簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多健骨康膠囊的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：該文回顧分析了1993年5月1999年9月期間我科采用關(guān)節(jié)鏡治療不同程度膝骨性關(guān)節(jié)炎75例、85膝術(shù)中根鏡檢情況行灌洗、清理或清理鉆孔術(shù)平均隨訪近5年效果滿意術(shù)后評(píng)分平均提高了357分平均癥狀改善率729﹪無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥對(duì)病例的研究分析發(fā)現(xiàn)病變?cè)街豖線與關(guān)艽鏡的變化符合率越高反之越低X線對(duì)病變部位的反映較準(zhǔn)確對(duì)病變程度的反映較差50T左右的中晚期病人合并有半月板的退變或撕裂對(duì)重度骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨下骨裸露部位進(jìn)行鉆孔并不能更好的提高患者的遠(yuǎn)期療效年齡大小、病程長(zhǎng)短及合并半月板病變似乎與療效無(wú)關(guān)有游離體提示療效較好

簡(jiǎn)介：UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文BMP9通過GTKS通路調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及論文題目其機(jī)制的初步研究作者姓名趙迎澤指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱馮濤教授重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文答辯年月2010年5月2010年5月重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明LILLLLIIITIITLIIIUIILY1731387本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名趙童衛(wèi)逄日期2囪竺生丕』學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬重慶醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期旅9，1。／‘2卅眇彥刎

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作為骨組織工程種子細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一部分骨水泥椎間盤滲漏動(dòng)物模型的建立【目的】建立一種可模擬人椎體成形術(shù)中骨水泥椎間盤滲漏動(dòng)物模型。【方法】8只成年健康雜種犬，每只犬L23～L56共4個(gè)椎間盤為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。4個(gè)椎間盤隨機(jī)分成A、B、C、D四組，A組用18G穿刺針穿刺椎間盤纖維環(huán)，不注入任何物質(zhì)；B組18G穿刺針穿刺椎間盤纖維環(huán)注入03MLPMMA；C組用16G穿刺針穿刺椎間盤纖維環(huán)，不注入任何物質(zhì)；D組16G穿刺針穿刺椎間盤注入03MLPMMA。分別于模型制作成功后6周、12周及24周行MR檢查，計(jì)算MR指數(shù)并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?！窘Y(jié)果】MR檢查發(fā)現(xiàn)，A組髓核、纖維環(huán)結(jié)構(gòu)完好，纖維環(huán)呈均勻低信號(hào)，T2加權(quán)像髓核呈均一高信號(hào)。C組T2加權(quán)像髓核信號(hào)不同程度降低且不均一，髓核中心可見不規(guī)則的斑點(diǎn)狀低信號(hào)，其相對(duì)高信號(hào)區(qū)面積減小。B、D組椎間隙相應(yīng)上下椎體面變毛糙。T2加權(quán)像髓核信號(hào)不同程度降低且不均一，髓核中心可見不規(guī)則的斑點(diǎn)狀更低信號(hào)，髓核形態(tài)不規(guī)則，其相對(duì)高信號(hào)區(qū)面積不同程度減小。分別在三個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)對(duì)4組的MR指數(shù)行方差分析，采用SCHEFFE法兩兩比較，模型制作后6周MR指數(shù)B組與D組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005），余差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。A組三個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)MR指數(shù)行方差檢驗(yàn)，兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。分別對(duì)B、C、D三組三個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)MR指數(shù)行方差檢驗(yàn)，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。【結(jié)論】18G穿刺針單次穿刺犬椎間盤纖維環(huán)不會(huì)導(dǎo)致其退變。用18G穿刺針經(jīng)皮穿刺犬椎間盤纖維環(huán)注射骨水泥可建立骨水泥椎間盤滲漏模型，具有創(chuàng)傷小、模型制作成功率高等優(yōu)點(diǎn)。此動(dòng)物模型適合于研究骨水泥椎間盤滲漏對(duì)椎間盤生理、生化及病理等影響的機(jī)制。第二部分骨水泥滲漏后椎間盤MR和組織學(xué)觀察【目的】了解骨水泥椎間盤滲漏后MRI和組織學(xué)改變，以及椎間盤退變程度與骨水泥種類、骨水泥滲漏量和滲漏后的時(shí)間是否有關(guān)?！痉椒ā窟x用20只成年家犬按模型制作后觀察時(shí)間隨機(jī)分為12周及24周兩組。每只犬L12～L56共5個(gè)椎間盤為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成A、B1、B2、C1、C2五組，A組為對(duì)照組，用18G穿刺針穿刺纖維環(huán)不注入任何物質(zhì)；B組注入聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）；C組注入磷酸鈣骨水泥（CPC）。B、C組按注入量的不同分兩個(gè)劑量組，B1、C1組注入量為01ML；B2、C2組注入量為03ML。模型制作后12周、24周行MR檢查，根據(jù)矢狀位T2加權(quán)像，計(jì)算出MR指數(shù)。行組織學(xué)檢查，對(duì)椎間盤退變程度評(píng)分并分析。行電鏡下觀察，了解超微結(jié)構(gòu)的變化。對(duì)照組模型制作后12周與24周的觀察指標(biāo)分別行T檢驗(yàn)。分別在兩時(shí)間組內(nèi)對(duì)骨水泥組及對(duì)照組的觀察指標(biāo)行方差分析，然后用DUNT法兩兩比較，了解骨水泥組與對(duì)照組的觀察指標(biāo)比較差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在骨水泥組內(nèi)用析因設(shè)計(jì)的方差分析，了解術(shù)后兩觀察時(shí)間之間、兩種骨水泥之間、兩種劑量之間MR指數(shù)、病理評(píng)分差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！窘Y(jié)果】對(duì)照組第12周、24周病理學(xué)檢查未見椎間盤退變。骨水泥組椎間盤MRI顯示T2加權(quán)像髓核信號(hào)不同程度降低且不均一，其相對(duì)高信號(hào)區(qū)面積減小，髓核形態(tài)不規(guī)則，纖維環(huán)與髓核境界不清。組織學(xué)檢查顯示髓核細(xì)胞數(shù)量不同程度減少，空泡變小。髓核的細(xì)胞外基質(zhì)不同程度壓縮，纖維環(huán)斷裂或扭轉(zhuǎn)。分別對(duì)12周與24周對(duì)照組MR指數(shù)、病理評(píng)分行T檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。12周及24周骨水泥組的MR指數(shù)、病理評(píng)分與對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。在骨水泥組內(nèi)行析因設(shè)計(jì)的方差分析，術(shù)后兩觀察時(shí)間之間、兩種骨水泥之間、兩種劑量之間的MR指數(shù)、病理評(píng)分差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。超微結(jié)構(gòu)觀察對(duì)照組類軟骨細(xì)胞細(xì)胞核膜完整，異染色質(zhì)比較豐富。脊索細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)常染色質(zhì)占優(yōu)勢(shì)，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器較多。膠原原纖維排列整齊、規(guī)則，粗細(xì)及方向一致。可見周期性橫紋，著色均勻。骨水泥組類軟骨細(xì)胞少見，常染色質(zhì)凝集成塊，整個(gè)細(xì)胞體積縮小。脊索細(xì)胞少見，細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)明顯增多，核膜欠完整。出現(xiàn)細(xì)胞核碎裂、溶解或固縮。膠原原纖維邊緣變粗糙模糊，橫紋消失，纖維散在分布且扭結(jié)?！窘Y(jié)論】PMMA、CPC椎間盤滲漏會(huì)導(dǎo)致椎間盤退變，前者所致椎間盤退變更嚴(yán)重。椎間盤退變程度與骨水泥滲漏入量有關(guān)，量越大致椎間盤退變程度越重。另外與骨水泥滲漏入椎間盤后的時(shí)間有關(guān)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，椎間盤退變程度加重。第三部分骨水泥滲漏對(duì)椎間盤生化改變的影響【目的】探討骨水泥椎間盤滲漏后椎間盤糖胺多糖含量變化，以及糖胺多糖含量的改變與骨水泥種類、骨水泥滲漏量和滲漏后的時(shí)間是否有關(guān)?！痉椒ā窟x用16只成年家犬按模型制作后觀察時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為12周及24周兩組。每只犬L12～L56共5個(gè)椎間盤為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成A、B1、B2、C1、C2五組，A組為對(duì)照組用18G穿刺針僅穿刺不注入任何物質(zhì)；B組注入聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）；C組注入磷酸鈣骨水泥（CPC）。B、C組按注入量的不同分兩個(gè)劑量組，B1、C1組注入量為01ML；B2、C2組注入量為03ML。模型制作后12周、24周測(cè)定纖維環(huán)及髓核糖胺多糖含量。對(duì)照組模型制作后12周與24周的觀察指標(biāo)分別行T檢驗(yàn)。分別在兩時(shí)間組內(nèi)對(duì)骨水泥組及對(duì)照組的糖胺多糖含量行方差分析，然后用行兩兩比較，了解骨水泥組與對(duì)照組的糖胺多糖含量比較差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在骨水泥組內(nèi)用析因設(shè)計(jì)的方差分析，了解術(shù)后兩觀察時(shí)間之間、兩種骨水泥之間、兩種劑量之間椎間盤糖胺多糖含量的差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！窘Y(jié)果】骨水泥組中，PMMA組纖維環(huán)及髓核的糖胺多糖含量較CPC組低，03ML組纖維環(huán)及髓核的糖胺多糖含量較01ML組低。對(duì)12周與24周對(duì)照組椎間盤糖胺多糖含量行T檢驗(yàn)，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。采用兩兩比較，12周及24周骨水泥組的椎間盤糖胺多糖含量與對(duì)照組差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。在骨水泥組內(nèi)行析因設(shè)計(jì)的方差分析，術(shù)后兩觀察時(shí)間之間、兩種骨水泥之間、兩種劑量之間椎間盤糖胺多糖含量差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。【結(jié)論】骨水泥椎間盤滲漏會(huì)導(dǎo)致椎間盤的糖胺多糖含量下降，蛋白多糖合成下降。椎間盤的糖胺多糖含量改變與骨水泥滲漏入椎間盤量有關(guān)，與骨水泥滲漏入椎間盤后時(shí)間有關(guān)，與骨水泥類型有關(guān)。第四部分骨水泥滲漏對(duì)椎間盤組織細(xì)胞凋亡及其調(diào)控蛋白表達(dá)的影響【目的】探討椎體成形術(shù)中骨水泥椎間盤滲漏后髓核細(xì)胞凋亡狀態(tài)及細(xì)胞凋亡調(diào)控基因BCL－2、BAX、FAS、FASL的表達(dá)?！痉椒ā窟x用8只成年雜種犬，每只犬L23～L45共3個(gè)椎間盤為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成對(duì)照組、PMMA、CPC三組。A組為對(duì)照組用18G穿刺針僅穿刺椎間盤不注入任何物質(zhì)；B組注入03MLPMMA；C組注入03MLCPC制成骨水泥椎間盤滲漏模型。模型制作24周后對(duì)3組髓核組織行TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡，并且用免疫組化方法檢測(cè)椎間盤中細(xì)胞的BCL－2、BAX、FAS、FASL蛋白表達(dá)。分別測(cè)定3組椎間盤組織中的陽(yáng)性細(xì)胞百分率、平均光密度值3組資料值分別用方差分析及SNK法統(tǒng)計(jì)分析?！窘Y(jié)果】髓核細(xì)胞TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞百分率及平均光密度值在對(duì)照組、CPC及PMMA組依次升高；BAX蛋白染色的髓核組織陽(yáng)性細(xì)胞百分率及平均光密度值在對(duì)照組、CPC及PMMA組中依次升高；BCL2蛋白染色的髓核組織陽(yáng)性細(xì)胞百分率及平均光密度值在對(duì)照組、CPC及PMMA組依次依次降低；FAS蛋白、FASL蛋白染色的髓核組織陽(yáng)性細(xì)胞百分率及平均光密度值在對(duì)照組、CPC及PMMA組依次升高。分別對(duì)3組TUNEL、BAX、BCL2、FAS和FASL染色陽(yáng)性細(xì)胞百分率、平均光密度值行方差分析及SNK法統(tǒng)計(jì)分析，每?jī)山M間的對(duì)應(yīng)觀察指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。【結(jié)論】PMMA、CPC椎間盤滲漏會(huì)導(dǎo)致髓核細(xì)胞凋亡，BAX、BCL2、FAS和FASL蛋白參與了椎間盤細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，但凋亡程度不同。

簡(jiǎn)介：青島大學(xué)碩士學(xué)位論文富血小板血漿和帶血管肌筋膜在組織工程骨血管化中的作用姓名陳立強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李寧毅尚偉20060513青島大學(xué)碩士學(xué)位論文3、各時(shí)間點(diǎn)A組、B組、C組在成骨的量、骨光密度、血管化程度均明顯優(yōu)于D組。【結(jié)論】L、通過密度梯度離心法分離犬MSCS，體外擴(kuò)增并向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，可以獲得足夠量的成骨細(xì)胞。MSCS是骨組織工程理想的種子細(xì)胞。2、DBM是一種較好的骨組織工程支架材料。3、PRP和帶血管肌筋膜均能促進(jìn)組織工程骨的形成和血管化，二者具有協(xié)同作用?！娟P(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；脫鈣骨基質(zhì)；富血小板血漿；帶血管肌筋膜；血管化；骨形成碩士研究生陳立強(qiáng)口腔頜面外科學(xué)指導(dǎo)教師李寧毅教授尚偉教授

簡(jiǎn)介：本文進(jìn)行了三個(gè)部分的研究進(jìn)一步探討了骨形成蛋白BONEMPHOGEICPROTEINS，BMPS的復(fù)性方法；構(gòu)建人骨形成蛋白4成熟肽二連體，并初步探討輻射損傷造血后，它在造血系統(tǒng)修復(fù)中所起的作用。第一部分重組人骨形成蛋白R(shí)HBMP復(fù)性與活性的探討。目前基因工程制備BMPS的表達(dá)系統(tǒng)分為原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的BMPS具有良好的生物活性，但表達(dá)量低，表達(dá)產(chǎn)物回收、純化困難、生產(chǎn)成本很高，這就使得BMPS的價(jià)格非常昂貴，難以在臨床廣泛使用。原核表達(dá)系統(tǒng)，特別是大腸桿菌系統(tǒng)，是經(jīng)典的表達(dá)系統(tǒng)，與真核表達(dá)系統(tǒng)相比，它具有表達(dá)效率高，容易操作，容易監(jiān)控，產(chǎn)物穩(wěn)定，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。但原核表達(dá)系統(tǒng)所表達(dá)的蛋白質(zhì)需要經(jīng)過正確復(fù)性后才能具有生物活性。探討了RHBMP2M的復(fù)性方法，采用了三種不同方案，并通過整體實(shí)驗(yàn)檢查了復(fù)性蛋白的誘骨活性。1PH48復(fù)性液中透析復(fù)性，復(fù)性后得到的RHBMP2M蛋白可溶性好，通過除菌微孔濾膜基本沒有吸附損失。所得復(fù)性蛋白液濃度較高48MGML，通常不必再濃縮就可以使用。直接將復(fù)性所得可溶性蛋白液注射入小鼠肌袋，不能誘導(dǎo)骨質(zhì)生成。蛋白液凍干后，溶解較慢。不加任何載體吸附，1MGRHBMP2M植入小鼠肌袋，三周誘導(dǎo)生成軟骨，四周成骨。表明其具有誘導(dǎo)異位成骨的活性，但誘骨活性不強(qiáng)。2PH65復(fù)性液中透析復(fù)性，復(fù)性后蛋白不可溶。不加任何載體吸附，1MGRHBMP2M植入小鼠肌袋，兩周誘導(dǎo)生成骨小梁，并有骨髓樣細(xì)胞出現(xiàn)。表明其誘骨活性很強(qiáng)。3PH90復(fù)性液中稀釋復(fù)性，復(fù)性后蛋白可溶。蛋白液濃度低＜200ΜGML，需濃縮處理，但超濾濃縮時(shí)蛋白損失嚴(yán)重，反映了所復(fù)性的RHBMP2M疏水性強(qiáng)、溶解度低的特點(diǎn)。蛋白液凍干后，成不溶性。不加任何載體吸附，1MGRHBMP2M植入小鼠肌袋，兩周誘導(dǎo)軟骨生成，三周出現(xiàn)骨小梁。表明其誘骨活性一般。上述3種復(fù)性方法差別很大，所得到的復(fù)性產(chǎn)物性質(zhì)和活性也很不相同，但可以看到復(fù)性后的不溶性RHBMP2M有強(qiáng)的誘導(dǎo)異位成骨活性，而可溶性RHBMP2M都沒有誘導(dǎo)異位成骨的活性。因而用于誘導(dǎo)成骨時(shí)，應(yīng)該使RHBMP2M成為不溶狀態(tài)；而以往的實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)要發(fā)揮其誘導(dǎo)造血活性時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用其可溶形式。第二部分重組人骨形成蛋白4成熟肽二連體RDHBMP4M的設(shè)計(jì)和制備。對(duì)BMP4成熟肽基因的原核表達(dá)及復(fù)性的研究已有報(bào)道，同BMP2一樣，大腸桿菌表達(dá)的RHBMP4M單體，需經(jīng)體外復(fù)性，以獲得RHBMP4M二聚體。二聚體是BMP的活性形式，其單體內(nèi)含有3對(duì)二硫鍵，而兩個(gè)單體間由一對(duì)二硫鍵連接，BMP的復(fù)性包括這7對(duì)二硫鍵形成及BMP分子的正確折疊。其中形成分子間二硫鍵的半胱氨酸位于單體分子的末端，形成二硫鍵使兩個(gè)單體首尾相連，形成二聚體。其中分子間二硫鍵的形成尤為重要，是BMP復(fù)性的關(guān)鍵所在，這就使得其復(fù)性過程變得更加復(fù)雜和困難。針對(duì)這一特點(diǎn)，設(shè)計(jì)用基因工程手段使大腸桿菌直接表達(dá)有類似二聚體結(jié)構(gòu)，稱之為基因重組骨形成蛋白4二連體RECOMBINANTHUMANBONEMPHOGEICPROTEIN4MATUREPEPTIDEDUPLEX，RDHBMP4M。構(gòu)建方案是利用PCR定點(diǎn)突變方法對(duì)編碼RHBMP4M肽鏈的CDNA進(jìn)行定點(diǎn)突變，突變掉形成單體間二硫鍵的半胱氨酸，使2個(gè)RHBMP4M間不以雙硫鍵SS，而是通過增加一段連接肽以肽鍵CONH將兩個(gè)單體直接首尾相連接，原核細(xì)胞表達(dá)后直接生成類似二聚體的結(jié)構(gòu)。連接肽大部分是由甘氨酸和絲氨酸組成，因?yàn)楦拾彼崴M成的肽鍵有對(duì)稱性的碳原子，可以任意轉(zhuǎn)動(dòng)，有利于蛋白分子的復(fù)性，但甘氨酸集團(tuán)為疏水性，可以埋入蛋白質(zhì)分子中，使其結(jié)構(gòu)受到影響，絲氨酸帶羥基為親水性氨基酸，與甘氨酸搭配可以增加連接肽的親水性從而使連接肽獨(dú)立于蛋白分子之外，不會(huì)影響蛋白的三維結(jié)構(gòu)。成功構(gòu)建PDH2RDHBMP4M表達(dá)載體，DNA序列實(shí)際測(cè)定結(jié)果與預(yù)期設(shè)計(jì)的完全一致。將PDH2RDHBMP4M轉(zhuǎn)入ECOLIDH5Α，成功構(gòu)建得穩(wěn)定傳代和表達(dá)的PDH2RDHBMP4MDH5Α工程菌株。將RDHBMP4MDH5Α工程菌株進(jìn)行高密度發(fā)酵、溫度誘導(dǎo)表達(dá)，測(cè)定發(fā)酵菌液OD600值為490，表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在，目的蛋白占細(xì)菌總蛋白量的29％；離心收集菌體，經(jīng)裂菌、超聲洗滌四次后，包涵體中目的蛋白的純度為65％；離子交換柱層析后得到純度為96％的RDHBMP4M。采用與RHBMP2M相同的復(fù)性方法，得到可溶性的RDHBMP4M。第三部分重組人骨形成蛋白4成熟肽二連體對(duì)輻射損傷小鼠造血系統(tǒng)修復(fù)的作用。造血器官是輻射敏感組織，電離輻射主要損傷有增殖能力的造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞和幼稚血細(xì)胞，使造血細(xì)胞直接致死或誘導(dǎo)凋亡，從而導(dǎo)致造血細(xì)胞的增殖和更生障礙。CD34是造血細(xì)胞的表面標(biāo)志，CD34的百分比能夠反映骨髓造血系統(tǒng)的狀況。多種造血因子能增加CD34細(xì)胞的數(shù)量，提高骨髓的造血功能。我們以前的研究已經(jīng)報(bào)道致死劑量照射的小鼠，用可溶性RHBMP2M治療，能促進(jìn)造血細(xì)胞的增殖和造血系統(tǒng)的恢復(fù)，顯著提高極重度急性造血型放射病小鼠的存活率。BMP4作為造血因子，對(duì)胚胎造血系統(tǒng)的發(fā)育有重要作用，能夠促進(jìn)干細(xì)胞的增殖分化，使骨髓保持旺盛的增殖能力。但BMP4對(duì)損傷的造血系統(tǒng)是否有修復(fù)作用，目前尚無(wú)報(bào)道。由本研究組首次構(gòu)建具有與RHBMP4M二聚體類似的結(jié)構(gòu)的RDHBMP4M，是否具有活性，也必需通過實(shí)驗(yàn)觀察。實(shí)驗(yàn)觀察了RDHBMP4M對(duì)輻射致骨髓損傷小鼠造血系統(tǒng)功能修復(fù)的作用。70GY60COΓ射線照射，造成小鼠急性重度造血型放射病。1從D1起，治療組腹腔注射RDHBMP4M05MG10ML只，照射對(duì)照組注射生理鹽水10ML只，連續(xù)注射6天。分別于第1、3、5、7、9天檢測(cè)外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)、CD34細(xì)胞百分率；第9天進(jìn)行CFUS計(jì)數(shù)；連續(xù)飼養(yǎng)30天觀察小鼠存活率。正常小鼠白細(xì)胞數(shù)為730±023109L1，60COΓ照射后迅速減少，第5天降到最低點(diǎn)，對(duì)照組為118±023109L1，治療組為127±022109L1，均明顯低于正常水平。治療后，從第7天開始，外周血白細(xì)胞數(shù)逐漸增加，并顯著高于對(duì)照組。第7天，治療組為241±024109L1，相比對(duì)照組135±029109L1，差異有顯著性P＜005，N6；第9天，治療組為38±023109L1，相比對(duì)照組193±020109L1，差異有顯著性P＜005，N6。2正常小鼠單個(gè)核細(xì)胞數(shù)為1458±132106L1，60COΓ照射后迅速減少，第1天為251±060106L1，明顯低于正常水平。治療后，單個(gè)核細(xì)胞逐漸增加，從第7天開始顯著高于對(duì)照組。第7天治療組為531±034106L1，相比對(duì)照組401±024106L1，差異有顯著性P＜005，N6；第9天治療組為674±036106L1，相比對(duì)照組442±026106L1，差異有顯著性P＜005，N6。3正常小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞中CD34細(xì)胞百分率為712±025％，60COΓ照射后迅速降低，第1天為131±022％，明顯低于正常水平。治療后，CD34細(xì)胞百分率逐漸增加，從第7天開始顯著高于對(duì)照組。第7天，治療組為321±023％，相比對(duì)照組230±021％，差異有顯著性P＜005，N6；D9，治療組為397±031％，相比對(duì)照組253±028％，差異有顯著性P＜005，N6。4第9天處死小鼠，將脾臟固定染色并記數(shù)，治療組CFUS數(shù)為405±38，相比照射對(duì)照組1417±18，差異有顯著性P＜001，N6。5照射后30天治療組存活率為40％，對(duì)照組為15％，差異有顯著性P＜005，N20。60COΓ射線照射后，經(jīng)RDHBMP4M治療，促進(jìn)了輻射損傷小鼠造血系統(tǒng)的恢復(fù)，提高了動(dòng)物的存活率。60COΓ射線照射造成的小鼠急性重度造血型放射病。經(jīng)RDHBMP4M治療后，能夠增加白細(xì)胞和骨髓單個(gè)核細(xì)胞的數(shù)量，提高骨髓單個(gè)核細(xì)胞中CD34細(xì)胞的比例，促進(jìn)了干細(xì)胞的增殖，加快骨髓造血系統(tǒng)的重建，從而提高了輻射損傷小鼠的存活率。實(shí)驗(yàn)表明，RDHBMP4M具有活性，并對(duì)損傷造血系統(tǒng)有修復(fù)有明顯的促進(jìn)作用。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)一U13C論文編號(hào)一碩士學(xué)位論文MASTERTHESIS不同加力高度對(duì)伴有牙槽骨喪失的上頜中切牙的應(yīng)力分布研究閻振梅大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者及指導(dǎo)教師完全了桶大連醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意大連醫(yī)科大學(xué)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名簽字日期

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文下頜升支矢狀劈開截骨術(shù)后的臨床回顧性研究姓名敖建華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（頜面外科）指導(dǎo)教師劉彥普20040401第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略語(yǔ)表英文全稱SAGITTALSPLITRAIDUSOSTEOTOMYOBSTRUCTIVESLEEPAPNEASYNDROMEINTRAORALVERTICALSPLITRALNUSOSTEOTOMYRIGIDINTERNALFIXATIONWIREINTERNALFIXATIONNASOPHARYAGEALAIRWAYSPACE，HYPOPHARYNGEALAIRWAYSPACE，POSTERIORAIRWAYSPACESUBNASALEUPPERLIPUPPERINCISORCOLUMELLASELLANASIONSELLANASIONLINELOWERLIPLOWERINCISORPOGONIONOFSOFTTISSUEMENTONOFSOFTTISSUESUPRAMENTALL中文全稱升支矢狀劈開截骨術(shù)阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征升支垂直截骨術(shù)堅(jiān)強(qiáng)內(nèi)固定鋼絲結(jié)扎固定鼻咽腔咽下腔后氣道間隙鼻下點(diǎn)上唇突點(diǎn)上中切牙點(diǎn)鼻小柱點(diǎn)蝶鞍點(diǎn)鼻根點(diǎn)前顱底平面下唇突點(diǎn)下中切牙點(diǎn)軟組織頦前點(diǎn)軟組織頦下點(diǎn)下齒槽座點(diǎn)繃一姒眥心W|塞|耋I耋蚰UU缸SN蝌UN瞪№B

簡(jiǎn)介：對(duì)于人工手臂假肢的研究，無(wú)論是國(guó)內(nèi)還是國(guó)外都已經(jīng)有了數(shù)百年的歷史了。過去研制和生產(chǎn)的人工手臂，由于受技術(shù)條件的限制，性能欠佳，截肢者裝上這類人工手臂后，動(dòng)作極不自然，即使進(jìn)行簡(jiǎn)單的上肢運(yùn)動(dòng)也相當(dāng)吃力進(jìn)入90年代以后，隨著電子技術(shù)發(fā)展的突飛猛進(jìn)，利用人造假肢和微電子技術(shù)代替或補(bǔ)償殘疾人的運(yùn)動(dòng)功能，使之恢復(fù)自理生活能力和參加力所能及的勞動(dòng)，已成為假肢研制的主流方向，現(xiàn)代假肢，已由過去的機(jī)械牽引手發(fā)展為當(dāng)今的肌電假肢。本文在對(duì)目前已有的表面肌電SEMG信號(hào)特征提取和分類方法進(jìn)行廣泛調(diào)研和深入分析的基礎(chǔ)上，對(duì)應(yīng)用于肌電假肢控制的動(dòng)作SEMG信號(hào)進(jìn)行處理和識(shí)別，研究目的是提高動(dòng)作SEMG波形分類的準(zhǔn)確率和速度。主要研究?jī)?nèi)容、研究成果和創(chuàng)新點(diǎn)包括以下幾個(gè)方面1提出一種利用遞歸量化分析RQA提取動(dòng)作SEMG波形特征的新方法。通過對(duì)遞歸量化分析提供的十幾種參量進(jìn)行深入的研究，提取動(dòng)作SEMG信號(hào)的RQA參量作為特征參數(shù)，并采用BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)作SEMG波形的分類。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明采用RQA參量作為動(dòng)作SEMG波形的特征，能夠取得較好的分類效果。2基于16位MCU的SEMG實(shí)時(shí)控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和實(shí)現(xiàn)。硬件系統(tǒng)采用具有DSP功能的凌陽(yáng)16位MCU作為主控制器；信號(hào)處理上，采用過零率判別動(dòng)作SEMG波形的起止點(diǎn)，采用線性預(yù)測(cè)倒譜系數(shù)作為特征參數(shù)，采用動(dòng)態(tài)時(shí)間規(guī)劃DTW方法進(jìn)行分類。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過上述硬、軟件和處理算法的結(jié)合，可以獲得動(dòng)作SEMG信號(hào)較好的分類結(jié)果和較理想的處理速度，達(dá)到實(shí)時(shí)控制的目的。

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簡(jiǎn)介：電脈沖介導(dǎo)的DNA免疫DNAEP可以明顯增強(qiáng)DNA疫苗的免疫效果但其中的作用機(jī)理不明確我們希望從DNAEP免疫轉(zhuǎn)基因表達(dá)和DNAEP免疫后抗原遞呈兩個(gè)角度討論其中的具體過程和作用機(jī)理我們發(fā)現(xiàn)DNAEP免疫對(duì)作用區(qū)域的骨骼肌會(huì)造成一定程度的損傷骨骼肌的創(chuàng)傷隨著離電極距離增加而減弱在電極附近電脈沖將骨骼肌的肌束膜和肌內(nèi)膜擊穿釋放出游離的肌細(xì)胞這些肌細(xì)胞由于受到過度損傷而發(fā)生橫紋肌溶解導(dǎo)致壞死凋亡在離電極較遠(yuǎn)的區(qū)域電脈沖僅將肌束膜擊穿釋放出游離的肌細(xì)胞但并不會(huì)引起這些細(xì)胞壞死凋亡DNAEP免疫對(duì)骨骼肌的損傷將在局部區(qū)域引發(fā)較嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)DNAEP作用2小時(shí)后受損傷部位的骨骼肌中有大量的血球滲出這些細(xì)胞多數(shù)是多形核細(xì)胞到第3天炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞中多電脈沖介導(dǎo)的DNA疫苗骨骼肌內(nèi)免疫接種的轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)期表達(dá)和抗原遞呈機(jī)理的研究數(shù)是單個(gè)核細(xì)胞作用57天后骨骼肌中的炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞最多作用14天后炎癥反應(yīng)逐漸減輕成為灶性炎癥并最終大約于21天后基本消退在炎癥反應(yīng)的早期免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示骨骼肌中的浸潤(rùn)細(xì)胞主要為炎癥性巨噬細(xì)胞很少CDLLC陽(yáng)性細(xì)胞即DC細(xì)胞直到DNAEP作用后第14天炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞才出現(xiàn)DC細(xì)胞炎癥性DC細(xì)胞存在于骨骼肌中至電脈沖作用后第21天炎癥基本消失時(shí)為止在炎癥反應(yīng)中后期炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞中還有大量T細(xì)胞CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞都在電脈沖作用后第5天即可在骨骼中檢測(cè)到。CD4T細(xì)胞在電脈沖作用后第7天時(shí)數(shù)量達(dá)到最多；CD8T細(xì)胞在電脈沖作用后第14天時(shí)數(shù)量達(dá)到最多。CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞存在于骨骼肌中直到電脈沖作用后第21天由于這些T細(xì)胞浸潤(rùn)表達(dá)抗原的肌細(xì)胞因此它們可能是抗原特異性的DNAEP引起的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)一方面是由于骨骼肌中由于大量趨化因子基因表達(dá)增加對(duì)炎癥細(xì)胞趨化的結(jié)果CDNA芯片分析顯示DNAEP作用2小時(shí)后MIP1A基因表達(dá)增加約8倍MIP1B基因表達(dá)增加約4倍MIP1?；虮磉_(dá)增加約4倍MIP3A基因表達(dá)增加約3倍MCP2基因表達(dá)增加約3倍IP10基因表達(dá)增加約10倍LVMPHOTACTIN基因表達(dá)增加約27倍FRACTALKINE基因表達(dá)增加約9倍DNAEP還引起骨骼肌中趨化因子受體基因表達(dá)增加DNAEP作用2小時(shí)后CCR5基因表達(dá)增加約5倍CXCR4基因表達(dá)增加約4倍DNAEP引起的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)另一方面是骨骼肌中由于大量細(xì)胞壞死凋亡需要吞噬細(xì)胞如多形核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞清除細(xì)胞碎片DNAEP作用2小時(shí)后CASPASE8基因表達(dá)增加230倍CASPASE1基因表達(dá)增加了44倍CYPLAL基因表達(dá)增加了37倍CYPLA2基因表達(dá)增加了59倍MT2基因表達(dá)增加了6倍DNAEP作用后引流淋巴結(jié)中單核細(xì)胞數(shù)量沒有明顯變化但是引流淋巴結(jié)中的巨噬細(xì)胞數(shù)量增加約一倍DCS細(xì)胞數(shù)量增加約3倍而且DNAEP作用后引流淋巴結(jié)中CCR1～CCR9等趨化因子受體基因表達(dá)增加顯示T細(xì)胞活化DNAEP作用后組織中的炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞可以通過兩種方式獲得抗原GFP第一一些炎癥性單核細(xì)胞巨噬可以通過攝取質(zhì)粒DNA然后內(nèi)源性表達(dá)抗原直接轉(zhuǎn)染第二大多數(shù)炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞通過吞噬肌細(xì)胞分泌的外源蛋白得到抗原同時(shí)在引流淋巴結(jié)的T細(xì)胞區(qū)域可以觀察到裝載了抗原GFPQDS的炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞顯示炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞可能有抗原遞呈的作用應(yīng)用新的DNA免疫策略我們發(fā)現(xiàn)EP3DDNA免疫比EP1DDNA免疫或EPDNA免疫可以更加迅速的誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答而且免疫后2周時(shí)EP3DDNA免疫誘導(dǎo)的中和抗體水平顯著高于EP1DDNA免疫或EPDNA免疫誘導(dǎo)的中和抗體水平PT細(xì)胞在體外增殖以上結(jié)果表明炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞是DNAEP免疫后主要的抗原遞呈細(xì)胞另一方面我們發(fā)現(xiàn)在DNAEP作用后2小時(shí)骨骼肌中MYOD基因開始轉(zhuǎn)錄DNAEP作用后1天電脈沖的電極附近的單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)MYOD蛋白DNAEP作用后第3天電極附近的肌細(xì)胞發(fā)生橫紋肌溶解留下大片空隙DNAEP作用后第5天肌細(xì)胞開始再生DNAEP作用后第7天再生的肌細(xì)胞重新形成肌束DNAEP免疫后14天21天再生骨骼肌體積增大DNAEP免疫后60天受傷的骨骼肌基本恢復(fù)正常結(jié)果顯示DNAEP激活了衛(wèi)星細(xì)胞并分化成再生肌細(xì)胞應(yīng)用質(zhì)粒DNA標(biāo)記系統(tǒng)我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒DNA在骨骼肌中的分布可分成兩部分在離電極較遠(yuǎn)的區(qū)域質(zhì)粒DNA主要分布在肌細(xì)胞的間隙在電極附近區(qū)域質(zhì)粒DNA主要分布在活化的衛(wèi)星細(xì)胞內(nèi)對(duì)DNAEP作用后骨骼肌中報(bào)道基因GFP表達(dá)進(jìn)行系統(tǒng)研究表明第1天GFP主要表達(dá)在游離的肌細(xì)胞中第35天GFP主要表達(dá)在離電極較遠(yuǎn)的區(qū)域的預(yù)先存在的肌細(xì)胞中同時(shí)用CONFOCAL顯微鏡可以在新生肌中觀察到GFP表達(dá)第7天預(yù)先存在的肌細(xì)胞中的GFP表達(dá)減少同時(shí)由于新生肌細(xì)胞體積增大新生肌細(xì)胞中表達(dá)的GFP也有所增加在CONFOCAL顯微鏡可以更加容易觀察到第1421天預(yù)先存在的肌細(xì)胞中的GFP表達(dá)逐漸減少至觀察不到但是同時(shí)隨著再生肌細(xì)胞體積增大再生肌細(xì)胞中表達(dá)的GFP大量增加以至在普通顯微鏡下也可以觀察到結(jié)果進(jìn)一步顯示質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染了骨骼肌中的衛(wèi)星細(xì)胞衛(wèi)星細(xì)胞分化而來(lái)的電脈沖介導(dǎo)的DNA疫苗骨骼肌內(nèi)免疫接種的轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)期表達(dá)和抗原遞呈機(jī)理的研究再生肌細(xì)胞是骨骼肌中長(zhǎng)期表達(dá)轉(zhuǎn)基因的主要原因之一應(yīng)用LUCIFERASE報(bào)道基因定量研究DNAEP作用后基因表達(dá)結(jié)果表明持續(xù)中高水平約為最高值的120的基因表達(dá)可維持?jǐn)?shù)周基因輸送后28天綜上所述一方面DNAEP免疫引起較嚴(yán)重的以單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞為主的炎癥反應(yīng)多數(shù)炎癥性單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞通過吞噬肌細(xì)胞表達(dá)的抗原、少數(shù)可能通過吞噬DNA后表達(dá)抗原直接轉(zhuǎn)染然后遞呈抗原致敏免疫系統(tǒng)但是引流淋巴結(jié)中的DCS可能也起到了抗原遞呈的作用另一方面DNAEP免疫轉(zhuǎn)染了骨骼肌中激活了的衛(wèi)星細(xì)胞激活了的衛(wèi)星細(xì)胞分化成再生肌細(xì)胞使得骨骼肌能維持較長(zhǎng)時(shí)間的抗原表達(dá)抗原長(zhǎng)時(shí)間存在于骨骼肌中還有助于維持體內(nèi)產(chǎn)生高水平的中和抗體

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多川芎嗪治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：在口腔頜面外科中，創(chuàng)傷及腫瘤等疾患常引起的軟組織、骨組織的缺損，如何恢復(fù)缺損區(qū)的外形及功能，恢復(fù)患者的生活質(zhì)量，一直是臨床上的難題之一，長(zhǎng)期以來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的相關(guān)基礎(chǔ)研究與臨床實(shí)踐。目前能夠應(yīng)用于臨床的修復(fù)方法主要還是應(yīng)用自體骨移植修復(fù)，但這將使患者承受開辟第二手術(shù)區(qū)的痛苦，而且存在移植骨塑形難以與缺損骨形態(tài)一致等問題。近年來(lái)隨著細(xì)胞生物學(xué)及生物材料學(xué)的發(fā)展，組織工程學(xué)得到了快速發(fā)展，利用組織工程學(xué)方法和手段修復(fù)骨缺損是一種全新的骨修復(fù)模式。組織工程技術(shù)可以通過獲取少量的組織細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后與支架復(fù)合，構(gòu)建與病損區(qū)性狀結(jié)構(gòu)、生物學(xué)特性相近的細(xì)胞支架復(fù)合體，以修復(fù)缺損組織。但在構(gòu)建組織工程骨體內(nèi)移植修復(fù)缺損時(shí)，必須保持植入體內(nèi)的細(xì)胞成活并發(fā)揮功能。因此，在體內(nèi)、體外預(yù)構(gòu)一個(gè)有良好血液供應(yīng)的組織工程骨瓣，從而保證細(xì)胞支架復(fù)合物的功能發(fā)揮至關(guān)重要。本研究在以下方面對(duì)血管化組織工程骨進(jìn)行了初步研究成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞體外聯(lián)合共培養(yǎng)以觀察兩種細(xì)胞相互功能的影響；將兩種細(xì)胞共培養(yǎng)復(fù)合背闊肌瓣預(yù)構(gòu)血管化組織工程骨；應(yīng)用血管化組織工程骨修復(fù)兔下頜骨非連續(xù)性缺損。本研究分為五部分論文一兔成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定目的在體外培養(yǎng)兔成骨細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞并鑒定。方法取出生24H日本大耳白兔四肢長(zhǎng)骨作為成骨細(xì)胞來(lái)源，腎皮質(zhì)微血管為血管內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源，進(jìn)行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、應(yīng)用堿性磷酸酶染色、鈣結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞、Ⅷ因子免疫組化染色鑒定血管內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)果體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞磷酸酶染色陽(yáng)性、鈣結(jié)節(jié)染色為棕黑色鈣鹽沉積。血管內(nèi)皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，Ⅷ因子免疫組化染色陽(yáng)性，兩種細(xì)胞均可達(dá)到95％以上陽(yáng)性率。結(jié)論兔成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后，仍然保持自我增殖能力及各自功能。論文二外消旋聚乳酸對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響目的通過觀察外消旋聚乳酸PDLLA對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響，以確定其是否可作為組織工程的細(xì)胞支架材料。方法兩周齡日本大耳白兔解放軍總醫(yī)院動(dòng)物試驗(yàn)中心提供，無(wú)菌條件下取腎皮質(zhì)，1250胰蛋白酶和1100Ⅱ型膠原酶11混合37℃消化30MIN，離心1000RMIN10MIN。取沉淀加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基制成血管內(nèi)皮細(xì)胞混懸液，置于37℃、5％二氧化碳孵箱中，72H換液，細(xì)胞長(zhǎng)滿后傳代。將PDLLA浸于75％酒精4H，蒸餾水48H。1GPDLLA浸入含01％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基15ML中，放入37℃、5％二氧化碳孵箱中，7D。吸出浸提液，設(shè)浸提原液組、12液組。無(wú)菌封存于4℃冰箱中備用。將消毒好的支架材料置于24孔培養(yǎng)皿中，將血管內(nèi)皮細(xì)胞接種于支架上，37℃、5％二氧化碳孵箱孵育。于第10D將復(fù)合細(xì)胞的支架材料掃描電鏡觀察。將第3代血管內(nèi)皮細(xì)胞按1103濃度接種于96孔培養(yǎng)皿中，分別加入新配制的培養(yǎng)基、浸提原液組、12液組。分別于1，357DMTT法測(cè)光吸收值，檢測(cè)細(xì)胞活力。再通過下列計(jì)算公式相對(duì)增殖率RGR實(shí)驗(yàn)組吸光值陰性組對(duì)照組吸光值100％。根據(jù)RGR值評(píng)定毒性程度；RGR值≥100％為0級(jí)，75％99％為Ⅰ級(jí)，50％74％為Ⅱ級(jí)，25％49％為Ⅲ級(jí)，1％24％為Ⅳ級(jí)，0為Ⅴ級(jí)。結(jié)果細(xì)胞接種于支架后第10D掃描電鏡觀察可見，細(xì)胞吸附于材料表面，形態(tài)多樣，有多個(gè)突起，細(xì)胞跨越微孔表面或向孔內(nèi)張入，細(xì)胞間突起相連。細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果顯示支架浸提液對(duì)細(xì)胞活性無(wú)影響，原液組與浸提液組細(xì)胞活性無(wú)明顯差異P＞005。MTT實(shí)驗(yàn)證實(shí)PDLLA浸提液培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞1、3、5、7D后，細(xì)胞生長(zhǎng)良好。根據(jù)ISO和醫(yī)學(xué)材料生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞相對(duì)增殖率表明材料毒性分級(jí)為0或1級(jí)，說明材料無(wú)細(xì)胞毒性，均為合格。4結(jié)論血管內(nèi)皮細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)狀態(tài)良好并可分泌細(xì)胞基質(zhì)，PDLLA無(wú)細(xì)胞毒性，不影響細(xì)胞的生長(zhǎng)分化。論文三共培養(yǎng)下成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互功能影響及形態(tài)學(xué)觀察目的觀察共培養(yǎng)下成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互功能影響及形態(tài)學(xué)觀察。方法首先將成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞以10、11、21、41聯(lián)合直接共培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中，另將成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞以01、11、21、41聯(lián)合直接共培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上。將四組細(xì)胞分別培養(yǎng)3D、6D、9D，025％胰酶消化各組細(xì)胞并收集，超聲波破碎細(xì)胞，共四次間隔10S，4000轉(zhuǎn)分離心10MIN，收集上清液、按ALP試劑盒說明測(cè)定光吸收值并計(jì)算各組細(xì)胞的ALP含量。另將四組細(xì)胞分別培養(yǎng)3D、6D、9D，收集各組6孔培養(yǎng)基應(yīng)用骨鈣素放免試劑盒測(cè)定上清液中的骨鈣素的含量。將聯(lián)合直接共培養(yǎng)的兩種細(xì)胞分別于培養(yǎng)后的1D、3D、5D、7D取出蓋玻片，Ⅷ因子免疫組化組化染色后計(jì)數(shù)，繪制生長(zhǎng)曲線。結(jié)果在共培養(yǎng)初期各實(shí)驗(yàn)組ROB及RVEC保持各自細(xì)胞形態(tài)，隨共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至第9天時(shí)，兩種細(xì)胞失去各自細(xì)胞形態(tài)均呈長(zhǎng)梭形生長(zhǎng)，但未出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。在兩種細(xì)胞共培養(yǎng)的體系中，成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞比例為21組堿性磷酸酶活性測(cè)定、骨鈣素含量明顯高于其他兩實(shí)驗(yàn)組P＜005，而與對(duì)照組無(wú)明顯區(qū)別P＞005。各組血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量隨共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，其中在共培養(yǎng)第一天，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞數(shù)量無(wú)差異P＞005。從共培養(yǎng)第三天起至第七天，實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組3細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組有差異P＜005，實(shí)驗(yàn)組2與對(duì)照組無(wú)明顯差異而與其他兩實(shí)驗(yàn)組有顯著差異。4結(jié)論在成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞直接共培養(yǎng)中，兩種細(xì)胞無(wú)抑制現(xiàn)象，兩種細(xì)胞共培養(yǎng)比例為21時(shí)細(xì)胞功能促進(jìn)明顯，可以用于血管化組織工程骨的構(gòu)建。論文四成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)復(fù)合肌瓣預(yù)構(gòu)血管化骨的初步研究目的目的探討將成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)復(fù)合肌瓣預(yù)構(gòu)血管化組織工程骨的可能性，及血管化與成骨的關(guān)系。方法制作體積為2511CMPDLLA支架并用Ⅰ型膠原包埋備用。取乳兔24H四肢長(zhǎng)骨原代培養(yǎng)成骨細(xì)胞，腎皮質(zhì)原代培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞，并將傳代后的成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過凍存、復(fù)蘇處理。9只實(shí)驗(yàn)兔分3組，A組左側(cè)背闊肌植入ROB與RVEC比例為21細(xì)胞支架復(fù)合體，右側(cè)植入ROBPDLLA；B組左側(cè)為ROBRVECPDLLA、右側(cè)為PDLLA；C組左側(cè)為ROBPDLLA、右側(cè)PDLLA。2周、4周、8周后處死動(dòng)物大體觀察植入材料變化，HE染色鏡下觀察體內(nèi)成骨與血管化情況，以及血管化與成骨之間關(guān)系。結(jié)果大體觀察可見4周、8周時(shí)三組植入物體積減小，PDLLA植入組成有纖維組織并可見部分區(qū)域有毛細(xì)血管長(zhǎng)入。PDLLAROB、PDLLAROBRVEC組植入物表面均由含大量毛細(xì)血管肌纖維長(zhǎng)入。對(duì)于植入物同期標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組硬度明顯高于PDLLA組，且隨時(shí)間延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)組硬度呈現(xiàn)明顯遞增趨勢(shì)。單純PDLLA組植入后2周、4周、8周均未見骨組織形成，可見PDLLA降解，體積減小。ROBPDLLA組植入4周起可見骨組織形成，材料周圍可見有小血管長(zhǎng)入，隨時(shí)間延長(zhǎng)成骨量及血管化程度均有所增加。ROBRVECPDLLA組可見在支架內(nèi)部有大量毛細(xì)血管形成，支架周圍成骨細(xì)胞活躍，成骨能力較強(qiáng)，在體內(nèi)成骨能力及血管化程度均高于單純成骨細(xì)胞復(fù)合支架組。結(jié)論將兩種細(xì)胞復(fù)合支架后與背闊肌皮瓣聯(lián)合應(yīng)用可預(yù)構(gòu)血管化骨瓣，且成骨能力與血管化程度均很理想。論文五血管化組織工程骨復(fù)合體修復(fù)兔下頜骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究目的本實(shí)驗(yàn)旨在將成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)并構(gòu)建支架復(fù)合體以血管化組織工程骨方式修復(fù)兔下頜骨非連續(xù)性缺損。方法體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞經(jīng)凍存、復(fù)蘇、擴(kuò)增后備用。將PDLLA制成15107MM3，Ⅰ型膠原修飾、環(huán)氧乙烷消毒備用。將成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞以21比例滴加到支架上，體外培養(yǎng)10天。本實(shí)驗(yàn)共用12只日本大耳白兔建立兔雙側(cè)下頜骨缺損非連續(xù)性缺損模型，手術(shù)切除兔下頜骨體部15CM骨塊，保留上頜骨上緣。實(shí)驗(yàn)分為三組，A組成骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合PDLLA，B組單純成骨細(xì)胞復(fù)合PDLLA，C組單純PDLLA組。1～6號(hào)兔左側(cè)下頜骨缺損處植入A組，右側(cè)植入B組；7～9號(hào)兔左側(cè)下頜骨缺損處植入C組，右側(cè)植入A組；10～12號(hào)兔左側(cè)下頜骨缺損處植入B組，右側(cè)植入C組。手術(shù)后4周、8周通過大體標(biāo)本、形態(tài)學(xué)、X射線觀察骨缺損修復(fù)情況，修復(fù)區(qū)骨血管化情況等。結(jié)果大體觀察，8周時(shí)C組缺損處仍無(wú)明顯修復(fù)，材料質(zhì)地較軟，無(wú)骨組織形成。A組，8周時(shí)缺損處已大部分為骨組織修復(fù)，B組缺損修復(fù)范圍小于A組。形態(tài)學(xué)觀察，A組修復(fù)側(cè)血管周圍有新生軟骨組織形成，同時(shí)可見膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨兩種成骨方式。在材料中心區(qū)可見有血管形成，越靠近血管成骨越多。B組修復(fù)側(cè)可見新骨形成，血管自周圍組織長(zhǎng)入，故材料周圍可見毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)，材料中央血管化程度不高。C組材料修復(fù)側(cè)，材料內(nèi)充滿纖維結(jié)締組織，無(wú)明顯骨組織形成。X射線觀察，A組骨缺損區(qū)陰影面積明顯減小，材料植入?yún)^(qū)可見骨組織影像，仍低于正常骨組織密度，但較4周時(shí)影像密度明顯增高。B組缺損面積減小，骨組織影像增加。中心區(qū)影像低于周圍區(qū)域。C組缺損面積有所減小，但缺損區(qū)植入材料部分未見骨組織影像，周圍可見骨痂形成形象。結(jié)論在下頜骨缺損修復(fù)中，復(fù)合血管內(nèi)皮細(xì)胞與成骨細(xì)胞的細(xì)胞支架復(fù)合體無(wú)論在成骨還是血管化方面均好于單純成骨細(xì)胞復(fù)合支架植入組。單純支架組則未見骨形成。

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