HIF-2α在乳腺癌中的表達和臨床意義及其與上皮間質轉化關系的研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，非特殊型浸潤性癌（Non-specific type of invasive carcinoma），是浸潤性乳腺癌最常見的組織學類型，占40-70％左右。研究發(fā)現(xiàn)，缺氧微環(huán)境是實體腫瘤的典型特征，被認為是導致腫瘤進展及預后差的始動因素，為了適應缺氧的微環(huán)境，腫瘤細胞會產生一系列生物學行為的改變，其中缺氧誘導因子(hypoxia induced factors，HIFs)發(fā)揮著重

2、要的調節(jié)作用。目前已發(fā)現(xiàn) HIFs有三個亞型：HIF-1α、HIF-2α以及 HIF-3α，以往的研究主要集中在HIF-1α，主要是HIF-1α與乳腺癌血管生成、腫瘤增殖與轉移、耐藥相關蛋白等方面， HIF-2α的研究相對較少。上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）指由非移動的、極性排列的上皮細胞向移動的、非極性排列的間質細胞轉變，同時獲得向遠處器官遷移、生長、種植的潛能的過程。在惡

3、性腫瘤可導致腫瘤細胞遷移和侵襲能力增強，腫瘤侵襲性增加。
　　HIF-2α是缺氧應激作用下產生的轉錄因子，其表達可以有效調控靶基因活性打破細胞內氧失衡狀態(tài)，比如新生血管形成基因(CEGF、PIGF)、增殖轉移基因(MMP、SDF1、CXCR4、LOX)、上皮間質轉化(SNAIL、TWIST、SIP)等，有助于新生血管生成的維持，也可以對腫瘤的浸潤轉移產生影響。研究發(fā)現(xiàn)，HIF-2α的異常表達參與腫瘤放化療抵抗，提示HIF-2α與腫

4、瘤的不良預后有關，HIF-2α有可能成為腫瘤治療的靶點。Twist家族是HIF-2α眾多調控基因中的一個，Twist2也稱為Dermo1，是參與調控上皮間質轉化的主要轉錄因子，可以誘導腫瘤細胞EMT的過程進而利于其遷徙、侵襲、轉移。
　　乳腺浸潤性癌發(fā)生上皮間質轉化一定程度上決定了腫瘤轉移，提升了死亡率縮短了生存期，嚴重影響患者預后。目前有關乳腺癌組織中HIF-2α與上皮間質轉化關系的報道較少，本課題以乳腺非特殊型浸潤性癌為研究對

5、象，采用免疫組織化學SP法和原位雜交( ISH)技術分別檢測乳腺浸潤性癌原發(fā)灶、良性纖維腺瘤、癌旁正常組織中HIF-2α蛋白和mRNA的表達情況，同時檢測癌組織中Twist2、E-cadherin以及vimentin的表達，探討HIF-2α與上皮間質轉化是否存在關聯(lián)，并分析HIF-2α對乳腺癌預后的影響因素，為HIF-2α是否可以作為乳腺癌臨床治療的靶點提供實驗依據。
　　方法：
　　1.收集2011年8月-2012年1月乳

6、腺非特殊型浸潤性癌石蠟標本92例、癌旁正常組織30例、纖維腺瘤21例，采用免疫組化SP法檢測各組中 HIF-2α、Twist2、E-cadherin、vimentin蛋白的表達，分別分析其表達與臨床病理參數(shù)的相關性以及他們之間的關聯(lián)。
　　2.收集2015-2016年乳腺非特殊型浸潤性癌石蠟標本22例、癌旁正常組織20例、纖維腺瘤20例，采用原位雜交方法檢測組織切片中HIF-2α mRNA的表達情況，從基因水平檢測其表達在乳腺癌中

7、的差異。
　　3.對92例乳腺癌進行隨訪，采用Kapln-Meier法和 Log-rank檢驗進行生存分析，多因素Cox比例回歸模型分析乳腺癌預后的影響因素。
　　結果：
　　1.HIF-2α蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和30例癌旁正常組織中陽性率分別為71.73%（66/92）、42.85%（9/21）和36.66%（11/30），HIF-2αmRNA在22例乳腺癌、20例纖維腺瘤和20例癌旁正常組織中陽性率分

8、別為77.27%（17/22）、25.00%（5/20）和15.00%（3/20），HIF-2α蛋白以及mRNA在這三組中的表達均呈現(xiàn)一致性，很明顯看出，陽性表達較高的是乳腺癌組（P均＜0.05）。HIF-2α蛋白陽性表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、分子分型有關（P<0.05），與患者年齡(P=0.921)、組織學分級(P=0.566)、TNM分期(P=0.209)均無關。
　　2. Twist2蛋白在92例乳腺癌、21例纖維腺瘤和3

9、0例癌旁正常組織中陽性率分別為57.60%（53/92）、19.04%（4/21）和16.66%（5/30），且三組之間的不同表達有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Twist2蛋白的表達與腫瘤的組織學分級、淋巴結轉移和分子分型有關（P<0.05），與患者年齡（P=0.915）、腫瘤大?。≒=0.736）、TNM分期（P=0.757）均無關。
　　3.上皮標志物 E-cadherin在乳腺癌組陽性率58.69%（54/92）低于腺瘤組8

10、5.71%（18/21）和癌旁正常組93.33%（28/30），其表達與腫瘤的大小、組織學分級、淋巴結轉移和分子分型有關（P<0.05），與患者年齡（P=0.615）、TNM分期（P=1.000）均無關。間質標志物vimentin在乳腺癌組陽性率46.73%（43/92）高于腺瘤組23.83%（5/21）和正常組13.33%（4/30），其表達與腫瘤的淋巴結轉移、TNM分期和分子分型有關（P<0.05），與患者年齡（P=0.724）、腫

11、瘤大小（P=0.970）、組織學分級（P=0.129）均無關。
　　4.對乳腺癌組織進行檢測后發(fā)現(xiàn)，蛋白HIF-2α和Twist2的表達是存在正相關的（r=0.452，P=0.000），而上皮以及間質兩標志物之間的表達存在顯著負相關（r=-0.570，P=0.000），HIF-2α和Twist2蛋白的表達均與E-cadherin負相關，與vimentin正相關（P均＜0.05）。
　　5. HIF-2α陰性組、Twist2陰

12、性組、E-cadherin陽性組和vimentin陰性組分別比其另一組擁有更高的總生存率和更長的平均生存時間，但只有 HIF-2α組和E-cadherin組K-M生存曲線差異存在統(tǒng)計學意義（P<0.05），Twist2組和vimentin組K-M生存曲線不存在統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　6.多因素生存分析顯示只有淋巴結轉移（RR=6.022，95%CI2.852~12.717， P=0.000）、腫瘤大?。≧R=2.621，

13、95%CI1.123~6.117，P=0.026）和HIF-2α狀態(tài)（RR=3.821，95%CI1.092~13.372，P=0.036）可以作為乳腺癌患者生存預后的獨立影響因素（P＜0.05），而其他預后指標，比如年齡、組織學分級、TNM分期、分子分型等均為乳腺癌的非獨立預后因素（P＞0.05）。
　　結論：
　　HIF-2α在乳腺癌中異常表達，可能通過介導Twist2參與到乳腺癌EMT過程中，引起了腫瘤的浸潤轉移并影響