織被迅速轉(zhuǎn)移至液氮中，備用。2提取心房肌組織總RNA。3總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成EDNA。4利用PCR技術(shù)將小部分EDNA擴(kuò)增，得到目的基因SK2和內(nèi)參基因ΒACTIN的DNA片段。5將純化后DNA片段與PMD18TVECT在16℃連接12H。產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌中，涂布于固體LB培養(yǎng)板上，37℃孵育8H。6挑取平板上白色菌落，搖菌12H。提取質(zhì)粒，制做成標(biāo)準(zhǔn)品。7質(zhì)粒進(jìn)行TAQMAN探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，定量軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和方程式。8將3所得AF和SR兩組EDNA，進(jìn)行TAQMAN探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程式，計(jì)算出樣品初始模板量。9數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差X±S表示，使用T檢驗(yàn)檢測(cè)組間均數(shù)差異，P005有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)在SPSS130FWINDOWS版軟件包上完成。結(jié)果1利用紫外線(xiàn)線(xiàn)分光計(jì)對(duì)提取的總RNA進(jìn)行光吸收度測(cè)量，A260280在190～210之間，A260230在180～210之間，濃度大于300NGΜL，表明RNA的純度及濃度在理想范圍內(nèi)；總RNA電泳結(jié)果顯示28S條帶和18S條帶清晰，無(wú)托尾；灰度比大于1，5S帶不明顯，表明RNA完整性較好。2SK2和ΒACTIN的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于099。SK2的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為Y0219X644，R20997；ΒACTIN的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為Y0242X712，R20997。3SR組和AF組SK2ΒACTIN比值分別為00782±00442N13和00423±0093N15，T2753P005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1人體心房肌組織中存在SK2基因表達(dá)。2慢性房顫患者心房肌組織中SK2基因表達(dá)水平低于竇性心律患者，提示SK2MRNA表達(dá)的下調(diào)可能參與房顫發(fā)生的病理過(guò)程。

簡(jiǎn)介：計(jì)算機(jī)視覺(jué)技術(shù)作為一種無(wú)損檢測(cè)的手段，目前在食品檢測(cè)領(lǐng)域已經(jīng)取得了較為廣泛的應(yīng)用，但是國(guó)內(nèi)將計(jì)算機(jī)視覺(jué)技術(shù)應(yīng)用于牛肉眼肌等級(jí)評(píng)定的無(wú)損檢測(cè)工作才剛剛起步本論文主要探討了計(jì)算機(jī)視覺(jué)技術(shù)在影響牛肉眼肌等級(jí)最主要的兩個(gè)因素大理石花紋分布和肉色方面的應(yīng)用基于以上目的，本文根據(jù)軟件使用目的不同建立了兩套系統(tǒng)。本論文完成的主要工作有建立了計(jì)算機(jī)視覺(jué)硬件系統(tǒng)，利用圖像分析原理，在VC60的環(huán)境下自行開(kāi)發(fā)了適用于農(nóng)畜產(chǎn)品圖像處理和參數(shù)提取的處理軟件IMAGEANALYSIS10和專(zhuān)用的牛肉眼肌自動(dòng)分級(jí)軟件。可以實(shí)現(xiàn)圖像處理，形狀特征值的提取和自動(dòng)分級(jí)等功能。運(yùn)用常見(jiàn)的顏色模型RGB、HIS、LAB，對(duì)樣品圖片進(jìn)行了抽樣統(tǒng)計(jì)分析，在大量數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上得到了牛肉顏色各分量的分布規(guī)律，并且找到了最佳的區(qū)分參數(shù)T。利用圖像處理方法和本文提出的一些改進(jìn)算法，對(duì)眼肌的圖像進(jìn)行處理邊緣檢測(cè)、灰度轉(zhuǎn)變，圖像的平滑、圖像分割、區(qū)域標(biāo)記、特征值提取、篩選，成功地提取了圖像的特征參數(shù)，并且分析出了一些最佳的過(guò)程參數(shù)。建立了感官評(píng)定結(jié)果與各特征參數(shù)的多種關(guān)系模型，并對(duì)其準(zhǔn)確率進(jìn)行了分析，在此基礎(chǔ)上找到了最佳的分級(jí)模型。最佳的脂肪等級(jí)預(yù)測(cè)模型為FAT55430107R0140G0049B0016H0031S0256L0227A0101BL0261EAB，其預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率在不同的誤差水平下分別為80％誤差≤03，95％誤差最佳的肌肉等級(jí)預(yù)測(cè)模型為MEAT48040046G0073B0001H0094S0212L0136A0009BL0081EAB，其預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率在不同的誤差水平下分別為875％誤差≤03，95％誤差最佳的大理石花紋等級(jí)預(yù)測(cè)模型為S593546165D11427126D126338641D13，其預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率在不同的誤差水平下分別為775％誤差運(yùn)用BP人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，對(duì)訓(xùn)練樣本和檢測(cè)樣本進(jìn)行分析，訓(xùn)練樣本的預(yù)測(cè)正確率脂肪顏色857％；瘦肉顏色798％；大理石花紋867％。檢測(cè)樣本的預(yù)測(cè)正確率脂肪顏色85％；瘦肉顏色75％；大理石花紋875％。在前面工作的基礎(chǔ)上自行開(kāi)發(fā)了牛肉眼肌自動(dòng)分級(jí)軟件，自動(dòng)分級(jí)軟件對(duì)瘦肉顏色等級(jí)、脂肪顏色等級(jí)、大理石花紋等級(jí)的預(yù)測(cè)正確率分別達(dá)到80％、70％、80％。該軟件一分鐘至少可以對(duì)10個(gè)眼肌進(jìn)行等級(jí)評(píng)定。本論文對(duì)計(jì)算機(jī)視覺(jué)技術(shù)在牛肉品質(zhì)評(píng)定方面進(jìn)行了探索，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明計(jì)算機(jī)視覺(jué)系統(tǒng)可以代替常規(guī)方法，對(duì)肉質(zhì)做出準(zhǔn)確客觀(guān)的評(píng)定。

簡(jiǎn)介：研究目的從骨密度及骨強(qiáng)度兩方面預(yù)測(cè)絕經(jīng)后女性股骨頸骨折風(fēng)險(xiǎn)。首先應(yīng)用VOCT技術(shù)測(cè)量絕經(jīng)后女性股骨頸多個(gè)容積性BMD并行DXA測(cè)量，評(píng)價(jià)兩種方法對(duì)骨質(zhì)疏松及骨質(zhì)疏松性骨折的預(yù)測(cè)能力，探討骨質(zhì)疏松性椎體骨折對(duì)股骨頸BMD的影響程度；進(jìn)行雙側(cè)跟骨QUS測(cè)量，篩選出跟骨超聲中預(yù)測(cè)骨折風(fēng)險(xiǎn)的最敏感指標(biāo)，評(píng)價(jià)跟骨QUS與股骨頸VQCT預(yù)測(cè)骨折的能力及相關(guān)程度，為臨床應(yīng)用影像學(xué)方法評(píng)估股骨頸骨強(qiáng)度提供依據(jù)。資料與方法1選取絕經(jīng)后女性90例，按股骨頸DXA骨密度T≥M1SD、TM2SD不伴椎體骨折及伴椎體骨折分為三組。應(yīng)用GELIGHTSPEED16型MSCT對(duì)受檢者股骨近端及其后的配套體模同時(shí)進(jìn)行容積掃描，將原始數(shù)據(jù)進(jìn)行回顧性重建，形成約150幀層厚為125MM的左側(cè)股骨近端橫斷面影像。應(yīng)用OSTEOCAD軟件NEUSOFT公司做QCT測(cè)量，可自動(dòng)計(jì)算出皮質(zhì)骨、松質(zhì)骨、整體骨部分的骨密度，以及股骨頸軸長(zhǎng)度和最小橫斷面積等參數(shù)。測(cè)量指標(biāo)分別表示為左側(cè)股骨頸皮質(zhì)骨、小梁骨及整體骨BMD分別為CTRAB，INT；股骨頸軸長(zhǎng)NL最小橫截面積CSA。2同樣選取60例絕經(jīng)后女性，按照DXA骨密度T≥M1SD、TM2SD不伴椎體骨折及伴椎體骨折分為三組。對(duì)受檢者進(jìn)行超聲骨密度測(cè)量，整個(gè)過(guò)程由骨密度儀自動(dòng)完成。受檢者均測(cè)量左、右兩側(cè)跟骨，測(cè)量指標(biāo)表示為超聲振幅衰減平均值BUA、聲速SOS、骨硬度指數(shù)STI、T值、Z值。3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS115軟件包，比較各組間上述各參數(shù)的差異，采用方差分析及協(xié)方差分析，以P005作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。左右兩側(cè)跟骨間各相應(yīng)測(cè)量參數(shù)進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)。經(jīng)ROC曲線(xiàn)分析跟骨超聲衰減系數(shù)、聲速及骨硬度指數(shù)區(qū)分骨質(zhì)疏松性骨折的能力。結(jié)果第一部分11在正常組與骨質(zhì)疏松組、正常組與骨折組之間，C，TRAB，INT，NECK，LS各參數(shù)間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在調(diào)節(jié)年齡和體型因素后，差異仍然存在。在骨質(zhì)疏松組和骨折組之間，VQCT測(cè)量結(jié)果中除皮質(zhì)骨BMD組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，小粱骨與整體骨BMD兩組間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異F值分別為941和1307，P值分別為0000和0007，且小梁骨BMD下降程度明顯，達(dá)374％。DXA測(cè)量結(jié)果兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。12總體資料中年齡與VQCT及DXA各BMD測(cè)值之間相關(guān)性均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，呈負(fù)相關(guān)，其中與VQCT測(cè)得的股骨頸小梁骨密度相關(guān)系數(shù)最高。體重、體重指數(shù)除與股骨頸皮質(zhì)骨密度相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，與其他諸項(xiàng)骨密度值均呈正相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各項(xiàng)骨密度測(cè)量值CTRAB，INT，NECK，LS兩兩之間相關(guān)性均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0000，其中股骨頸小梁骨BMD與整體骨BMD之間相關(guān)系數(shù)最高，達(dá)0920。13應(yīng)用多層螺旋CTMSCT和VQCT技術(shù)還可以對(duì)股骨頸幾何參數(shù)進(jìn)行定量分析。在絕經(jīng)后老年女性中，正常組與骨質(zhì)疏松組、正常組與骨質(zhì)疏松性骨折組之間NL及CSA測(cè)值差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中正常組NL平均值為797±362MM，CSA平均值為634±674MM2；骨質(zhì)疏松組NL均值為898±366MM，正常組骨質(zhì)疏松組CSA均值為563±608MM2。14股骨頸VQCT各參數(shù)的測(cè)量精度為0159％～1107％，其中股骨頸軸長(zhǎng)測(cè)量精度最高，兩次測(cè)量值間精度為0159％，測(cè)量者間精度為0203％，有利于骨質(zhì)疏松的療效監(jiān)測(cè)。第二部分21在正常組與骨質(zhì)疏松組、正常組與骨折組之間，C、TRAB、INT、NECK、BUA、SOS、STI各參數(shù)之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在調(diào)節(jié)年齡和體型因素后，差異仍然存在。在骨質(zhì)疏松組和骨折組之間，跟骨超聲測(cè)量結(jié)果中骨硬度指數(shù)兩組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0032，0024，而超聲振幅衰減平均值、聲速測(cè)量結(jié)果兩組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。22超聲振幅衰減平均值、超聲傳播速度及骨硬度指數(shù)與骨密度各測(cè)量值呈顯著正相關(guān)，其中超聲振幅衰減平均值與股骨頸小梁骨骨密度TRAB相關(guān)系數(shù)最高R0779，P001。23左右兩側(cè)跟骨各測(cè)量參數(shù)都密切相關(guān)。右側(cè)跟骨SOS值大于左側(cè)相應(yīng)參數(shù)，二者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但差別33％，其余兩側(cè)跟骨間參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。24以BUA、SOS、STI的下限值為骨質(zhì)疏松癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，ROC曲線(xiàn)下面積為0816～0913曲線(xiàn)下面積越接近1，診斷效果越好，其中STI敏感度最高，為900％，特異度812％。結(jié)論1股骨頸VQCT測(cè)量和跟骨超聲測(cè)量都可以區(qū)分骨質(zhì)疏松及骨質(zhì)疏松性椎體骨折，預(yù)測(cè)骨折風(fēng)險(xiǎn)，股骨頸VQCT參數(shù)中以小梁骨診斷效果最好，跟骨QUS參數(shù)中STI最佳。2年齡因素與VQCT測(cè)量的BMD值及跟骨超聲各參數(shù)間呈負(fù)相關(guān)，體重、體重指數(shù)與除C外各測(cè)量指標(biāo)均呈正相關(guān)，其中年齡與小梁骨密度相關(guān)系數(shù)最高。3應(yīng)用多層螺旋CTMSCT和VQCT技術(shù)還可以對(duì)股骨頸幾何參數(shù)進(jìn)行定量分析，可用來(lái)評(píng)估股骨頸骨強(qiáng)度從而預(yù)測(cè)骨質(zhì)疏松性骨折。4股骨頸VQCT各參數(shù)的測(cè)量精度高，尤以股骨頸軸長(zhǎng)測(cè)量精度最高，有利于骨質(zhì)疏松的療效監(jiān)測(cè)。5左右兩側(cè)跟骨骨強(qiáng)度密切相關(guān)，但不完全一致，測(cè)量一側(cè)跟骨時(shí)建議選擇左側(cè)，如測(cè)量?jī)蓚?cè)則能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)骨質(zhì)疏松及骨折風(fēng)險(xiǎn)。6三種跟骨超聲參數(shù)比較，在骨質(zhì)疏松癥檢出率方面STI優(yōu)于BUA及SOS，但不及VQCT。將VQCT和QUS聯(lián)合應(yīng)用能更科學(xué)地評(píng)價(jià)骨強(qiáng)度，為預(yù)測(cè)骨折風(fēng)險(xiǎn)提供依據(jù)。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)分類(lèi)號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)M201275833學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級(jí)密級(jí)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文唑來(lái)膦酸對(duì)成骨前體細(xì)胞系MC3T3E1細(xì)唑來(lái)膦酸對(duì)成骨前體細(xì)胞系MC3T3E1細(xì)胞活力和功能影響的實(shí)驗(yàn)研究胞活力和功能影響的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人黃鑫黃鑫學(xué)科專(zhuān)業(yè)學(xué)科專(zhuān)業(yè)外科學(xué)（骨外科）指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師陳安民教授答辯日期答辯日期2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日本論文屬于

簡(jiǎn)介：本研究應(yīng)用細(xì)胞力學(xué)和生物學(xué)相結(jié)合的手段，研究不同性質(zhì)的應(yīng)力下成骨細(xì)胞的生物學(xué)響應(yīng)并進(jìn)行初步比較，為深入了解成骨細(xì)胞在機(jī)械力刺激下的生物應(yīng)答及其機(jī)理奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)選用成骨樣細(xì)胞株ROS1728，體外培養(yǎng)后，采用自行設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的靜態(tài)膜式張應(yīng)力加載系統(tǒng)和靜態(tài)壓應(yīng)力加載系統(tǒng)，應(yīng)用彈性膜間接加載法和氣體加壓法對(duì)成骨細(xì)胞加載張應(yīng)力和壓應(yīng)力，觀(guān)察不同性質(zhì)、不同強(qiáng)度、不同作用時(shí)間的應(yīng)力刺激對(duì)成骨細(xì)胞增殖活性和堿性磷酸酶表達(dá)的影響，并對(duì)成骨細(xì)胞對(duì)于不同性質(zhì)的力學(xué)信號(hào)的應(yīng)答效應(yīng)進(jìn)行初步的比較。研究表明1在細(xì)胞受力承載的生理范圍內(nèi)，靜張應(yīng)力刺激可以促進(jìn)成骨樣細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶表達(dá)。施加靜水壓5KPA的實(shí)驗(yàn)條件下，張應(yīng)力刺激最有利于細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶的表達(dá)。2在細(xì)胞受力承載的生理范圍內(nèi)，靜壓力刺激能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶表達(dá)。50KPA壓力的刺激條件下細(xì)胞增殖最為明顯，70KPA壓力作用下刺激72H后，堿性磷酸酶的表達(dá)達(dá)到峰值。3相同作用時(shí)間，不同性質(zhì)張力、壓力的應(yīng)力刺激可導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的不同，張應(yīng)力較之壓應(yīng)力更能促進(jìn)細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶的表達(dá)。

簡(jiǎn)介：骨齡評(píng)價(jià)是通過(guò)對(duì)骨骼發(fā)育特征進(jìn)行識(shí)別以獲得對(duì)人體發(fā)育程度的定量性評(píng)價(jià)，利用X光攝片技術(shù)對(duì)青少年兒童的手腕骨骼進(jìn)行分析研究，從而判定其骨骼的成熟度骨齡。骨齡評(píng)價(jià)方法已廣泛應(yīng)用于青少年發(fā)育狀況評(píng)估和預(yù)測(cè)、疾病的早期發(fā)現(xiàn)與預(yù)防，體育界選才等領(lǐng)域。傳統(tǒng)的骨齡評(píng)分是由專(zhuān)家根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)模板對(duì)待測(cè)X光片打分，分值的主觀(guān)性較強(qiáng)，不利于骨齡的客觀(guān)評(píng)價(jià)，而且由于要對(duì)多塊骨骼進(jìn)行評(píng)分，人工處理所需時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)評(píng)分人的專(zhuān)業(yè)知識(shí)要求較高，諸多因素決定了對(duì)骨齡評(píng)價(jià)自動(dòng)化的迫切需要。運(yùn)用圖像處理、圖像識(shí)別以及計(jì)算機(jī)視覺(jué)等學(xué)科知識(shí)，開(kāi)發(fā)出計(jì)算機(jī)輔助骨齡自動(dòng)評(píng)價(jià)系統(tǒng)有很大實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。對(duì)X光片圖像進(jìn)行有效的特征提取和分類(lèi)識(shí)別在手腕骨骨齡自動(dòng)評(píng)價(jià)系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)研究中占有重要的地位，鑒于手腕骨待識(shí)別關(guān)節(jié)中各指骨與掌骨圖像的空間分布的相似性，本文的研究工作主要圍繞分割得到的中指骨圖像展開(kāi)研究，提出了基于KL變換的特征提取和基于SVM的分類(lèi)識(shí)別方法。特征提取與特征選擇是圖像識(shí)別系統(tǒng)中的關(guān)鍵技術(shù)之一，本文根據(jù)特征提取和特征選擇的原則，結(jié)合X光圖像的特點(diǎn)，分析手腕骨圖像的空間分布特點(diǎn)，提出了基于KL變換的特征提取算法和特征選擇方法，并對(duì)算法的可行性作了深入的理論分析和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。該方法通過(guò)對(duì)由中指骨組成的訓(xùn)練樣本集的產(chǎn)生矩陣做KL變換，用一個(gè)低維子空間來(lái)描述中指骨X光圖像，每幅圖像向其作投影，并獲得一組坐標(biāo)系數(shù)，這組系數(shù)表明了該圖像在降維子空間中的位置，能較好地表征該幅圖像的特征信息。本文結(jié)合模式識(shí)別中的分類(lèi)原理，比較各種可用于圖像識(shí)別的分類(lèi)決策方法，提出了基于SVM算法的分類(lèi)方法對(duì)提取出的特征信息進(jìn)行判定和骨齡評(píng)分。在現(xiàn)有樣本數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，驗(yàn)證了本文提出的手腕骨中指骨圖像的特征提取和分類(lèi)算法的可行性和正確性。本文的研究工作在應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助骨齡識(shí)別的研究領(lǐng)域作了有益的理論探討和方法研究，對(duì)研究和解決其它醫(yī)學(xué)圖像的計(jì)算機(jī)輔助分析問(wèn)題具有一定的借鑒作用。

簡(jiǎn)介：目的現(xiàn)有的骨修復(fù)材料所具有的各種各樣的缺陷使其在臨床應(yīng)用上受到很大的限制，這迫使人們研制新型的骨修復(fù)材料。硫酸鈣是一種具有較好生物降解性和相容性的骨修復(fù)材料；鍶元素具有促進(jìn)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)和抑制破骨細(xì)胞形成的作用。本研究將鍶元素與醫(yī)用硫酸鈣復(fù)合以增加材料的生物活性，并初步驗(yàn)證摻鍶硫酸鈣復(fù)合骨修復(fù)材料的理化性能、生物活性、生物相容性和對(duì)成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的作用，旨在為后續(xù)的進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)。方法用Α半水硫酸鈣ΑCSH和氯化鍶SRCL采用混合法制得摻鍶硫酸鈣骨修復(fù)材料，制備6組不同摻鍶量的材料，其鍶元素摩爾含量分別為0％、01％、03％、05％、1％和2％。分別將材料加工成5MM12MM的柱狀和15MM2MM的盤(pán)狀。掃描電鏡觀(guān)察材料的晶體形態(tài)，測(cè)試各組柱狀材料的抗壓強(qiáng)度。用模擬體液SBF作為降解液來(lái)對(duì)材料進(jìn)行降解實(shí)驗(yàn)，并觀(guān)測(cè)降解過(guò)程中的若干指標(biāo)1PH值變化；2重量變化；3抗壓強(qiáng)度變化；4降解液中鍶離子濃度變化。用各組材料浸提液來(lái)進(jìn)行ROS1728成骨樣細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，同時(shí)設(shè)立正常細(xì)胞組和加入了苯酚的陽(yáng)性對(duì)照組，并用MTT法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。對(duì)正常對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行細(xì)胞堿性磷酸酶活性測(cè)定和堿性磷酸酶組織化學(xué)染色來(lái)反應(yīng)材料對(duì)成骨細(xì)胞功能的影響。將ROS1728成骨樣細(xì)胞接種到各組盤(pán)狀摻鍶硫酸鈣骨修復(fù)材料上進(jìn)行共培養(yǎng)，并設(shè)立正常對(duì)照組，分別在培養(yǎng)后2天和4天對(duì)材料上細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在第4天通過(guò)掃描電鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。結(jié)果制得的各組摻鍶硫酸鈣材料具有均質(zhì)、易于加工的特點(diǎn)，氯化鍶的摻入不會(huì)影響硫酸鈣材料的大體外觀(guān)，但會(huì)影響到Α半水硫酸鈣的晶體形態(tài)，當(dāng)摻鍶量達(dá)到2％時(shí)，晶體形態(tài)較不均勻，晶體排列比較稀疏。沒(méi)有摻鍶的硫酸鈣材料的初始抗壓強(qiáng)度為1585±158MPA，隨著摻鍶量的增加，抗壓強(qiáng)度有逐漸下降的趨勢(shì)。當(dāng)摻鍶量為2％時(shí)，材料初始抗壓強(qiáng)度下降到866±140MPA。隨著不同摻鍶量的6組材料在模擬體液SBF中降解時(shí)間的增加，其溶液PH值均有一定的下降，不同摻鍶量的材料在降解過(guò)程中PH值的變化均較穩(wěn)定，降解12周后PH值下降均不到02個(gè)單位。不同摻鍶量的材料在SBF中降解均會(huì)導(dǎo)致失重率的增加。前4周各組材料的重量變化相對(duì)較小，而4周過(guò)后失重率有增加的趨勢(shì)。與不摻鍶的硫酸鈣材料比較，摻鍶量為01％和03％的硫酸鈣材料的失重率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異P0988，P0158，隨著摻鍶量的進(jìn)一步增加，材料的失重率變化有增加的趨勢(shì)P005。結(jié)論通過(guò)對(duì)摻鍶硫酸鈣理化性能、生物相容性及其對(duì)成骨細(xì)胞作用的研究結(jié)果表明1用Α半水硫酸鈣ΑCSH和氯化鍶SRCL混合固化制得的均質(zhì)新型骨修復(fù)材料摻鍶硫酸鈣，具有一定力學(xué)強(qiáng)度的，能為植骨區(qū)域提供一定的力學(xué)支撐能力，并承擔(dān)部分應(yīng)力傳導(dǎo)。2材料體外降解性能穩(wěn)定，當(dāng)摻鍶量在05％以?xún)?nèi)時(shí)，摻鍶硫酸鈣骨修復(fù)材料在體外模擬體液SBF中降解前4周內(nèi)能保持重量和力學(xué)強(qiáng)度相對(duì)穩(wěn)定，并在4周后開(kāi)始大量釋放具有成骨活性的鍶元素，有利于植入體內(nèi)后刺激成骨。3摻鍶硫酸鈣骨修復(fù)材料無(wú)細(xì)胞毒性，并對(duì)細(xì)胞增殖和成骨細(xì)胞功能有一定的促進(jìn)作用。4材料與細(xì)胞有較好的相容性，成骨細(xì)胞能在材料上正常的貼附生長(zhǎng)。5摻鍶硫酸鈣可在骨缺損部位的修復(fù)過(guò)程中通過(guò)局部釋放能促進(jìn)成骨的元素鍶，以加速骨形成、促進(jìn)骨愈合。

簡(jiǎn)介：目的觀(guān)察、評(píng)價(jià)復(fù)骨健步片治療腰椎骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效及安全性，并初步探討其作用機(jī)制。方法將60例辯證為肝腎不足，瘀血阻滯型的腰椎骨關(guān)節(jié)炎患者隨機(jī)分為兩組進(jìn)行臨床試驗(yàn)。治療組30例口服復(fù)骨健步片，對(duì)照組30例則口服壯骨關(guān)節(jié)丸，4周為一療程。在治療一個(gè)療程后隨訪(fǎng)時(shí)統(tǒng)計(jì)兩組患者各病狀計(jì)分及其病狀總積分變化情況，評(píng)價(jià)其臨床療效及安全性。結(jié)果在一個(gè)療程后降低腰椎骨關(guān)節(jié)炎患者各病狀計(jì)分及其病狀總積分方面，治療組患者前后比較有顯著性差異（P結(jié)論復(fù)骨健步片和壯骨關(guān)節(jié)丸均能有效改善腰椎骨關(guān)節(jié)炎患者主、次要癥狀，兩藥療效相當(dāng)。但復(fù)骨健步片4周內(nèi)“關(guān)節(jié)活動(dòng)障礙”癥狀計(jì)分下降幅度上優(yōu)于壯骨關(guān)節(jié)丸，且藥物安全性好，無(wú)明顯毒副作用值得臨床推廣。

簡(jiǎn)介：傳統(tǒng)法與超聲骨刀法拔除下頜低位阻生智齒的臨床效果比較研究生劉嘯指導(dǎo)教師尼加提吐?tīng)栠d副教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)口腔醫(yī)學(xué)研究方向口腔種植修復(fù)2015年3月論文獨(dú)創(chuàng)性說(shuō)明本人申明所呈交的學(xué)位論文是在我個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。言篇姜薹二蘭◆蓁季簍I歷}乒F次L’仁S’關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解學(xué)校關(guān)于保留、使用學(xué)位論文的各項(xiàng)規(guī)定，’適I圣選擇。T同意／不同意，，以下事項(xiàng)1．學(xué)校有權(quán)保留本論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文；2。學(xué)校有權(quán)將本人的學(xué)位論文提交至清華大學(xué)“中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤(pán)版、電子雜志社”用于出版和編入CNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù)或其他同類(lèi)數(shù)據(jù)庫(kù)，傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。學(xué)位論文作導(dǎo)師簽名簽字日期塑墮二蘭，’簽字曰期逸￡￡二笪二F

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文雞蛋殼復(fù)合抗菌支架材料的制備及骨缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究THEPREPARATIONOFANTIBACTERIALMODIFIEDEGGSHELLASSCAFFOLDSMATERIALANDEXPERIMENTALSTUDYONREPAIRINGSKULLDEFECTSINRABBIT院系復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院專(zhuān)業(yè)口腔醫(yī)學(xué)姓名張珂導(dǎo)師俞立英教授導(dǎo)師組成員蔡意達(dá)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要雞蛋殼復(fù)合抗菌支架材料的制備及骨缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究目的本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀(guān)察雞蛋殼復(fù)合抗菌支架材料對(duì)兔顱骨臨界性骨缺損的修復(fù)情況，初步研究其修復(fù)骨缺損的能力，探討雞蛋殼復(fù)合抗菌支架材料應(yīng)用于骨原位組織工程中的可行性。方法1、雞蛋殼經(jīng)清潔處理后，在研缽內(nèi)研磨成粉，篩子過(guò)濾300500NM。使用微波爐法對(duì)處理過(guò)的雞蛋殼進(jìn)行表面改良和鋅涂層。對(duì)表面改良和鋅涂層的雞蛋殼分別進(jìn)行掃描電鏡SEM、能量散色光譜儀EDXA、X射線(xiàn)衍射儀XRD及傅里葉紅外FTIR等理化性能的檢測(cè)。2、動(dòng)物缺損模型的建立選用30只雄性新西蘭大白兔，全麻下每只兔顱骨制備5個(gè)6MM直徑硬腦膜全厚層缺損區(qū)。分為A組（空白對(duì)照組，CONTROLB組雞蛋殼粉末組，ES組）；C組（微波爐法60MIN表面改良的雞蛋殼粉末組，MES組）；D組（鋅涂層雞蛋殼粉末組，ZNES組）；E組（BIOOSS組）。將造模后的家兔隨機(jī)分成三組，術(shù)后4、8、12周分批處死一組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，處死動(dòng)物前用鈣黃綠素和四環(huán)素進(jìn)行熒光標(biāo)記。3、骨計(jì)量學(xué)標(biāo)本的制作用低速鋸分離取下整個(gè)顱骨，沿缺損邊緣外圍處切下帶有材料的骨組織。經(jīng)過(guò)固定、脫水、滲透、聚合后使用硬組織切片機(jī)沿顱骨缺損模型縱向切成8MM和20切片，8MM薄片GOLDNERTRICHROME三色法染色、20咖厚片在熒光顯微鏡下直接觀(guān)察骨組織的細(xì)微病理改變，用圖像分析軟件進(jìn)行參數(shù)測(cè)量、計(jì)算和分析。4、所得數(shù)據(jù)采用“均值土標(biāo)準(zhǔn)差”（IS表示，應(yīng)用SPSS160軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果1、蛋殼本身具有類(lèi)似骨組織的孔隙結(jié)構(gòu)，微波加熱技術(shù)可以合成碳磷灰石（CHA以及復(fù)合了鋅離子的雞蛋殼復(fù)合抗菌支架材料。1

簡(jiǎn)介：近年來(lái)2型糖尿病的發(fā)病呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，目前估算到2030年全球糖尿病患病人數(shù)將超過(guò)35億。由糖尿病引起的死亡人數(shù)僅次于心腦血管疾病、惡性腫瘤，被稱(chēng)為“第三殺手”，我國(guó)現(xiàn)有糖尿病人數(shù)目前居世界第二位。流行病學(xué)資料表明，隨年齡增加2型糖尿病患病率也明顯增加，是影響中老年人健康的主要疾病之一。與糖尿病相關(guān)的慢性并發(fā)癥如心腦血管疾病、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變以及糖尿病神經(jīng)病變是致死、致殘的主要原因，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。胰島素抵抗（INSULINRESISTANSE，IR）是肥胖和2型糖尿病早期和重要的發(fā)病機(jī)制，其定義為由于肝臟、脂肪和肌肉等靶組織對(duì)胰島素生物效應(yīng)的反應(yīng)性降低。導(dǎo)致胰島素抵抗的具體機(jī)制尚不十分清楚。骨骼肌是機(jī)體葡萄糖、脂質(zhì)攝取和利用的器官，是胰島素發(fā)揮作用的重要組織。研究發(fā)現(xiàn)高脂引起骨骼肌線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白PGC1Α，MFN2、NRF1表達(dá)下降，同時(shí)伴有胰島素信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)異常及胰島素抵抗，說(shuō)明骨骼肌線(xiàn)粒體功能和胰島素抵抗關(guān)系密切，而且PGC1Α可能在調(diào)控線(xiàn)粒體功能和胰島素抵抗方面發(fā)揮重要作用。本課題通過(guò)高脂飲食喂養(yǎng)老年大鼠，造成胰島素抵抗模型，分析胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下和羅格列酮（ROSIGLITAZONE，RSG）干預(yù)后骨骼肌線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白PGC1Α，MFN2、NRF1的表達(dá)變化及相關(guān)關(guān)系，分析高脂飲食喂養(yǎng)老年大鼠線(xiàn)粒體功能和胰島素敏感性的變化。采用脂肪酸孵育C2C12肌細(xì)胞，了解不同類(lèi)型脂肪酸對(duì)骨骼肌PGC1Α表達(dá)的影響，尋找細(xì)胞水平研究PGC1Α作用機(jī)制的模型，并通過(guò)藥物和小干擾RNA（SMALLINTERFERENCERNA，SIRNA）技術(shù)調(diào)節(jié)肌細(xì)胞PGC1Α的表達(dá)，分析線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白和胰島素信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，探討PGC1Α在高脂、線(xiàn)粒體功能和胰島素抵抗中的作用機(jī)制及其上游調(diào)控因子，為研發(fā)防治胰島素抵抗和2型糖尿病的藥物提供新的作用靶點(diǎn)和理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下四部分第一部分高脂誘導(dǎo)老年胰島素抵抗大鼠骨骼肌線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白的表達(dá)目的測(cè)定高脂飲食喂養(yǎng)及羅格列酮干預(yù)老年大鼠的胰島素敏感性以及骨骼肌PGC1Α、MFN2和NRF1的表達(dá)變化，探討高脂與線(xiàn)粒體功能、IR的關(guān)系。方法2224月齡老年雄性WISTAR大鼠40只隨機(jī)分為2組老年對(duì)照（OC）組16只、老年高脂（OF）組24只，45月齡青年大鼠16只，為青年對(duì)照組（YC）。對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料，熱量組成碳水化合物655％，脂肪103％，蛋白質(zhì)242％，總熱量為348KCAL100G；OF組給予高脂飼料，其熱量組成碳水化合物201％，脂肪598％，蛋白質(zhì)201％，總熱量為501KCAL100G；給予老年兩組大鼠每日等熱量投喂飼料，喂養(yǎng)八周。于喂養(yǎng)第四周末心臟采血測(cè)空腹血糖（FBG），胰島素（INS），血清甘油三酯（TG），血清總膽固醇（TC），游離脂肪酸（FFA）和骨骼肌甘油三酯（TGM）的含量。喂養(yǎng)四周末，每組均隨機(jī)選8只行高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)判斷胰島素抵抗情況，判斷造模成功后高脂組隨機(jī)分為2組高脂組和羅格列酮干預(yù)（）組，每組8只，除繼續(xù)給予高脂飼料外組給予羅格列酮3MGKG灌胃，高脂組給予等量生理鹽水灌胃，繼續(xù)喂養(yǎng)四周。實(shí)驗(yàn)第八周末，行高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)評(píng)價(jià)各組胰島素抵抗情況，實(shí)驗(yàn)前抽取血樣用于測(cè)定血清各項(xiàng)指標(biāo)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，留取股四頭肌標(biāo)本，70℃保存。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）及WESTERNBLOT方法檢測(cè)骨骼肌PGC1Α、MFN2以及NRF1的表達(dá)。結(jié)論1高脂飲食喂養(yǎng)老年大鼠，血FFA升高，骨骼肌甘油三酯升高，葡萄糖輸注率下降，成功造成胰島素抵抗模型。2高脂飲食喂養(yǎng)老年大鼠骨骼肌PGC1Α以及線(xiàn)粒體蛋白MFN2和NRF1表達(dá)下降。3高脂飲食喂養(yǎng)的老年大鼠，其骨骼肌PGC1Α與MFN2、NRF1之間存在正相關(guān)關(guān)系。4羅格列酮干預(yù)后，大鼠胰島素敏感性增強(qiáng)，骨骼肌PGC1Α、MFN2和NRF1表達(dá)升高，驗(yàn)證了PGC1Α與線(xiàn)粒體功能、IR的密切關(guān)系。第二部分不同脂肪酸對(duì)C2C12肌細(xì)胞PGC1Α表達(dá)的影響目的采用不同類(lèi)型長(zhǎng)鏈脂肪酸分別培養(yǎng)小鼠C2C12肌細(xì)胞，測(cè)定其PGC1ΑMRNA和蛋白的表達(dá)，在細(xì)胞水平探討脂肪酸類(lèi)型對(duì)骨骼肌PGC1Α的影響，為進(jìn)一步研究PGC1Α與高脂、線(xiàn)粒體功能、胰島素抵抗的關(guān)系打基礎(chǔ)。方法用含10％新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)C2C12肌細(xì)胞，接種于6孔板中，培養(yǎng)24H后換為無(wú)血清培養(yǎng)基，分別加入軟脂酸組（C160）、硬脂酸組（C180）、棕櫚酸組（C161）、油酸組（C181）以及亞油酸組（C182）孵育，均設(shè)置025MM、05MM和075MM三個(gè)濃度梯度，繼續(xù)培養(yǎng)24H。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及WESTERNBLOT方法檢測(cè)細(xì)胞中PGC1Α的表達(dá)。結(jié)論1軟脂酸孵育的C2C12肌細(xì)胞PGC1Α的MRNA和蛋白表達(dá)下降，并且有濃度和時(shí)間依賴(lài)性。2單不飽和或多不飽和脂肪酸培養(yǎng)的C2C12肌細(xì)胞對(duì)PGC1Α表達(dá)無(wú)明顯影響。第三部分C2C12肌細(xì)胞PGC1Α表達(dá)對(duì)線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白和胰島素信號(hào)通路蛋白的影響目的通過(guò)二甲雙胍、羅格列酮和AMPK激動(dòng)劑（AICAR）孵育C2C12細(xì)胞，篩選上調(diào)PGC1Α效率最高的藥物，分別采用藥物上調(diào)和SIRNA抑制PGC1Α的表達(dá)，分析PGC1Α表達(dá)變化對(duì)粒體功能相關(guān)蛋白和胰島素信號(hào)通路蛋白的影響，探討PGC1Α在線(xiàn)粒體功能紊亂、IR中的作用。方法細(xì)胞培養(yǎng)與傳代同第二部分。C2C12細(xì)胞分別以2MMOLL二甲雙胍、2MMOLL羅格列酮及10ΜMMOLLAMPK激動(dòng)劑（AICAR）孵育30MIN，然后加入05MM的C160軟脂酸孵育24H，收取各組細(xì)胞并測(cè)定PGC1Α的表達(dá)。通過(guò)上述方法篩選出上調(diào)PGC1Α效率最高的藥物，采用此藥物上調(diào)PGC1?。ǚ謱?duì)照組、軟脂酸組和藥物干預(yù)組）測(cè)定PGC1Α、MFN2、NRF1、IRS1以及GLUT4的蛋白表達(dá)。將C2C12細(xì)胞轉(zhuǎn)染PGC1Α的特異性SIRNA（PGC1ΑSIRNA組）或無(wú)關(guān)序列對(duì)照SIRNA（NSSIRNA組）6小時(shí)后以10ΜMMOLLAICAR孵育細(xì)胞48H，并設(shè)陰性對(duì)照組、AICAR組做為比較，分別測(cè)定PGC1Α、MFN2、NRF1、IRS1以及GLUT4的蛋白表達(dá)。結(jié)論1二甲雙胍、羅格列酮以及AICAR干預(yù)均可以使軟脂酸孵育的C2C12細(xì)胞PGC1Α表達(dá)上調(diào)，而AICAR的上調(diào)作用最明顯，二甲雙胍、羅格列酮以及AICAR可能逆轉(zhuǎn)了軟脂酸對(duì)C2C12的作用。2藥物上調(diào)或SIRNA下調(diào)C2C12細(xì)胞PGC1Α的表達(dá)同時(shí)伴有線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白以及胰島素信號(hào)通路蛋白的變化，表明PGC1Α表達(dá)下降與線(xiàn)粒體功能異常及IR密切相關(guān)。3高濃度軟脂酸誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體功能下降由PGC1Α介導(dǎo)。第四部分MAPKS信號(hào)通路對(duì)C2C12肌細(xì)胞PGC1Α表達(dá)的調(diào)控作用目的測(cè)定軟脂酸培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞ERK，P38MAPK（P38）和JNK的表達(dá)水平，并用P38MAPK抑制劑（SB203580）干預(yù)軟脂酸培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞，測(cè)定PGC1Α的表達(dá)變化，揭示MAPKS信號(hào)通路與PGC1Α表達(dá)的關(guān)系，尋找軟脂酸誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞PGC1Α表達(dá)變化的上游調(diào)節(jié)通路。結(jié)果1軟脂酸培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞ERK和JNK的表達(dá)ERK和PERK以及JNK和PJNK的表達(dá)在1H、6H、12H以及24H較OH無(wú)明顯變化，其差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。2軟脂酸培養(yǎng)的肌細(xì)胞P38MAPK的表達(dá)P38MAPK的表達(dá)在1H、6H、12H以及24H較OH無(wú)明顯變化，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。PP38MAPK的表達(dá)在1H、6H、12H以及24H逐漸升高，組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論1在軟脂酸培養(yǎng)的不同時(shí)間（012H）的C2C12細(xì)胞的P38MAPK表達(dá)無(wú)變化，而PP38MAPK表達(dá)逐漸升高；2在軟脂酸培養(yǎng)的不同時(shí)間（012H）的C2C12細(xì)胞ERK、PERK以及JNK、PJNK表達(dá)無(wú)明顯變化；3用P38MAPK抑制劑干預(yù)軟脂酸培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞，PGC1Α表達(dá)較加入抑制劑前明顯升高，表明軟脂酸誘導(dǎo)的的PGC1Α表達(dá)下降可能由P38MAPK調(diào)控。

簡(jiǎn)介：目的觀(guān)察大孔明膠可降解微球CUTISPHERG在微重力旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)條件下擴(kuò)增人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖及特性的影響；檢測(cè)增強(qiáng)酶解法提取的豬皮質(zhì)骨膠原的生物相容性，制備其凝膠液并與細(xì)胞一微球復(fù)合構(gòu)建工程組織，成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后觀(guān)察該工程組織的成骨效果。方法1、采用自建的“增強(qiáng)酶解技術(shù)”從豬骨中提取骨膠原，制備凝膠液并凍干為膠原膜，與HMSCS共培養(yǎng)，觀(guān)察細(xì)胞在骨膠原膜中的生長(zhǎng)情況；植入兔體內(nèi)，觀(guān)察組織相容性及體內(nèi)降解情況；利用膠原涂層ΒTCP支架，觀(guān)察其對(duì)細(xì)胞上架及上架細(xì)胞的影響。2、體外分離HMSCS，擴(kuò)增至第2代后分為兩組。實(shí)驗(yàn)組收集1107個(gè)細(xì)胞與預(yù)處理后的025GCULTISPHER。G均勻混合后加入容積為50ML的高截面縱橫比容器內(nèi)，加入培養(yǎng)基及血清，在旋轉(zhuǎn)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)上進(jìn)行體外動(dòng)態(tài)培養(yǎng)。對(duì)照組則按檢測(cè)需要的比例，繼續(xù)靜止培養(yǎng)。不同時(shí)相點(diǎn)取材行甲基紫、MTT染色或固定后切片HE染色，觀(guān)察細(xì)胞在微球的分布情況；于培養(yǎng)后1、2、3周取樣，行掃描電鏡觀(guān)察；連續(xù)2周，每天從兩種方法培養(yǎng)的細(xì)胞中取樣行細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT檢測(cè)，觀(guān)察細(xì)胞的增殖情況；在培養(yǎng)第5D和第7D分別從兩組細(xì)胞中取樣，行細(xì)胞周期和細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD29檢測(cè)，判定RCCS培養(yǎng)方式對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞性質(zhì)有無(wú)影響。3、將擴(kuò)增后的細(xì)胞微球復(fù)合物按細(xì)胞濃度1105ML與冰浴狀態(tài)下的膠原凝膠液均勻混合，中性、37℃條件下凝膠液固化，完成組織構(gòu)建，同時(shí)制備單純的細(xì)胞凝膠復(fù)合物作為對(duì)照，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)觀(guān)察兩種組織外觀(guān)及質(zhì)地變化。4、利用上述凝膠固化法制備組織工程骨作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)以DBM為支架，常規(guī)靜止接種法構(gòu)建組織工程骨作為對(duì)照組，行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀(guān)察組織中細(xì)胞形態(tài)、分布情況，并在不同時(shí)相點(diǎn)取材，測(cè)定DNA含量、堿性磷酸酶活性ALP，定量評(píng)定HMSCS增殖、成骨分化效果。結(jié)果1、膠原膜細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)，無(wú)明顯細(xì)胞毒性表現(xiàn)，HMSCS增殖迅速，生長(zhǎng)無(wú)受抑表現(xiàn)；2、兔體內(nèi)埋植試驗(yàn)，無(wú)明顯毒性反應(yīng)，膠原膜1周時(shí)即明顯降解，2周左右完全吸收；3、膠原作為ΒTCP涂層材料使接種效率由4695％提高到6060％，且上架的細(xì)胞活性恢復(fù)迅速，增殖較未處理組快P＜005；4、RCCS培養(yǎng)，接種24H，顯微鏡下觀(guān)察大部分細(xì)胞貼附于微球表面，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量增多，并分泌大量基質(zhì)，將多個(gè)微球裹在一起；甲基紫、MTT染色提示微球上細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)數(shù)量逐漸增多，固定后切片HE染色可見(jiàn)大量細(xì)胞貼附于微球表面，并有部分細(xì)胞長(zhǎng)入微球孔隙中；5、MTT檢測(cè)及細(xì)胞計(jì)數(shù)提示利用RCCS培養(yǎng)HMSCS對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期由靜止培養(yǎng)的3D延長(zhǎng)到6D，生長(zhǎng)高峰時(shí)收獲細(xì)胞總量由靜止培養(yǎng)獲得接種量的317倍增加為1075倍；6、細(xì)胞周期檢測(cè)兩種方法無(wú)明顯差別，大部細(xì)胞處在G1期；表面標(biāo)志檢測(cè)兩種方法培養(yǎng)的細(xì)胞均保持了良好的干細(xì)胞特性，CD34陰性表達(dá)，CD29陽(yáng)性表達(dá)；7、骨膠原凝膠液在中性、37℃環(huán)境中約10MIN固化，倒置顯微鏡觀(guān)察，構(gòu)建后2H細(xì)胞從微球表面突起，24H后在凝膠中伸展，呈三維立體生長(zhǎng)；8、大體觀(guān)察，剛構(gòu)建的組織塊呈半固態(tài)膠狀，柔軟，易裂，表面光滑，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，組織塊機(jī)械強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，表面開(kāi)始皺縮，14D時(shí)韌如橡膠；構(gòu)建24H后，復(fù)合物體積隨細(xì)胞增殖開(kāi)始縮小，14D天后對(duì)照組樣本直徑僅為原來(lái)的2733％，而試驗(yàn)組為8533％；9、兩組復(fù)合物內(nèi)DNA含量、ALP活性隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)增加顯著，且實(shí)驗(yàn)組增速快于對(duì)照組P＜005。結(jié)論1、增強(qiáng)酶解法提取的骨膠原具有良好的生物相容性和凝膠固化特性；2、CULTISPHERG結(jié)合RCCS是體外規(guī)?；瘮U(kuò)增HMSC的有效方法；3、細(xì)胞微球復(fù)合骨膠原凝膠構(gòu)建的組織，成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后具有一定的力學(xué)強(qiáng)度和成骨活性；4、細(xì)胞微球復(fù)合骨膠原凝膠固化構(gòu)建組織工程骨的方法具有避免消化收集種子細(xì)胞，接種效率高，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是一條較為理想的組織工程骨構(gòu)建技術(shù)路線(xiàn)。